抗CD52单克隆抗体ADCC转基因测活方法的建立

论文摘要

目的建立转基因细胞法测定抗CD52单克隆抗体（单抗）的抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC）生物学活性检测方法。方法①以Ramos细胞系作为靶细胞,以Jurkat-hFcγRⅢa/FcεRIγ-NFAT转基因细胞系作为效应细胞,通过荧光素酶检测系统(Bright-GloTM luciferase Assay System)建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法;②对靶细胞、量效范围、效靶比及诱导时间进行优化并进行方法学验证;③研究建立的方法应用于对不同抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测。结果建立抗CD52单抗的ADCC生物学活性检测方法,抗CD52单抗在该方法中存在量效关系,符合四参数方程:y=（A-D）/[1+（x/C）B]+D;经优化后确定抗体量效范围为起始质量浓度360μg/mL,4倍系列稀释9个稀释度;效靶比为3∶1,诱导时间为6.0 h;该方法具有良好的专属性;4个不同稀释组回收率样品经3次测定,相对效价分别为（45.58±4.67）%、（71.61±9.45）%、（122.92±7.92）%和（149.94±14.58）%;对应的回收率分别为（91.16±9.34）%、（95.49±12.60）%、（98.34±6.34）%和（99.96±9.72）%,上述结果的变异系数（coefficient of variation,CV）均小于15%;且该方法也适用于不同抗CD52单抗的ADCC效应评价。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD52单抗ADCC生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD52单抗的ADCC生物学活性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细胞
•   1.2 样品
•   1.3 主要试剂及仪器
•   1.4 抗CD52单抗ADCC生物学活性方法的原理
•   1.5 抗CD52单抗ADCC生物学活性方法的建立
•     1.5.1 抗CD52单抗的稀释
•     1.5.2 靶细胞的制备
•     1.5.3 效应细胞的制备
•     1.5.4 96孔白色细胞培养板加样
•     1.5.5 荧光信号检测
•   1.6 试验条件的优化
•     1.6.1 靶细胞的选择
•     1.6.2 抗体量效范围的选择
•     1.6.3 效靶比和诱导时间的选择
•   1.7 方法学验证
•     1.7.1 专属性试验
•     1.7.2 精密性试验
•     1.7.3 准确性试验
•   1.8 抗CD52单抗ADCC活性检测方法的应用
•   1.9 统计学分析
•     1.9.1 生物学活性曲线拟合
•     1.9.2 统计学参数描述
• 2 结 果
•   2.1 抗CD52单抗ADCC生物学活性检测方法的建立
•   2.2 ADCC试验条件的优化
•     2.2.1 靶细胞的确定
•     2.2.2 抗体量效范围的选择
•     2.2.3 效靶比和诱导时间的选择
•   2.3 方法学验证
•     2.3.1 专属性
•     2.3.2 精密性
•     2.3.3 准确性
•   2.4 抗CD52单抗ADCC活性检测方法的应用
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘春雨,于传飞,崔永霏,肖启东,黄璟,王兰

关键词: 抗单克隆抗体,单克隆抗体,生物学活性,报告基因

来源: 微生物学免疫学进展 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室

基金: “重大新药创制”科技重大专项(2018ZX09736016-007),中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研费(2017PT31041)

分类号: R392

DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.05.005

页码: 27-33

总页数: 7

文件大小: 4364K

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