导读:本文包含了全基因组表达载体构建论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,基因组,花叶,载体,序列,乙型肝炎,传染性。
全基因组表达载体构建论文文献综述
孙云峰[1]（2014）在《人乳头瘤病毒16型全基因组克隆及其表达载体构建》一文中研究指出目的人乳头瘤病毒(HPV)是一种小型无包膜、双链环状DNA病毒，其分型依据是根据L1基因的序列相似性制定,L1基因的序列相似性<90%为新的型别，相似性在90%~98%之间为同一型别的不同亚型，相似性>98%为同一型别的不同变异株。全世界约70%的宫颈癌和高危型HPV16、18型直接相关，大约25%的口腔癌与高危型HPV有关，安徽省合肥地区宫颈癌发生率与感染HPV16具有较高的相关性。本研究通过克隆安徽省人乳头状瘤病毒16型(human papillomavirus type16, HPV16)全基因组，分析HPV16全基因组序列，并以全基因组序列信息为基础构建含HPV16全基因组的表达载体，为建立HPV16转染体系打下基础。方法(1) HPV16全基因组克隆：收集5例安徽省宫颈癌病理组织标本并提取总DNA，在GenBank中下载不同的HPV16全基因组序列并用DNAStar软件进行序列比对，将HPV16全基因组分成4个区段，即HPV-A、HPV-B、HPV-C和HPV-D，分别设计4对特异性引物，分段克隆HPV16全基因组，测序后进行序列拼接及核苷酸序列分析。(2)构建环化的HPV16全基因组：对含有HPV16的总DNA进行滚环扩增，回收1拷贝线性HPV16全基因组，再用连接酶使其自环化，BamHI位于片段HPV-A内，PCR扩增环化HPV16中的片段HPV-A，验证是否构建成功。(3)构建HPV16全基因组表达载体：同尾酶BamHI和BglII双酶切表达载体pLEGFP-N1，1拷贝线性HPV16插入双酶切后的载体pLEGFP-N1，命名pG/1H；扩增HPV16基因组中6152-120bp的片段(相当于0.2拷贝HPV16基因组)，改造载体pLEGFP-N1的酶切位点，将0.2拷贝HPV16插入质粒pG/1H，命名pG/1.2H，测序验证PCR保真性，酶切验证构建是否成功。结果(1)检测到1个宫颈癌病理样本中含有HPV16并获得全基因组序列，序列全长7906nts (GenBank登录号：KC935953)。序列比对发现，安徽HPV16(HPV16-Anhui)与HPV16-TH和HPV16-JP的全基因组核苷酸序列相似性最高，达99.5%。系统关系树分析显示，HPV16-Anhui与其他7个HPV16型聚成1个单独的分支。(2)环化的HPV16DNA电泳速度与线性HPV16有明显差异，从环化的HPV16中成功扩增出片段HPV-A，说明构建成功。(3) BamHI和HindIII双酶切pG/1.2H，得到14797bp (其中载体pLEGFP-N16891bp，1拷贝HPV167906bp)和1857bp (0.2拷贝HPV16)2个条带，验证HPV16全基因组表达载体构建成功。结论(1)获得安徽省首例HPV16全基因组核苷酸序列，HPV16-Anhui与不同地区HPV16亲缘关系均较近且基因组变异性较小。本研究对进一步了解安徽省甚至华东地区HPV16病毒基因组变异和进化规律具有重要意义。(2)成功构建含HPV16全基因组的表达载体和环化的HPV16全基因组，为HPV16完整基因组转染细胞的体系奠定基础。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2014-03-01）
贾金磊[2]（2011）在《两个马铃薯Y病毒分离物全基因组序列测定及抗病毒dsRNA表达载体的构建》一文中研究指出马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是我国烟草上的主要病毒。甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)引起玉米矮花叶病,严重影响我国玉米产量。从山东烟草上分离得到2个PVY分离物AQ4(JN083841)和FZ10(JN083842),在烟草上引起花叶或斑驳。测定两个分离物的全基因组序列,发现AQ4和FZ10均为N和O株系分离物的重组体。AQ4分离物1-496 nt和2497-9700 nt来源于PVYO株系的分离物Oz,497-2496 nt来源于PVYN株系的分离物CH-605。FZ10分离物1-496 nt和2497-6533 nt来源于PVYO株系的分离物SASA-110,497-2496 nt和6534-9698 nt来源于PVYN株系分离物CH-605。系统进化分析表明,AQ4属于PVYN:O亚组, FZ10属于重组的PVYNTN亚组。以前报道HC-Pro上D205、K400和E419氨基酸决定PVY烟草上引起坏死,FZ10的HC-Pro含这叁个位点,但在烟草上引起花叶,这说明可能还有其它基因或位点决定PVY在烟草上引起坏死。选择PVY、CMV和TMV的核苷酸序列中适合siRNA形成的保守区域,以AQ4和实验室克隆的TMV、CMV cDNA为模板,从PVY CP、CMV RdRp和TMV CP基因上分别扩增了300 bp、250 bp和450 bp的片段。以TMV片段中部分序列作为间隔区域,将叁个片段连接后以反向重复方式插入pGEM-T Easy载体,得到dsRNA表达载体。将载体导入RNaseⅢ缺失的大肠杆菌菌株HT115(DE3),诱导表达后获得dsRNA。使用表达dsRNA的细菌培养液破碎后处理叁生烟(N.tabccum cv.Samsun),然后接种病毒,发病率下降明显,表明dsRNA培养液有良好的抗病毒效果。通过对NCBI上SCMV全基因组序列的分析,选取了位于CI、NIb和CP基因的适合siRNA形成的保守序列。以SCMV cDNA为模板扩增得到这叁个片段后通过融合PCR将叁者融合并构建反向重复,通过NcoI/BstEⅡ双酶切将反向重复序列插入双元表达载体pCAMBIA3301,获得RNAi载体p3301-SCMVCINIb1CPRi。(本文来源于《山东农业大学》期刊2011-05-01）
祁小乐,高玉龙,高宏雷,邓小芸,张宁[3]（2006）在《鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建》一文中研究指出采用一步法长距离RT-PCR克隆了IBDV Gt株全基因组,对其核苷酸和氨基酸序列进行了系统分析。在IBDV Gt株全基因组中引入分子标签,且在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建了IBDV真核表达载体pCAGGmGtAHRT和pCAG-GmGtBHRT,为IBDV新型高效拯救平台的构建及基于此的病毒基因功能奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2006年10期）
李建文[4]（2006）在《兔出血症病毒WHNRH株全基因组测序全长cDNA克隆，VP60基因及全病毒真核表达载体构建》一文中研究指出兔病毒性出血症是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus，RHDV)引起兔的一种急性、烈性、高致死性传染病，是一种毁灭性传染病，给养兔业造成巨大的经济损失。1984年我国首先爆发兔病毒性出血症，目前呈全国性分布，2004年GenBank登录了第一株中国株RHDV的全基因组序列，我国RHDV的分子流行病学资料非常缺乏，且迄今国内仍未见RHDV基因组序列测定的详细报道。目前国内外还没有RHDV反向遗传学和核酸疫苗的相关研究报道。鉴于此，本研究主要包括以下几个方面： 1．兔出血症病毒WHNRH株的分离鉴定：采用病死兔的肝脏组织进行病原的分离，将其经兔体传3代后接种兔呈规律性死亡和病理变化，其特征与兔病毒性出血症相同，采用氯仿处理，聚乙二醇沉淀法对第4代死亡兔肝脏组织进行处理，所得产物具有血凝特性，其血凝效价可达2~(16)，该血凝作用能够被抗RHDV的高免血清所抑制，该产物能够与抗RHDV的高免血清在琼脂扩散实验中形成清晰可见的沉淀线，将该液体经磷钨酸染色后进行电镜观察，结果发现该产物中存在一种大小约为30-40nm、无囊膜，符合RHDV形态特征的病毒粒子。参考GenBank中登录的兔出血症病毒的基因组序列，在保守区设计一对RHDV特异的PCR引物对该分离病毒进行RT-PCR扩增，结果扩增出与预期片段大小相符的PCR条带，对产物的克隆测序结果表明，该株病毒与已经报道的RHDV的对应区域的同源率达90.2％-97.2％，从分子水平证实本研究分离毒株为兔病毒性出血症病毒(RHDV)，将其命名为WHNRH株。 2．兔出血症病毒WHNRH株基因组序列的测定与分析：采用片段重迭的(本文来源于《四川农业大学》期刊2006-06-20）
黄洁[5]（2006）在《绿色荧光蛋白标记的乙肝病毒全基因组真核表达载体的构建与表达分析》一文中研究指出乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)为一种嗜肝DNA病毒,因为其感染的种属特异性组织特异性,对HBV研究多利用细胞模型和小动物模型。全基因组转基因小鼠血清和组织(尤其是肝组织)中有HBV病毒蛋白的表达和病毒的复制,在普通实验室进行全基因组转基因小鼠的培育和相关研究具有一定的危险性,且常规方法检测有代价较高、费时费力的限制。因此,建立一种全身组织可表达绿色荧光蛋白(GFP)的全基因组转基因小鼠,可以简化转基因小鼠的检测和培育,具有一定的实际应用价值。本研究采用基因重组技术,成功构建了含有双拷贝HBV全基因组DNA和EGFP基因的真核表达载体pCX EGFP-HBV adr 2.0,载体DNA细胞转染和尾静脉液压注射的体外和体内研究证实GFP和HBV基因均能表达,表明pCX EGFP-HBVadr 2.0可用于转基因小鼠的制备,且GFP可以作为HBV存在与否的报告基因。进一步用限制性内切酶将该载体线性化,采用经典显微注射法进行转基因小鼠的制备。(本文来源于《第二军医大学》期刊2006-04-01）
闫丽辉[6]（2003）在《新城疫病毒F48E9株全基因组核苷酸序列测定及表达载体构建》一文中研究指出为了深入研究NDV的结构和功能、构建NDV感染性克隆，本论文对中国标准强毒F48E9株的全基因组cDNA进行了分段克隆，并测定了全基因组核苷酸序列。然后根据基因组的核苷酸序列，将其亚克隆到低拷贝表达载体pX8dT上，并使之位于T7 RNA聚合酶启动子和自催化的丁型肝炎病毒核酶之间，从而为将来获得感染性cDNA奠定了物质基础。 本实验首先参照国外已发表的NDV La Sota序列和已有的F48E9基因片段序列，应用Oligo(6.0)分析软件设计并合成了8对引物(F1、F2、F3、F4、F5、F6、3’、5’)和2条用于扩增5’和3’端的反转录引物(3’RT和5’RT)，利用RT-PCR方法分别扩增F48E9株NP、P、M、F+HN、L基因及3’端和5’端cDNA，并将其克隆到pMD18-T载体上；经限制性内切酶分析、质粒PCR鉴定以及序列测定，证明我们获得了含有新城疫病毒F48E9株全长基因组分段克隆阳性重组子p3、pM1、pM2、pM3、pM4、pLA、pLB和p5。然后对阳性重组子进行核苷酸序列测定，根据测得的序列设计并合成11条引物，利用PCR和限制性内切酶的方法将F48E9株全基因组分段的阳性重组子从克隆载体上亚克隆下来，并按顺序依次连接到低拷贝表达载体pX8dT上，采用Sanger's双脱氧末端终止法进行测序，并应用DNASIS(Ver2.6)和DNASTAR分析软件将测序结果与新城疫病毒La Sota、Clone30、ZJ1、V4(HB92)和B1株的全基因组序列进行比较分析。 实验结果表明：F48E9全基因组具有15192个碱基，比La Sota、V4、B1和Clone30的全基因组序列长6个碱基，和鹅源ZJ1株的长度相等。序列比较发现F48E9株在相应于La Sota基因组的1647—1648(NP-P基因间隔区)的位置处有6个碱基的插入。为了验证该6个碱基是否只存在于强毒株及其与毒力的关系，我们又设计一对引物X1和X2。通过RT-PCR方法扩增获得了另外10个背景清楚毒株的NP-P基因间隔区片段，将这些序列与F48E9、La Sota、Clone30、B1、ZJ1和V4的相应序列进行了比较，结果在参比的16个NDV毒株中在该区段中除了有多个点突变外，个别毒株有碱基插入和缺失，所有以La Sota株为代表的弱毒株均无6碱基的插入，而以F48E9株为首的强毒株均有此6碱基的插入，但有一个中等毒力的毒株DP没有6碱基的插入，不过它的基因序列和La Sota的几乎相同，对于所克隆到的基因的代表性还有待确定。因此6碱基插入与新城疫病毒的毒力相关，但最后的确定还有待于做更深入的研究，至于是否与病毒的其它生物学特性有关还要做进一步的研究。值得注意的是：通过序列比较我们发现我国标准强毒F48E9株基因组cDNA5’端1705-1722bp处有一个5’TCTCTCTCCTCTCTCCTCC3’的一个特殊序列，现在还无证据说明它与病毒之间的关系及其功能。 此外，F48E9株L基因除了编码一个含有2204个氨基酸多肽外，还可编码一个52个氨基酸的疏水多肽，而NDV鸡源V4(HB92)株和鹅源分离株ZJ1的L基因不编码这个小蛋白。 东北农业大学农学硕士学位论文一 对六株NDV分离株全长基因组核音酸同源性进行比较发现，F48E9株与 La Sota、Clone30、ZJI、V4和BI的核昔酸同源性分别为：87．3％、87．7％、85．4％、88．8％和87．3％。这说明除了裂解位点以外NDV强弱毒之间仍存在着较大的差异，其中可能存在许多我们尚不知晓的重要结构，因此仅依赖中等毒力、弱毒株和无毒株的感染性克隆来研究NDV分子生物学特性、病毒的复制、致病机理、以及病毒和宿主之间的相互作用是远远不够的，构建强毒株的感染性分子克隆才是阐明NW致病机理更为有利的工具。 本研究成功地获得了 NDV F48E9 ＄t＄因组的核昔酸序列，并构建了表达NDV F48E9基因组CDNA的低拷贝表达载体休－F48E9，为构建新城疫病毒强毒株F48E9株的感染性CDNA奠定了物质基础，进一步研究NDV的生物学特性、结构与功能的关系；进一步探讨影响NDV毒力的因素、以及研制新型疫苗载体提供了可靠保证。(本文来源于《东北农业大学》期刊2003-06-01）
全基因组表达载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是我国烟草上的主要病毒。甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)引起玉米矮花叶病,严重影响我国玉米产量。从山东烟草上分离得到2个PVY分离物AQ4(JN083841)和FZ10(JN083842),在烟草上引起花叶或斑驳。测定两个分离物的全基因组序列,发现AQ4和FZ10均为N和O株系分离物的重组体。AQ4分离物1-496 nt和2497-9700 nt来源于PVYO株系的分离物Oz,497-2496 nt来源于PVYN株系的分离物CH-605。FZ10分离物1-496 nt和2497-6533 nt来源于PVYO株系的分离物SASA-110,497-2496 nt和6534-9698 nt来源于PVYN株系分离物CH-605。系统进化分析表明,AQ4属于PVYN:O亚组, FZ10属于重组的PVYNTN亚组。以前报道HC-Pro上D205、K400和E419氨基酸决定PVY烟草上引起坏死,FZ10的HC-Pro含这叁个位点,但在烟草上引起花叶,这说明可能还有其它基因或位点决定PVY在烟草上引起坏死。选择PVY、CMV和TMV的核苷酸序列中适合siRNA形成的保守区域,以AQ4和实验室克隆的TMV、CMV cDNA为模板,从PVY CP、CMV RdRp和TMV CP基因上分别扩增了300 bp、250 bp和450 bp的片段。以TMV片段中部分序列作为间隔区域,将叁个片段连接后以反向重复方式插入pGEM-T Easy载体,得到dsRNA表达载体。将载体导入RNaseⅢ缺失的大肠杆菌菌株HT115(DE3),诱导表达后获得dsRNA。使用表达dsRNA的细菌培养液破碎后处理叁生烟(N.tabccum cv.Samsun),然后接种病毒,发病率下降明显,表明dsRNA培养液有良好的抗病毒效果。通过对NCBI上SCMV全基因组序列的分析,选取了位于CI、NIb和CP基因的适合siRNA形成的保守序列。以SCMV cDNA为模板扩增得到这叁个片段后通过融合PCR将叁者融合并构建反向重复,通过NcoI/BstEⅡ双酶切将反向重复序列插入双元表达载体pCAMBIA3301,获得RNAi载体p3301-SCMVCINIb1CPRi。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
全基因组表达载体构建论文参考文献
[1].孙云峰.人乳头瘤病毒16型全基因组克隆及其表达载体构建[D].安徽医科大学.2014
[2].贾金磊.两个马铃薯Y病毒分离物全基因组序列测定及抗病毒dsRNA表达载体的构建[D].山东农业大学.2011
[3].祁小乐,高玉龙,高宏雷,邓小芸,张宁.鸡传染性腔上囊病病毒Gt株全基因组序列分析及真核表达载体的构建[J].中国兽医科学.2006
[4].李建文.兔出血症病毒WHNRH株全基因组测序全长cDNA克隆，VP60基因及全病毒真核表达载体构建[D].四川农业大学.2006
[5].黄洁.绿色荧光蛋白标记的乙肝病毒全基因组真核表达载体的构建与表达分析[D].第二军医大学.2006
[6].闫丽辉.新城疫病毒F48E9株全基因组核苷酸序列测定及表达载体构建[D].东北农业大学.2003
论文知识图
