鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性

鼠冠状病毒核衣壳蛋白电荷非均一性与其磷酸化的相关性

论文摘要

核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白是病毒必不可少的结构蛋白,具有保护病毒基因组和调控病毒复制进程的重要作用。作为冠状病毒的经典模型,鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus, MHV) N蛋白的磷酸化调控病毒RNA复制转录和装配已有报道。本研究发现MHV-A59感染鼠neuro-2a细胞后期表达的N蛋白呈现明显的电荷不均一性,其中只有小部分发生磷酸化并被装配至病毒颗粒中;等电聚焦电泳显示N蛋白的电荷呈连续分布。用蛋白脂酰化抑制剂2-溴棕榈酸(2-BP)和蛋白酶体抑制剂MG-132处理后显示病毒复制水平不但与N蛋白电负性相关,而且与细胞的PKCαS657磷酸化和内质网蛋白水平相关。结果提示磷酸化修饰与鼠冠状病毒N蛋白电荷不均一性及稳定性密切相关。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 细胞及培养
  •   1.2 病毒感染与滴度测定
  •   1.3 N基因克隆与原核表达
  •   1.4 蛋白质凝胶电泳
  •   1.5 免疫印迹及抗体
  •   1.6 蛋白质质谱分析
  • 2 结果
  •   2.1 鼠冠状病毒核衣壳蛋白存在电荷非均一性和磷酸化
  •   2.2 鼠冠状病毒复制及N蛋白电负性受抑制剂2-BP和MG-132的影响
  •   2.3 PKCa-S657磷酸化水平影响鼠冠状病毒的复制及N蛋白磷酸化
  •   2.4 ERAD相关蛋白稳定有利于鼠冠状病毒的复制
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 文荣,王玉燕,叶荣

    关键词: 鼠冠状病毒,核衣壳蛋白,电负性,磷酸化

    来源: 微生物与感染 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 复旦大学上海医学院基础医学院教育部卫健委医科院医学分子病毒学重点实验室病原生物学系

    基金: 国家自然科学基金(31170786,31100116,31970155)

    分类号: R373

    页码: 267-276

    总页数: 10

    文件大小: 1478K

    下载量: 100

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