导读:本文包含了重组免疫毒素论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:毒素,免疫,抗体,靶向,杆菌,南瓜,纳米。
重组免疫毒素论文文献综述
张彩云,蔡玉梅,熊佳妮,谢捷明[1]（2019）在《重组免疫毒素bp/CUS的制备及体外抗肿瘤活性测定》一文中研究指出目的研究靶向表皮生长因子受体(EGFR)的双特异性重组免疫毒素bp/CUS的体外抗肿瘤活性。方法采用基因重组技术将EGFR纳米抗体7D12和9G8与南瓜蛋白(CUS)基因融合,通过大肠杆菌原核表达系统,IPTG诱导表达重组免疫毒素bp/CUS;流式细胞术检测bp/CUS与EGFR过表达的肿瘤细胞系(HepG2,A549,SW116)和EGFR低表达的肿瘤细胞系(SW620)的结合活性;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测免疫毒素对Hep G2的诱导凋亡作用;SRB法检测EGFR双特异性纳米抗体7D12-9G8、CUS及bp/CUS对上述肿瘤细胞增殖的影响(作用5d)。结果SDS-PAGE及Western印迹分析显示重组免疫毒素bp/CUS成功表达,相对分子质量约58 ku且保留了与EGFR阳性细胞株的结合能力;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果表明bp/CUS能够显着诱导HepG2细胞凋亡并呈剂量依赖性;SRB法显示单独的7D12-9G8对上述四种细胞基本无作用(IC50均>1000 nmol·L~(-1)),CUS对上述4种细胞的IC_(50)分别为0.114±0.004,0.075±0.012,0.159±0.061和0.207±0.002μmol·L~(-1),而bp/CUS对HepG2,SW1116和A549细胞具有明显的增殖抑制作用(并呈时间和剂量依赖性),IC_(50)分别为7.758±1.200,25.84±8.623和7.302±0.186 pmol·L~(-1),其靶向指数(TI)分别14695,2902和21775,而对SW620的作用不明显(IC_(50)>50 nmol·L~(-1))。结论本研究成功制备了靶向EGFR的双特异性纳米抗体与南瓜蛋白融合的重组免疫毒素bp/CUS,对EGFR过表达的肿瘤细胞具有明显的靶向杀伤作用。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2019年10期）
杨春蕾,王艳辉,刘向军,张媛,张旺[2]（2019）在《ScFv-PE40重组免疫毒素的研究进展》一文中研究指出最早提出导向治疗的概念是德国化学家Erhlich,他在1906年就提出了导向治疗的概念~([1]),但是真正让导向治疗实现的是Moolten和Cooperband[2]等人,他们在1970年制备了世界上第一个免疫毒素。也就是由单克隆抗体与毒素、药物、放射性核素等组成的传统免疫毒素,此类免疫毒素的稳定性和均一性都比较差,因为(本文来源于《吉林畜牧兽医》期刊2019年08期）
王众[3]（2019）在《重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv及其衍生物的制备和体外活性探究》一文中研究指出第叁代重组免疫毒素是靶向治疗癌细胞的一个热点。与传统放疗和化疗方法相比,免疫毒素对癌细胞具有靶向专一性和高效凋亡毒性,具有广阔应用前景。20世纪70年代末,白喉毒素因被发现对动物细胞具有很强的诱导细胞凋亡活性而被深入研究。经过30多年发展,白喉毒素诱导动物细胞凋亡机制和空间构象已被探究清晰,并被广泛应用于重组免疫毒素的制备。本课题藉由基因工程技术将白喉毒素N端389个氨基酸(DAB389)和靶向人表皮生长因子受体-2(HER2/neu)抗体单链可变片段(4D5 scFv)通过柔性链接(G4S)3连接,构建重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv。由于目的蛋白DAB389-4D5 scFv在大肠杆菌宿主BL21(DE3)中表达水平很低,通过对DAB389基因翻译起始序列(TIR)进行了同义密码子优化,将TIR mRNA最小折迭自由能△G从-16.4提高到-8.4 kcal/mol,使DAB389-4D5 scFv占上清可溶蛋白的表达水平从低于5%提高到36.7%。经过疏水作用和离子交换层析,目的蛋白纯度达到98%,得率达到30 mg/L。经MTT实验结果计算,DAB389和DAB389-4D5 scFv对HER2/neu过表达卵巢癌细胞SK-OV-3的IC50值分别为15 nM和0.37 nM,表明4D5 scFv对HER2高表达的SK-OV-3细胞具有较好的靶向选择性。而且,当DAB389-4D5 scFv的浓度低于5 nM,其对HER2阴性的人胚胎肾正常细胞HEK-293没有增殖抑制作用。激光共聚焦免疫荧光分析结果表明DAB389-4D5 scFv对SK-OV-3靶向结合,而对HEK-293细胞无选择性,证明了4D5 scFv与HER2结合极大地提高了DAB389进入细胞的效率。流式细胞实验结果表明DAB389-4D5 scFv能强烈诱导SK-OV-3细胞的凋亡和坏死,而对HEK-293无明显增殖抑制作用。总之,本课题为治疗HER2阳性癌细胞提供了一种新的选择。为进一步提高DAB389对肿瘤细胞的靶向性,本课题将DAB389与两个4D5 scFv融合,构建重组免疫毒素DAB389-4D5 scFv-4D5 scFv,其对SK-OV-3的IC50值为0.35 nM,证明了一个4D5 scFv已足够提高DAB389靶向结合效率。将癌细胞靶向穿膜肽BR2融合到4D5 scFv的C端,构建DAB389-4D5 scFv-BR2,其对SK-OV-3的IC50值为0.13 nM,其毒性与DAB389-4D5 scFv相比提高3倍。为了实现免疫毒素活性的光学调控,将光控剪切内含肽InN-LOV2-InC插入到DAB389-4D5 scFv特定位点,并对其光控自我剪接发挥抗肿瘤活性进行了初步探究。(本文来源于《华东理工大学》期刊2019-05-20）
纪洪帅,郭锦瑞,杨颖,毛伟平[4]（2018）在《抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测》一文中研究指出目的:构建基于抗B7-H4单链抗体(sc Fv)的重组毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,检测毒素蛋白的抗肿瘤作用。方法:通过重迭延伸PCR(SOE-PCR)技术将anti-B7-H4-scFv基因和毒素PE38KDEL基因进行连接,重组基因克隆到原核表达载体pET28a(+)中表达,蛋白经变复性和镍柱亲和层析(Ni-NTA)纯化后进行Western blot鉴定;间接ELISA和流式分析技术进行特异性鉴定。利用MTT法和皮下移植瘤模型实验,检测毒素对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。结果:酶联后得到重组表达载体pET28a-anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL,纯化后的毒素蛋白对肿瘤细胞具有一定杀伤力,并且在肿瘤模型实验中能抑制体内肿瘤的生长。结论:成功构建了基于抗B7-H4单链抗体的重组毒素表达体系,经鉴定重组毒素蛋白有良好的生物学功能活性和抗肿瘤活性。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2018年03期）
纪洪帅[5]（2018）在《抗B7-H4-scFv/PE38KDEL重组免疫毒素的表达和功能性检测》一文中研究指出本研究通过SOE-PCR技术将抗B7-H4单链抗体基因与毒素PE38KDEL基因进行连接,将得到的重组免疫毒素基因anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL亚克隆到原核表达载体pET28a中诱导表达。重组免疫毒素先通过变复性得到可溶蛋白,在经过镍柱纯化得到较单一的目的蛋白,并用免疫印迹鉴定蛋白的表达情况;后分别利用间接ELISA、流式细胞术和Western blot检测重组蛋白与B7-H4抗原的结合活性;通过MTT法和皮下异种移植瘤模型实验,检测毒素蛋白对体外、内肿瘤细胞的抑制作用,处死荷瘤鼠后,解剖瘤块并对肿瘤组织进行HE染色和免疫组化分析。具体实验流程如下:1、重组免疫毒素anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL基因的扩增、克隆和重组表达载体 pET28a/anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL 的构建先分别扩增出单链抗体anti-B7-H4-scFv基因和修饰后的毒素PE38KDEL基因,再利用SOE-PCR技术将这两段基因连接。PCR反应结束后,将目的条带进行割胶回收。将回收的目的基因anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL与pUM19-T Vector按照试剂盒进行T-A克隆,保留测序结果正确的菌株。用EcoRⅠ和NotⅠ限制性内切酶对pET28a(+)质粒和anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL基因进行双酶切。所得的连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中,涂含抗生素的平板进行筛选,次日挑取平板上长出的阳性克隆送测鉴定,测序正确的阳性菌株-80 ℃保存。2、重组免疫毒素Anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL的表达、纯化及活性检测将含有正确 pET28a/anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL 重组载体质粒的 BL21(DE3)表达菌株在不同条件下诱导表达。利用SDS-PAGE分析蛋白在不同条件下的表达情况,并找出最优表达条件。在最优的条件下扩大培养并收集产物,将所得的包涵体沉淀进行变复性处理,以获得更多的可溶性上清。表达产物带有His标签可与镍柱结合,以此纯化蛋白,并用不同浓度的咪唑洗脱并收集洗脱液。把洗脱的蛋白液进行透析,浓缩,收集及鉴定。间接ELISA鉴定重组毒素蛋白和B7-H4抗原蛋白的亲和活性;采用间接荧光标记的方法,运用流式细胞术检测免疫毒素对人源乳腺癌细胞MCF-7、正常人肾皮细胞293a和人源肝癌细胞HepG2这3种细胞的结合活性。3、重组毒素蛋白Anti-B7-H4-scFv-PE38KDEL在体外和体内的生物学功能鉴定分别从体内和体外两部分实验检测重组毒素蛋白的生物学功能,体外利用MTT 实验在 5 个浓度梯度(0.01、0.10、1.00、10、100ug/ml)下,分别在 12h、24h、36h和48h测定重组毒素对B7-H4抗原高表达的肺癌细胞A549、少表达的肝癌细胞HepG2和不表达的正常细胞293T细这叁种细胞增殖的影响。利用台盼蓝染色检测毒素蛋白(0.01、1.00、100 ug/ml)对MCF-7、HepG2、293a叁种细胞的作用,并计算存活率。体内实验建立小鼠肿瘤异种移植模型,将人源肺癌A549细胞调整到一定数量注射到小鼠皮下建立模型,待瘤长到一定大小时,随机分为空白对照组、阳性对照组和实验组,空白对照组注射生理盐水,阳性对照组注射紫杉醇,实验组注射抗体蛋白,连续隔天给药,一共注射七次,期间记录小鼠体重和肿瘤体积变化。最后处死荷瘤鼠,对取出的瘤组织进行称重、固定,并进行HE染色和免疫组织化学分析。(本文来源于《南京师范大学》期刊2018-03-19）
邓翠敏[6]（2017）在《重组免疫毒素rE/CUS的制备及体外抗肿瘤作用研究》一文中研究指出研究目的以靶向EGFR的纳米抗体7D12为载体,南瓜蛋白作为“弹头”,采用基因工程的方法,设计、构建、表达及纯化重组免疫毒素rE/CUS,检测其体外抗肿瘤活性。研究方法1.构建重组免疫毒素rE/CUS的表达载体:根据本课题组已知的CUS基因及纳米抗体7D12基因序列,设计引物,并引进合适的酶切位点和保护性碱基。以p ET-32a-CUS和p ET-32a-7D12为模版,进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物纯化后,挑选阳性克隆进行测序;将测序正确的CUS基因及纳米抗体基因通过(G4S)3连接,通过重迭延伸PCR进行扩增,扩增产物纯化后,进行酶切验证,挑选阳性克隆测序。经过重组克隆筛选,将测序正确的阳性克隆菌转化E.coli;通过原核表达系统表达重组免疫毒素rE/CUS,IPTG低温诱导表达,并通过Ni离子亲和层析纯化目的蛋白。2.采用SDS-PAGE与Western blot法鉴定重组蛋白rE/CUS表达结果。3.流式细胞术检测肿瘤细胞株肝癌细胞(HepG2)、非小细胞肺癌细胞(A549)、大肠癌细胞(SW116)和结肠癌细胞株SW620的EGFR的表达情况及重组免疫毒素rE/CUS与各肿瘤细胞株的结合活性。4.采用磺酰罗丹明B比色法,检测重组免疫毒rE/CUS对肿瘤细胞株肝癌细胞(Hep G2)、非小细胞肺癌细胞(A549)、大肠癌细胞(SW116)和结肠癌细胞株SW620的体外杀伤作用研究。5.采用流式细胞术检测不同浓度的rE/CUS诱导肝癌细胞(HepG2)、非小细胞肺癌细胞(A549)的凋亡情况。6.Western blot法检测rE/CUS对HepG2细胞PI3K、Akt、mTOR、P70S6K、Bax、Bcl-2、Caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白表达水平的影响。研究结果1.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳可见1100bp特异性条带,与预期大小一致,测序结果表明,rE/CUS全长基因1161bp,编码386个氨基酸,表明重组质粒构建成功。2.重组免疫毒素经IPTG诱导表达,获得带有多聚组氨酸(His)6的融合蛋白,超声裂解显示蛋白大部分以包涵体的形式存在于沉淀中,部分蛋白可溶性表达于溶液中,经Ni离子亲和层析柱纯化,每升菌液中获得5mg的可溶性蛋白。3.SDS-PAGE结果可见42k Da处有一特异性条带,与预期的重组免疫毒素的分子量大小一致,Western blot显示重组蛋白rE/CUS可与南瓜蛋白抗体及鼠-抗His抗体特异性结合。4.rE/CUS与EGFR高表达的肿瘤细胞株肝癌细胞(Hep G2)、非小细胞肺癌细胞(A549)、大肠癌细胞(SW116)具有结合活性,而与EGFR低表达的结肠癌细胞株SW620无结合活性。5.rE/CUS对肿瘤细胞株的杀伤作用研究结果表明,单用7D12对EGFR高表达的肿瘤细胞株(Hep G2、A549和SW116)和EGFR阴性细胞株SW620均无明显的增殖抑制作用,r CUS对上述四种细胞有一定的增殖抑制作用,作用72h的IC50分别为(466.3±0.483)nmol/L、(716±0.760)nmol/L、(208.33±0.056)nmol/L和(263±0.044)nmol/L;重组免疫毒素rE/CUS对Hep G2细胞、A549细胞和SW116细胞的增殖抑制作用明显,且呈剂量依赖性和时间依赖性,作用72h的IC50分别为(2.15±0.226)nmol/L、(18.33±0.018)nmol/L和(2.33±0.032)nmol/L,而对SW620细胞增殖抑制作用弱,作用72h的IC50为(463±0.086)nmol/L。6.流式细胞术显示,rE/CUS可诱导肝癌细胞HepG2和非小细胞肺癌细胞A549凋亡,32nmol/L rE/CUS诱导Hep G2的凋亡率为47.4%,10nmol/L rE/CUS诱导A549细胞的凋亡率为56.3%。7.Western blot法检测结果显示,不同浓度的rE/CUS作用于Hep G2细胞,细胞PI3K、AKT、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白表达逐渐减弱,Bax、Caspase 9、cleaved-caspase 3蛋白表达逐渐增强,呈明显的浓度依赖性。结论1.本研究成功构建了重组免疫毒素rE/CUS的表达载体,诱导表达并纯化重组蛋白rE/CUS。2.rE/CUS对EGFR高表达的肿瘤细胞株肝癌细胞(Hep G2)、非小细胞肺癌细胞(A549)、大肠癌细胞(SW116)具有显着的杀伤作用。3.rE/CUS诱导Hep G2细胞凋亡的机制可能与下调PI3K、Akt、m TOR、P70S6K、Bcl-2蛋白水平的表达,进而激活caspase9,并最终激活下游caspase3有关。(本文来源于《福建医科大学》期刊2017-06-01）
张嵩[7]（2017）在《重组免疫毒素rCCK_(96-104)PE38的制备及其抗结肠癌作用》一文中研究指出结肠癌是最常见的消化道肿瘤之一,世界范围内每年新增结肠癌患者102万,并有约53万人死于结肠癌。其发病率在我国恶性肿瘤发病率中位列第5,并且以4.2%的增速持续增长,远远高于2%的国际水平。目前,结肠癌治疗首选是手术治疗,通过外科手术将肿瘤组织切除,但由于可能存在微转移灶,肿瘤组织切除后仍有很高的复发和转移几率,所以大多数结肠癌患者还需要进行化疗和放疗,以减少复发。分子靶向药物的发明为结肠癌治疗提供了新的途径。分子靶向治疗是以肿瘤细胞上较普通细胞显着高表达的蛋白为基础,合成针对该蛋白的阻断药物,从而选择性的杀死肿瘤细胞。研究发现,胆囊收缩素2型受体(即CCK2R)在诸多肿瘤细胞尤其是结肠癌细胞上过表达,因此可以作为鉴别肿瘤的分子标记物。由于CCK2R与胆囊收缩素(CCK)高度亲和,因此,本研究创新性的将CCK与绿脓杆菌外毒素(PE)通过基因工程技术,融合成为新型重组毒素,可以特异性的结合并杀死CCK2R高表达的结肠癌细胞,为结肠癌的非手术治疗方案提供了指导。研究发现,胆囊收缩素CCK在肿瘤细胞的浸润和转移过程中发挥重要作用,这种作用主要是通过与CCK2R的高度亲和性实现的。因此在本研究中,使用基因工程技术将CCK上具有靶向CCK2R功能的第96至104号氨基酸Asp-Tyr-Met-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-Gly反向编译为Gly-Phe-Asp-Met-Trp-Gly-Met-Tyr-Asp的重组型r CCK96-104,并利用柔性linker HMAEE连接在PE38毒素N端,组合成为新型重组毒素r CCK96-104PE38基因。主要优点是将CCK的活性中心暴露出来,以利于重组毒素与细胞上CCK受体特异结合。将该重组毒素DNA片段与p ET28a质粒重组连接,并转化到大肠杆菌BL21,构建了重组毒素的原核表达载体BL21(DE3)(p ET28a-r CCK96-104PE38),通过0.1 m M的IPTG诱导,16℃连续摇培18 h后,成功表达出可溶性的重组毒素r CCK96-104PE38。设计的重组毒素蛋白含有6聚组氨酸标签,可通过Ni-NTA亲和层析进行纯化,为进一步减小重组毒素的免疫原性,使用r TEV蛋白酶(烟草蚀纹病毒蛋白酶)将组氨酸标签切除。为了尽可能保持重组毒素活性,使用冻干方式保存蛋白,5%麦芽糖作为冻干保护剂。经间接免疫荧光、流式细胞术等实验验证了重组毒素r CCK96-104PE38能够特异性吸附高表达CCK2R的结肠癌细胞,并在内化后引起细胞凋亡,而对低表达或不表达CCK2R的细胞没有显着影响。使用CCK-8法测定了r CCK96-104PE38对多种细胞的半抑制率浓度(IC50),初步确定了r CCK96-104PE38的结肠癌靶向。建立了HCT116结肠癌裸鼠肿瘤模型,通过尾静脉连续给药的方式,结果证明r CCK96-104PE38蛋白能够有效抑制肿瘤组织生长和扩散,且毒副作用弱(本实验没有发现可见副作用),适合长期给药治疗。以上结果说明重组毒素r CCK96-104PE38是一种很有潜力的结肠癌靶向药物,有望为结肠癌的非手术治疗提供新的途径。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-06-01）
于远[8]（2017）在《人源化的CD7纳米抗体型重组免疫毒素展现出有希望的抗急性T淋巴细胞性白血病的潜能》一文中研究指出纳米抗体又叫VHHs,来源于骆驼血清中的重链抗体的重链可变区。它们的特殊的物理化学性质,能够人源化改造和独特的抗原识别性能使得它们成为靶向递送生物活性成分的杰出的候选者,包括重组免疫毒素。在我们先前的努力中,我们已经成功地构建了单价和双价的基于CD7的纳米抗体型重组免疫毒素,它们能够有效地激发CD7阳性恶性肿瘤细胞的凋亡。为了寻求将这些重组免疫毒素向临床应用转化的可能性,我们人源化了纳米抗体序列(称为dhuVHH6),并且通过删除PE毒素区域Ⅱ的绝大部分,进一步截短了假单胞杆菌外毒素A(PE)来源的PE38毒素去产生一个更加溶酶体耐受的形式,此截短体被叫做PE-LR。方法与结果:叁种新型免疫毒素被成功构建,它们分别是dhuVHH6-PE38、dVHH6-PE-LR、以及dhuVHH6-PE-LR。这些重组免疫毒素在大肠杆菌中获得表达,体现了纳米抗体免疫毒素容易在原核表达系统进行可溶性表达的优势。流式细胞分析结果表明所有的免疫毒素仍保留有对CD7阳性的T细胞白血病细胞株的特异性结合能力,与CD7阴性对照细胞不产生结合。激光共聚焦显微镜检测到这些蛋白一旦与CD7阳性细胞结合后,能够被内吞到胞浆中,而这个现象不会出现在CD7阴性的细胞中。WST-8实验表明所有的免疫毒素均保留有对CD7阳性细胞系和原代T-ALL细胞的高效特异性的生长抑制能力。进一步的体内动物模型试验显示,人源化dhuVHH6-PE38免疫毒素在移植了CEM细胞的NCG小鼠模型中,能够在耐受较高剂量的水平上显着延长小鼠的存活期,且没有造成明显的小鼠体重下降。更进一步的体内动物模型显示,dhuVHH6-PE38能显着延长移植了病人来源的T-ALL细胞的NCG小鼠的生存期,有一个长达~40%的生存期改善。然而,尽管dhuVHH6-PE-LR在体外显示出强大的抗肿瘤效果,它的体内的抗肿瘤效果却令人失望。结论:我们成功构建了一个靶向CD7分子的改进型纳米抗体免疫毒素dhuVHH6-PE38,并且显示出它在治疗CD7阳性的恶性肿瘤,特别是急性T淋巴细胞性白血病上的潜力。(本文来源于《苏州大学》期刊2017-04-01）
吕欣欣[9]（2016）在《重组免疫毒素Gigantoxin-4-4D5 scFv的制备、体外活性研究及链接优化》一文中研究指出免疫毒素是靶向抗肿瘤药物一个新的研究热点,具有良好的应用前景。传统的免疫毒素主要是通过进入细胞内部而发挥作用,在实体瘤中效果不理想,有一定的局限性。本文利用柔性链接(G4S)3将能破坏细胞膜的海葵溶细胞素Gigantoxin-4和靶向肿瘤细胞表面人表皮生长因子受体-2 (HER2/neu)的单链抗体4D5 scFv连接,制备新型的免疫毒素。将SUMO标签融合在Gigantoxin-4-4D5 scFv的N端,构建pET-28a(+)/SUMO-Gigantoxin-4-4D5 scFv重组质粒,实现了在大肠杆菌BL21(DE3)中的可溶表达,目的蛋白占表达上清的9.8%。通过镍柱及弱阳离子交换柱对重组蛋白进行纯化,最终得到纯度达96%的目的蛋白,1L发酵液中可以获得14.3 mg的Gigantoxin-4-4D5 scFv。MTT实验表明Gigantoxin-4-4D5 scFv对高表达HER2的卵巢癌细胞SK-OV-3和乳腺癌细胞SK-BR-3有强烈的抑制作用,IC50分别为0.171和0.158 nM,而对于HER2阴性的卵巢癌细胞OVCAR-3和正常人胚肾细胞HEK-293几乎没有影响,且Gigantoxin-4-4D5 scFv的溶血活性HC50为18.9 nM。利用激光共聚焦显微镜检测发现Gigantoxin-4-4D5 scFv能特异结合在高表达HER2的SK-OV-3细胞膜上,而对HEK-293细胞没有选择性,且4D5 scFv的加入能抑制Gigantoxin-4-4D5 scFv对SK-OV-3细胞的作用。扫描电镜及胞外乳酸脱氢酶(LDH)活性实验证明Gigantoxin-4-4D5 scFv能破坏SK-OV-3细胞膜,引起细胞坏死,对SK-BR-3细胞也有同样的作用。流式实验证明Gigantoxin-4-4D5 scFv不仅能引起SK-OV-3和SK-BR-3细胞坏死,还能诱导凋亡,而对OVCAR-3和HEK-293细胞则没有影响。体外活性实验证明Gigantoxin-4-4D5 scFv能特异地结合高表达HER2的肿瘤细胞,通过坏死和凋亡引起细胞死亡,而对正常细胞和HER2阴性的肿瘤细胞没有影响,是一个非常具有潜力的靶向高表达HER2肿瘤的免疫毒素。融合蛋白之间的链接对蛋白的结构及活性起着至关重要的作用,为了进一步得到抗肿瘤效果更好的重组蛋白,对Gigantoxin-4-4D5 scFv之间的链接从长短和刚柔两方面设计了如下六个新的链接：①(G4S)2,②(G4S)4,③PSTPPGGS,④(PKPSTPPGGS)2, ⑤GGSPKPSTPPGGGS,⑥GGS(PKPSTPP)2GGGS.采用镍柱及弱阳离子交换柱对蛋白进行纯化,MTT和溶血实验表明④号链接蛋白的溶血活性大大降低,但对SK-OV-3细胞的活性基本不变,相对于原始的蛋白抗肿瘤潜力更大。(本文来源于《华东理工大学》期刊2016-05-10）
胡小波,谢聪,张彩平,龙石银,曹朝晖[10]（2016）在《重组免疫毒素TRAIL DR5/ScFv-PE25的构建及活性检测》一文中研究指出目的:构建绿脓杆菌外毒素PE融合抗TRAIL DR5单链抗体基因TRAIL DR5/Sc Fv的原核表达载体,诱导表达,并检测其生物学功能。方法:根据TRAIL DR5单链抗体HGS-ETR2的氨基酸序列,优化密码子,合成全长的编码序列作为模板,PCR技术扩增TRAIL DR5/Sc Fv基因,基因重组技术将两段TRAIL DR5/Sc Fv与PE25基因连接,组成TRAIL DR5/Sc Fv-PE25融合基因。重组质粒转化E.coli BL21(DE3),离子交换层析和亲和层析技术纯化重组蛋白。WST-8技术检测细胞毒性。结果:成功构建了重组免疫毒素基因TRAIL DR5/Sc Fv-PE25,重组蛋白经纯化后,每升发酵液可得到4.95 mg融合蛋白(纯度95%),该融合蛋白具有抑制A431/H9和Panc 3.014癌细胞增殖的作用。结论:成功表达并纯化TRAIL DR5/Sc Fv-PE25重组免疫毒素,检测其生物学活性,为TRAIL DR5阳性癌细胞的靶向治疗研究奠定了基础。(本文来源于《微量元素与健康研究》期刊2016年03期）
重组免疫毒素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
最早提出导向治疗的概念是德国化学家Erhlich,他在1906年就提出了导向治疗的概念~([1]),但是真正让导向治疗实现的是Moolten和Cooperband[2]等人,他们在1970年制备了世界上第一个免疫毒素。也就是由单克隆抗体与毒素、药物、放射性核素等组成的传统免疫毒素,此类免疫毒素的稳定性和均一性都比较差,因为
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组免疫毒素论文参考文献
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