牛结核杆菌MPB70-ESAT-6融合蛋白的原核表达及抗原反应性分析

论文摘要

为增强单个蛋白的抗原性,利用（Gly4Ser）3柔性连接肽将牛结核杆菌MPB70和ESAT-6融合。采用重叠延伸PCR技术将牛结核杆菌mpb70与esat-6基因连接,获得融合基因mpb70-esat-6,连接至T-Vector pMD19中,获得克隆质粒pMD-70-esat-6。经Bam HⅠ、EcoRⅠ酶切、纯化,并与p ET28a（+）载体连接,构建了pET-70-esat-6重组表达质粒。SDS-PAGE发现,在27.2 ku处表达了融合蛋白MPB70-ESAT-6,Western blotting证实,MPB70-ESAT-6与牛结核阳性血清反应性良好。MPB70-ESAT-6融合蛋白的研究为牛结核病诊断抗原及相关疫苗研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 基因、载体及菌株
•   1.2 酶与主要试剂
•   1.3 引物的设计与合成
•   1.4 融合基因的扩增
•   1.5 mpb70-esat-6的克隆和序列分析
•   1.6 重组表达载体的构建与鉴定
•   1.7 mpb70-esat-6的诱导表达及鉴定
•   1.8 MPB70-ESAT-6表达形式分析
•   1.9 MPB70-ESAT-6的反应性分析
• 2 结果
•   2.1 融合基因扩增产物
•   2.2 mpb70-esat-6的克隆与鉴定
•   2.3 原核表达质粒的构建与鉴定
•   2.4 SDS-PAGE分析
•   2.5 MPB70-ESAT-6的反应性分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 姜秀云,董阳,包艳红,张建宁,方诗文,金海玲,王宁,马红霞

关键词: 牛结核杆菌,基因,融合蛋白,原核表达

来源: 中国兽药杂志 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学生命科学学院,长春科技学院生物食品学院,吉林农业大学动物科技学院

基金: 国家自然科学基金项目(No.31572555),吉林省科技发展计划项目(No.20170101025JC),吉林省教育厅科学技术研究项目(No.201441,No.JJKH20170315KJ)

分类号: S852.61

页码: 7-12

总页数: 6

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