潘正兴（贵州省药品检验所贵州贵阳550004）
【中图分类号】R972【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2009)31-0006-01
注射用果糖二磷酸钠适用于低磷酸血症。低磷酸血症可在急性情况下，如输血，在体外循环下进行手术、胃肠外营养时出现，也与一些慢性疾病，如慢性酒精中毒、长期营养不良、慢性呼吸道衰竭中碳酸的耗竭有关。为探讨采用细菌内毒素检查法检测注射用果糖二磷酸钠的可行性，本文对注射用果糖二磷酸钠中细菌内毒素检查进行了研究。
1实验材料
1.1注射用果糖二磷酸钠(样品)批号：20080401，20080402，20080403；规格：5g/瓶；厂名：贵州威门药业股份有限公司。
1.2鲎试剂（TAL）批号：0702140；灵敏度（λ）：0.25EU/ml；规格：0.1ml/支。批号：0605190，灵敏度（λ）：0.125EU/ml；规格：0.1ml/支；厂名：湛江博康海洋生物有限公司。批号：070815，灵敏度（λ）：0.5EU/ml，规格：0.1ml/支，厂名：厦门市鲎试剂实验厂有限公司。批号：0605151，灵敏度（λ）：0.06EU/ml，规格：0.1ml/支，厂名：湛江安度斯生物有限公司。
1.3细菌内毒素工作标准品批号：2007-4，规格：150EU/支，厂名：中国药品生物制品检定所。
1.4细菌内毒素检查用水（BET水）批号：W2006-12，规格：10ml/支，厂名：中国药品生物制品检定所。
1.5仪器电热恒温鼓风干燥箱，101-2型，厂名：上海路达实验仪器有限公司；旋涡混合器，XW-80型，厂名：上海第一医学院仪器厂；电热恒温水浴箱，HH·W21-6000型，厂名：江苏淮阴医疗器械厂。
1.6器材除热源所用玻璃器材经洗液浸泡清洗干净后经250℃干热2小时除热源。
2方法与结果
2.1鲎试剂标示灵敏度的复核[1]以上各批鲎试剂经过标定，灵敏度均在0.5～2λ之间，结果符合规定。
2.2样品内毒素限值（L）的确定[1,2]本品的最大用药量M=10000mg（60kg·h）=166.67mg(kg·h)。注射剂：K=5EU/（kg·h），按限值计算公式：L=K/M。
本实验样品采用内毒素限值L=0.03EU/mg进行本品细菌内毒素检查法的研究。
2.3样品预干扰试验[1,3]样品先用BET水配制成100mg/ml溶液为原液浓度。由于所用TAL的灵敏度（λ）在0.5EU/ml～0.03EU/ml之间，则样品的最大有效稀释倍数MVD==6倍～100倍，采用不超过最大有效稀释倍即原液3倍、6倍、12倍、24倍、48倍、96倍的溶液为NPC系列溶液，制成供试品阳性溶液为PPC系列溶液，用λ=0.25EU/ml及0.5EU/mlTAL，分别与两个系列溶液反应，试验各重复2管，同时作阴性对照（Nc）和阳性对照（Pc）各2管，作3个批号样品预干扰试验，结果注射用果糖二磷酸钠24倍液～96倍液对鲎试剂反应均无增强和抑制的干扰作用。因此，在正式干扰试验时，采用样品24倍液进行试验。
2.4样品正式干扰试验[1,3]使用TALλ为0.125EU/ml和0.06EU/ml，对3个批号注射用果糖二磷酸钠进行24倍稀释（4.17mg/ml）作正式干扰试验，
3个批号注射用果糖二磷酸钠24倍液对两个厂家鲎试剂的干扰试验结果，Es在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2λ），且Et在0.5Es～2Es（包括0.5Es和2Es），说明该样品进行24倍稀释后确已排除干扰作用，在24倍稀释或24倍以后稀释的情况下即可使用细菌内毒素检查法。
2.5样品细菌内毒素检查[1]取3个批号样品，先用BET水分别溶解制成100mg/ml溶液，再用BET水分别稀释成24倍液(4.17mg/ml),用2个厂家鲎试剂（TALλ为0.125EU/ml和0.06EU/ml），按检查法进行操作和结果判断，以L为0.03EU/mg作为结论评定标准，结果均小于限值（0.03EU/mg），说明可用此限值进行该样品细菌内毒素检查。
3讨论与结论
3.1样品预干扰试验的目的是评价样品浓度（稀释倍数）对TAL与内毒素凝集反应的干扰程度及干扰性质，以便初步筛选出对检查无干扰的样品浓度（稀释倍数）范围。从预干扰反应结果看到，样品在稀释24倍～96倍时，对细菌内毒素检查法均无干扰作用。
3.23个批号样品24倍液作干扰试验时，Es均在0.5λ～2λ内，且Et均在0.5Es～2Es（包括0.5Es和2Es）内，说明样品24倍液时不干扰鲎试验。
3.3用两个厂家鲎试剂与3个批号样品24倍液（4.17mg/ml）进行细菌内毒素检查，样品细菌内毒素限量均在0.03EU/mg限值以下，样品细菌内毒素限量均合格。因此，本品采用限值0.03EU/mg进行细菌内毒素检查法代替家兔热源检查法是可行的。
参考文献
[1]中国药典，二部.2005:附录XIE.
[2]中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范.北京：中国医药科技出版社，2005：287.
[3]潘正兴，宋勤.注射用奥美拉唑钠细菌内毒素检查法.药物分析杂志，2008，28（2）：275.