半乳糖流加对CHO细胞生长代谢及其表达的Fc融合蛋白糖基化的影响

论文摘要

旨在深入认识补料分批培养过程中,以半乳糖替代葡萄糖作为碳源,对CHO细胞生长、代谢和产物表达的影响。通过将补料培养基中的葡萄糖用等摩尔的半乳糖进行替换,综合考察了不同比例替换条件下CHO细胞的生长代谢和Fc融合蛋白的产物合成特性。结果显示:摇瓶的数据表明60%比例以上半乳糖的替代对细胞的生长造成了不利影响,培养后期的pH出现了大幅上升。同时随着半乳糖替代比例的增加,虽然代谢副产物乳酸的浓度有明显下降,但氨的生成却显著增多;此外,培养过程中谷氨酸和丙氨酸的浓度也随着替代比例的增加而增加。产物表达方面,在较低替代比例内（0%-40%）,Fc融合蛋白的表达量和总唾液酸含量都随着替代比例的增加而升高,而随着替代比例的进一步升高（60%-100%）,两者都逐渐降低。最后,在反应器内通过对培养pH的稳定控制,40%半乳糖替代过程的产物表达量和总唾液酸含量分别提高了43%和37%。补料培养基中以半乳糖替代葡萄糖进行补料的方式,有效地提高了最终Fc融合蛋白的表达量和总唾液酸含量,有助于建立高产高质的CHO细胞培养过程。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 种子细胞培养
•     1.2.2 摇瓶内补料培养
•     1.2.3 反应器内补料培养
•     1.2.4 细胞计数
•     1.2.5 Fc融合蛋白表达量的检测
•     1.2.6培养液中氨基酸浓度的检测
•     1.2.7 培养液中葡萄糖、氨和乳酸浓度的测定
•     1.2.8 培养液中半乳糖浓度的检测
•     1.2.9 Fc融合蛋白的纯化
•     1.2.1 0 总唾液酸含量的检测
•     1.2.1 1 N-连接糖基化分布的检测
•     1.2.1 2 数据分析
• 2 结果
•   2.1 半乳糖替代葡萄糖补料培养对细胞生长代谢和产物表达的影响
•     2.1.1 对CHO细胞生长的影响
•     2.1.2 对CHO细胞代谢的影响
•     2.1.3 半乳糖替代补料培养对Fc融合蛋白表达的影响
•   2.2 全部半乳糖替代对培养过程的影响
•   2.3 40%比例半乳糖替代对培养过程的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 肖政,范里,谭文松

关键词: 半乳糖,细胞代谢,糖基化,融合蛋白

来源: 生物技术通报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

分类号: Q813.11

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0138

页码: 138-145

总页数: 8

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