靶向人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）整合酶多肽药物表达载体的构建

论文摘要

目的构建人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）整合酶（IN）表达载体用于双分子荧光互补技术筛选多肽药物。方法PCR扩增HIV-1 IN的全长基因序列,将目的片段插入至pBiFc-VN173载体中,并对重组质粒pBiFc-VN173-IN进行双酶切及测序鉴定。将重组质粒pBiFc-VN173-IN和对照组质粒pBiFc-VN173分别转染HEK293T细胞,采用Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法检测IN的表达。结果通过高保真PCR、载体构建和鉴定,成功获得IN表达载体pBiFc-VN173-IN。与对照组相比,通过Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法证实转染质粒pBiFc-VN173-IN载体的HEK293T细胞表达IN。结论成功构建了IN表达载体,该载体可用于和IN相互作用的多肽药物的双分子荧光互补技术筛选。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 IN基因的PCR扩增
•     1.2.2 HIV-1 IN基因的pBiFc-VN173-IN载体的构建及酶切和测序鉴定
•     1.2.3 Western blot法检测HEK293T细胞IN蛋白水平
•     1.2.4 免疫荧光细胞化学染色法检测HEK293T细胞IN蛋白的表达
• 2 结果
•   2.1 pBiFc-VN173-IN表达载体的构建及酶切和测序鉴定
•   2.2 Western blot法检测证实转染pBiFc-VN173-IN表达载体的HEK293T细胞可表达IN
•   2.3 转染pBiFc-VN173-IN表达载体的HEK293T细胞表达IN
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 叶丽颖,彭臻菲,赵婷婷,谢富安,王军凯,魏碧娜

关键词: 整合酶,双分子荧光互补技术,蛋白表达

来源: 细胞与分子免疫学杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工,药学

单位: 福建卫生职业技术学院,厦门大学生命科学学院,厦门大学附属东方医院

基金: 福建省教育厅中青年教师教育科研项目(JAT171033)

分类号: R943

DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.008808

页码: 333-338

总页数: 6

文件大小: 757K

下载量: 71