去泛素化酶UL36USP抑制剂的筛选及其对MDV复制的抑制作用

论文摘要

鸡的马立克氏病（Marek’s Disease,MD）是由致病型马立克氏病毒（Marek’s Disease Virus,MDV）引起的淋巴细胞组织增生性传染病,具有高传染性和高致病性,可造成养禽业严重的经济损失。MDV是一种α-疱疹病毒,具有高致病性。MDV分为三种血清型,致病型MDV属于血清I型,而血型II型和III型可感染鸡但不致病,被作为抗MD疫苗广泛地应用于马立克氏病的防治。随着各种疫苗的使用,出现了更强毒力的MDV（vv）甚至是MDV（vv+）,MDV毒力一直呈不断增强的趋势,是否还会出现更强毒力的MDV还无法确定。去泛素化酶是可以将泛素分子从泛素化底物或聚泛素化链上移除的一类异肽酶。细胞中的去泛素化酶通常参与各种细胞进程,例如细胞增殖、凋亡和病毒致病等过程中都发挥着重要作用。因此,一些去泛素化酶已经作为靶点用于抗癌药物的筛选。UL36-480蛋白是由MDV病毒编码的一段具有去泛素化酶活性的被膜蛋白。破坏其去泛素化酶活性可抑制MDV在鸡细胞内的复制、包装,以及MDV的传播,从而阻止MDV所致的鸡的MD肿瘤病。本研究以UL36作为靶点,筛选出有效抗MDV的化合物并在细胞水平上进行了验证。首先通过SDS-PAGE对十种化合物进行筛选,初步筛选出2种有效抑制UL36的化合物,分别为b-AP15和LDN-57444。然后对这两种化合物进行抑制反应动力学分析,拟合动力学曲线并计算Km值和Vmax。结果表明,b-AP15和LDN-57444这两种抑制剂对UL36蛋白有良好的抑制作用,且均为非竞争性抑制。为了进一步验证这两种抑制剂的抗病毒作用,我们在细胞水平上进行验证。首先利用CCK-8测定抑制剂可作用于抗病毒的最大安全浓度,然后利用蚀斑减少法测定抑制剂对MDV抗病毒作用。结果表明,b-AP15和LDN-57444两种抑制剂可以抑制MDV在细胞内的复制,也可以抑制MDV在细胞内的水平传播。本研究最终确定了b-AP15和LDN-57444对UL36蛋白有抑制作用和抑制类型。并从细胞水平验证了这两种抑制剂对MDV复制的抑制作用。本研究的体外结果为有效抑制MDV病毒在鸡细胞内的复制包装、有效防控MDV病毒的传播、提供了一种新的途径。

论文目录

• 中文摘要
• abstract
• 引言
• 第一篇 文献综述
•   第一章 泛素化修饰及其功能
•     1.1 泛素及泛素化
•     1.2 去泛素化及其功能
•   第二章 马立克氏病及其防控
•     2.1 马立克氏病及其危害
•     2.2 马立克氏病毒及疫苗防控
•     2.3 病毒编码的去泛素化酶
•   第三章 去泛素化抑制剂及其应用
•     3.1 去泛素化酶及其抑制剂
•     3.2 去泛素化酶抑制剂的应用
•     3.3 本研究立题依据与研究意义
• 第二篇 研究内容
•   第一章 MDV编码的UL36-480-GST的抑制剂的筛选
•     1.1 材料
•     1.2 方法
•     1.3 结果
•     1.4 讨论
•     1.5 小结
•   第二章 MDV编码的UL36-480-GST的酶抑制动力学分析
•     2.1 材料
•     2.2 方法
•     2.3 结果
•     2.4 讨论
•     2.5 小结
•   第三章 抑制剂对MDV蚀斑的抑制作用
•     3.1 材料
•     3.2 方法
•     3.3 结果
•     3.4 讨论
•     3.5 小结
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 导师简介
• 作者简介及科研成果
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王梦涵

导师: 艾永兴

关键词: 抑制剂,马立克氏病毒,去泛素化酶,复制

来源: 吉林大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林大学

基金: 国家自然科学基金(31272528),教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-12-0232),吉林省科技发展计划(20180101244JC)

分类号: S852.65

总页数: 76

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