一种检测杂环胺类化合物的酶联免疫检测方法的建立

论文摘要

为了制备一种广谱性杂环胺抗体,并建立一种可以实现多种杂环胺同时检测的快速分析方法。以杂环胺2-氨基-3,4-二甲基咪唑[4,5-f]喹喔啉（MeIQx）为原料,将其与丁二酸单甲酯酰氯（MCO）反应合成杂环胺半抗原,通过活化酯法将半抗原与蛋白偶联制备免疫原进一步制备多克隆抗体,最终建立间接竞争酶联免疫分析方法（ic-ELISA）。该方法灵敏度(IC50,以MeIQx计)为81.16μg/L,检测限(IC15)为12.07μg/L。方法对喹啉类杂环胺（IQ、MeIQ）、喹喔啉类杂环胺（IQx、MeIQx、4,8-DiMeIQx、7,8-DiMeIQx、4,7,8-TriMeIQx）以及吡啶类杂环胺（PhIP）具有相同的识别能力,交叉反应率均达到93%以上。油炸牛肉和肉松样品中杂环胺（MeIQx）添加回收率在91.18%～98.64%之间,检测结果与液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）有很好的一致性（R2=0.9927）。本文建立的酶联免疫分析方法可以实现喹啉类、喹喔啉类以及吡啶类杂环胺总量的检测,为热加工肉制品中杂环胺的检测提供了一种简单、准确的快速检测方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 半抗原合成
•     1.2.2 偶联蛋白及抗体制备
•     1.2.3 半抗原及完全抗原的鉴定
•     1.2.4 间接竞争酶联免疫分析方法（ic-ELISA）的建立
•       1.2.4.1 间接竞争酶联免疫分析（ic-ELISA）方法步骤
•       1.2.4.2 包被抗原及抗体稀释度的确定
•       1.2.4.3 封闭液选择及浓度优化
•       1.2.4.4 甲醇含量对间接竞争酶联免疫分析方法（ic-ELISA）的影响
•       1.2.4.5 杂环胺间接竞争ELISA标准曲线的建立
•     1.2.5 杂环胺抗体特异性测定
•     1.2.6 样品前处理方法
•     1.2.7 提取液稀释倍数优化
•     1.2.8 添加回收实验
•     1.2.9 液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）验证
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 半抗原和完全抗原的鉴定
•   2.2 包被量及抗体稀释度的确定
•   2.3 封闭液的优化
•   2.4 甲醇含量对间接竞争酶联免疫分析（ic-ELISA）方法的影响
•   2.5 杂环胺间接竞争ELISA标准曲线的建立
•   2.6 杂环胺抗体特异性测定
•   2.7 提取液稀释倍数优化
•   2.8 添加回收实验结果
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵秋霞,生威,王璐璐,尚淑娜,张燕,王硕

关键词: 杂环胺,广谱性抗体,加工食品

来源: 食品工业科技 2019年21期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 天津科技大学食品工程与生物技术学院食品营养与安全国家重点实验室

基金: 国家自然基金重点项目(31430068),天津市科技计划项目(16PTSYJC00130)

分类号: TS251.7

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.21.010

页码: 58-64

总页数: 7

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