联糖基化论文_Matthew,A.Lauber,Stephan,M.Koza,Erin,E.Chambers,毛燕妮

导读:本文包含了联糖基化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:包膜,蛋白质,蛋白,细胞,病毒,位点,论文。

联糖基化论文文献综述

Matthew,A.Lauber,Stephan,M.Koza,Erin,E.Chambers,毛燕妮^[1]（2016）在《重组人EPO N-联糖基化和O-联糖基化的全面表征》一文中研究指出目的:为EPO分析建立两种简易的基于LC的互补方法,分别用于获取N-糖基化和0-糖基化的相关信息。方法:借助采用新型糖基标记试剂RapiFluor-MS的样品制备新策略,快速释放rhEPO中的N-糖基,对其进行GlycoWorksRapiFluor-MS标记,得到rhEPO的N-糖谱图,然后利用灵敏的荧光检测和质谱检测技术进行亲水作用色谱(HILIC)分析。接下来的平行分析中,利用完整蛋白质的HILIC分析甄别糖基释放的rhEPO,以解析O-糖基化的相关信息。结果:我们没有采用分析rhEPO游离O-糖的策略,而是开发了另一种表征策略工作流程,首先使用GlycoWorks Rapid PNGase F和1%RapiGest~(TM)SF表面活性剂对rhEPO进行快速糖基释放,10分钟后获得了一份经N-糖基释放的完整rhEPO样品,然后采用ACQUITY UPLC Glycoprotein BEH Amide糖蛋白分析专用柱通过HILIC分离对其进行分析。结论:重组人促红细胞生成素(rhEPO)分子此前由于其糖基化结构相对复杂,一直被视为糖基化表征的难题,我们介绍的两种简易策略可用于详细研究rhEPO的N-联糖基化和O-联糖基化;充分利用这些工具有助于我们加快新型生物仿制药的开发。(本文来源于《2016年生物技术药物理化特性分析与质量研究技术研讨会资料汇编》期刊2016-07-13）

郑晓民^[2]（2010）在《汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中的作用》一文中研究指出目的N-联寡糖链可以在很多方面影响蛋白的功能。已有报道显示某些病毒融合蛋白的寡糖链缺失可使病毒的细胞融合功能缺陷或丢失。已有报道显示汉坦病毒的G2糖蛋白可能是其融合蛋白。鉴于汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1和G2也是通过N-联糖基化作用来修饰的,本研究拟通过实验对汉坦病毒N-联糖基化位点在细胞融合中的作用进行初步探讨。从而为阐明HV的细胞融合机制、研制有效的汉坦病毒新型疫苗和治疗制剂奠定基础。方法根据GM04-38株M片段cDNA基因序列应用Primer 5软件设计引物,同源重组PCR法构建5个单个氨基酸突变的N-联糖基化位点的克隆载体。PCR扩增N-联糖基化位点突变体的编码区基因,双酶切后与经过同样双酶切的表达载体pCAGGS/MCS连接,转化大肠杆菌DH5a,氨苄青霉素筛选N-联糖基化位点单个氨基酸突变体的表达载体。经双酶切和测序证实。将真核表达质粒G1Bgl, GmG2及4个G1突变体,1个G2突变体提取后分别共转染Vero E6细胞,间接免疫荧光检测蛋白表达情况,免疫印迹实验确定糖蛋白表达情况,并经酸性MEM处理、Giemsa染色后观察细胞融合现象的发生结果1.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的克隆载体N134A、N235A、N347A、N399A、N928A双酶切鉴定载体长度约为2.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体长度约为2.1kb;N928A突变体长度约为1.6kb,并经测序证实。2.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的表达载体G1Bgl-N134A、GlBgl-N235A、GlBgl-N347A、G1Bgl-N399A、GmG2-N928A、双酶切鉴定,载体长度为4.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体目的片段长度约为2.1kb;N928A突变体目的片段长度约为1.6kb,并经测序证实。3.间接免疫荧光实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组、G1Bgl及各N-联糖基化位点突变体转染组均有亮绿色荧光信号产生,呈胞浆分布。4.免疫印迹实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组出现两条带,分别为68KDa和55KDa,N134A突变体转染组不显示G1条带,其余各突变体转染组均显示G1、G2两条带。5.共转染N134A-:或N928A突变体组未出现细胞融合现象,而其他突变体及野毒株GlBgl与GmG2共转染后则出现融合现象。结论G1上的134位点可能与蛋白正确折迭有密切关系,134位点突变极可能导致蛋白的错误折迭,进而无法转运出内质网。G2上的928位点对细胞融合有重要作用,提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上(本文来源于《山东大学》期刊2010-01-20）

联糖基化论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

目的N-联寡糖链可以在很多方面影响蛋白的功能。已有报道显示某些病毒融合蛋白的寡糖链缺失可使病毒的细胞融合功能缺陷或丢失。已有报道显示汉坦病毒的G2糖蛋白可能是其融合蛋白。鉴于汉坦病毒GM04-38株包膜糖蛋白G1和G2也是通过N-联糖基化作用来修饰的,本研究拟通过实验对汉坦病毒N-联糖基化位点在细胞融合中的作用进行初步探讨。从而为阐明HV的细胞融合机制、研制有效的汉坦病毒新型疫苗和治疗制剂奠定基础。方法根据GM04-38株M片段cDNA基因序列应用Primer 5软件设计引物,同源重组PCR法构建5个单个氨基酸突变的N-联糖基化位点的克隆载体。PCR扩增N-联糖基化位点突变体的编码区基因,双酶切后与经过同样双酶切的表达载体pCAGGS/MCS连接,转化大肠杆菌DH5a,氨苄青霉素筛选N-联糖基化位点单个氨基酸突变体的表达载体。经双酶切和测序证实。将真核表达质粒G1Bgl, GmG2及4个G1突变体,1个G2突变体提取后分别共转染Vero E6细胞,间接免疫荧光检测蛋白表达情况,免疫印迹实验确定糖蛋白表达情况,并经酸性MEM处理、Giemsa染色后观察细胞融合现象的发生结果1.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的克隆载体N134A、N235A、N347A、N399A、N928A双酶切鉴定载体长度约为2.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体长度约为2.1kb;N928A突变体长度约为1.6kb,并经测序证实。2.构建了5个N-联糖基化位点单个氨基酸突变的表达载体G1Bgl-N134A、GlBgl-N235A、GlBgl-N347A、G1Bgl-N399A、GmG2-N928A、双酶切鉴定,载体长度为4.7kb;N134A、N235A、N347A、N399A突变体目的片段长度约为2.1kb;N928A突变体目的片段长度约为1.6kb,并经测序证实。3.间接免疫荧光实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组、G1Bgl及各N-联糖基化位点突变体转染组均有亮绿色荧光信号产生,呈胞浆分布。4.免疫印迹实验显示野毒株GlBgl与GmG2共转染组出现两条带,分别为68KDa和55KDa,N134A突变体转染组不显示G1条带,其余各突变体转染组均显示G1、G2两条带。5.共转染N134A-:或N928A突变体组未出现细胞融合现象,而其他突变体及野毒株GlBgl与GmG2共转染后则出现融合现象。结论G1上的134位点可能与蛋白正确折迭有密切关系,134位点突变极可能导致蛋白的错误折迭,进而无法转运出内质网。G2上的928位点对细胞融合有重要作用,提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。