导读:本文包含了差速贴壁论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,细胞,内皮,小鼠,骨髓,组织,星形。
差速贴壁论文文献综述
李艳,张瑜,李斐雪[1]（2019）在《差速贴壁法在原代星形胶质细胞纯化中的应用》一文中研究指出为获得高纯度的星形胶质细胞,在大鼠新生P0乳鼠大脑皮层的原代培养后,采用差速贴壁法予以纯化.经细胞免疫荧光染色鉴定,差速贴壁30 min及1 h处理获得的星形胶质细胞纯度高、状态好,能满足神经生物学研究中对高纯度星形胶质细胞培养的实验要求,适宜推广.(本文来源于《杭州师范大学学报(自然科学版)》期刊2019年03期）
李玢,邓卓,甘露,姜向阳,张璐[2]（2017）在《关于改良差速贴壁法原代培养大型成年哺乳动物绵羊肌源性干细胞的研究》一文中研究指出目的探讨改良差速贴壁法原代培养成年大型哺乳类动物绵羊肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSC)的可行性。方法改良差速贴壁法分离培养原代绵羊MDSC,并通过免疫荧光检测及western blotting法检测干细胞抗原-1(stem cell antigen,Sca-1),Desmin及CD 34表达情况。Western blotting法检测贴壁细胞(pp)1~pp6的Desmin表达情况来反应纯化情况。结果利用改良差速贴壁法可以成功分离培养出绵羊MDSC,该干细胞Sca-1,Desmin及CD 34表达均阳性,贴壁慢的细胞Desmin表达增高,在pp6中表达最高。结论改良差速贴壁法可以成功分离培养原代绵羊MDSC,且可扩增至20代。(本文来源于《中国计划生育和妇产科》期刊2017年12期）
胡永凯,孙浩林,漆龙涛,李淳德[3]（2016）在《差速贴壁法原代培养椎间盘髓核细胞中的应用优势》一文中研究指出背景:髓核细胞作为椎间盘的主要功能细胞是退变机制研究的重点对象,维持体外培养的髓核细胞的生理功能及细胞表型的稳定至关重要。目的:通过对照研究差速贴壁法在犬鼠椎间盘髓核细胞原代培养中的应用优势。方法:取4周龄雄性Wistar大鼠20只,体外分离培养椎间盘髓核细胞,待原代细胞汇合近90%时进行分组传代,差速贴壁组在传代细胞贴壁30 min时,将未贴壁细胞吸出重新调整浓度后传至新的培养皿中,对照组不作处理。差速贴壁组第1、2代细胞均采用该法分离纯化。对两组第3代细胞进行细胞形态学比较及免疫组化鉴定纯度分析、CCK-8检测细胞功能活性并绘制细胞生长曲线。结果与结论:(1)倒置显微镜观察及苏木精-伊红染色,差速贴壁组细胞均一性较对照组明显增高,对照组髓核细胞中混有较多的成纤维样细胞;(2)Ⅱ型胶原免疫组化鉴定及纯度分析,2组细胞胞浆均为被染成黄褐色,证实为髓核类软骨细胞;(3)纯度分析差速贴壁组阳性率显着高于对照组(P<0.05);(4)CCK-8细胞生长曲线显示,2组细胞均经过2d的生长潜伏期,3d的指数生长期,进入生长停滞期,而对照组较差速贴壁组在潜伏期和指数增长期的早期生长更迅速。(5)结果说明,差速贴壁法是原代培养大鼠髓核细胞一种实用、有效的分离纯化方法;原代培养、经2次差速贴壁法分离纯化的第3代大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致,细胞纯度更高,其对数增长期可以作为椎间盘细胞机制研究的最佳时期。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2016年42期）
焦国华,高洪丽,吴贽,张志光[4]（2016）在《差速贴壁法体外分离培养小型猪脂肪间质干细胞的实验研究》一文中研究指出目的探讨差速贴壁法对小型猪脂肪间质干细胞(ADSC)提取和纯化的可行性。方法从两成软骨10月龄的中国实验用I系小型猪皮下脂肪组织获取ADSC,培养4~6 h倒置显微镜下观察,见少量细胞贴壁,立刻将含有未贴壁细胞的培养基接种到新培养瓶内继续培养,传统培养法不换培养瓶,以后均每3 d换液1次。完全培养基传至第3代MTT法绘制生长曲线,并测定两种培养法获得的细胞不同代数的贴壁时间;诱导培养基向脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞诱导并鉴定。贴壁时间、表面抗原阳性率、分化诱导染色阳性率实验数据比较采用单因素方差分析及t检验。结果采用差速贴壁培养法可分离培养出小型猪ADSC,并可除去部分贴壁的成纤维细胞、上皮细胞和脂滴,传代后培养瓶中脂滴明显减少;差速贴壁培养法获得的ADSC在贴壁时间方面较传统方法获得的ADSC短,前者传代后的贴壁时间(3.5±0.2)h较后者(5.8±0.3)h短,差异具有统计学意义(t=12.55,P=0.01);两种方法获得的ADSC中CD34阳性率:差速法为(1.17±0.01)﹪,传统法为(0.99±0.03)﹪;CD44阳性率:差速法为(88.90±0.03)﹪,传统法为(89.23±0.10)﹪;CD106阳性率:差速法为(1.18±0.05)﹪,传统法为(1.56±0.06)﹪;差异均统计学意义(t=0.12,1.23,0.37,P=0.06,0.07,0.06)。油红O、苏丹黑B、Von kossa、茜素红、阿尔新蓝、II型胶原染色结果表明差速贴壁法获得的ADSC可分化为脂肪细胞、成骨细胞和成软骨细胞,且阳性染色率分别为(78±2)﹪、(82±6)﹪、(85±1)﹪、(83±3)﹪、(76±9)﹪、(74±1)﹪,较传统法的(68±1)﹪、(69±2)﹪、(73±0)﹪、(75±1)﹪、(69±3)﹪、(65±4)﹪高,差异具有统计学意义(t=5.21,12.56,16.27,10.33,17.01,23.97;P=0.02,0.03,0.01,0.01,0.00,0.00)。结论采用差速贴壁培养法可从小型猪皮下脂肪组织可以分离培养出ADSC,从细胞形态学、生物学特性及多向分化能力等方面都较传统法获得的ADSC具有优势。(本文来源于《中华细胞与干细胞杂志(电子版)》期刊2016年03期）
陈秋月,徐稳安,陈佳婧,屈茜,吴补领[5]（2014）在《改良差速贴壁法纯化GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞》一文中研究指出目的:应用改良差速贴壁法培养纯化绿荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓间充质干细胞,以探求纯化小鼠骨髓间充质干细胞的最佳方法。方法:取6周龄GFP小鼠股骨全骨髓,采用贴壁法进行体外培养,待细胞融合至80%~90%胰酶消化传代:A常规方法:常温下胰酶消化2分钟,将消化下来的细胞传代。B改良法:胰酶室温消化1min,保留仍贴壁的细胞,37°条件下胰酶再次消化2min,弃去仍然贴壁的细胞,将第二次消化下的细胞接种,静置半小时后换液,弃去未贴壁细胞。荧光显微镜下观察各组贴壁细胞荧光状态、数量及形态学特征,MTT法绘制细胞生长曲线,体外诱导观察其成骨成脂能力,流式细胞术检测绿荧光蛋白表达率。结果:贴壁法获得数量较多,形态多样的原代细胞。随着传代次数的增加,细胞形态一致性不断增高。与传统传代方法相比,改良差速贴壁法更早获得纯度较高的细胞。传代不影响细胞GFP的表达及其增殖、分化潜能,使得纯化的BMSCs可作为示踪细胞进一步用于研究工作。结论:改良差速贴壁培养法可提高纯化BMSCs效率。(本文来源于《2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议论文汇编》期刊2014-09-18）
张鸿,黄挺[6]（2014）在《酶差速脱壁法联合差速贴壁法分离人颊黏膜上皮干细胞》一文中研究指出目的培养人颊黏膜上皮细胞和分离上皮干细胞,在角膜缘干细胞微环境下诱导颊黏膜上皮干细胞转分化,为前者获取足够的种子细胞。方法应用Epilife培养基培养颊黏膜上皮细胞,使用CFSE标记,观察CFSE标记率及标记细胞与未标记细胞的生物学特性。采用免疫荧光检测第2代细胞P63、CK12、CK13的表达。应用酶差速脱壁法联合差速贴壁法分离培养颊黏膜上皮干细胞,观察体外培养生物学特性。采用免疫荧光检测第2氉代纯化细胞P63、CK12、CK13的表达。结果颊黏膜上皮细胞在Epilife培养基中生长良好。CFSE标记率可达100%,标记细胞与未标记细胞生物学特性相似。经联合分离法获得的第2代细胞免疫荧光P63、K13阳性,K12阴性,而未经联合分离法获得的第2代细胞免疫荧光CK13阳性,P63、CK12阴性。结论人颊黏膜上皮细胞在Epilife培养基中生长良好。CFSE是理想的颊黏膜上皮细胞荧光标记物。酶差速脱壁法联合差速贴壁法纯化了颊黏膜上皮干细胞,为转分化为角膜上皮干细胞获取了足够的种子细胞。(本文来源于《眼科新进展》期刊2014年06期）
陈伟斌[7]（2014）在《侧群细胞分选法与差速贴壁法在骨骼肌肌源性干细胞提取中的比较》一文中研究指出目的验证骨骼肌中存在侧群细胞；验证侧群细胞分选法可以用来分离纯化肌源性干细胞；比较侧群细胞法与差速贴壁法这两种方法之间的差异。方法选取6周SD大鼠,取其后腿骨骼肌,分离提取骨骼肌干细胞,然后分别用侧群细胞法进行分选及差速贴壁法体外培养纯化,最后将两种不同方法得到的的细胞进行免疫荧光、Western blot及PCR检测,对比两组之间的差异。结果骨骼肌中分选出侧群细胞；Desmin、Sca-1、CD34叁种肌源性干细胞标志物在侧群细胞法分选得到的细胞中呈阳性表达,且其表达强度与差速贴壁法所得细胞无明显差异。结论骨骼肌中存在侧群细胞；分选所得侧群细胞中含有大量肌源性干细胞,可以采用侧群细胞法来进行肌源性干细胞的提取；侧群细胞法与差速贴壁法相比较更加省时,操作更加简便。(本文来源于《华中科技大学》期刊2014-05-01）
印文静,颜海华,冯亚松,田洁,王胜军[8]（2013）在《采用差速贴壁法培养动物及人细胞研究进展》一文中研究指出细胞培养是现代生物医学的重要技术之一,在细胞生物学、生物化学、临床检验学等领域应用较为广泛,成为阐释生命现象、发病机理和筛选药物的重要手段,已成为医药生物技术产业的重要部分之一[1]。差速贴壁法由Kreider和Pleasure(本文来源于《吉林医学》期刊2013年25期）
辛毅,刘小希,赵伟,刘飒,李娜[9]（2013）在《差速贴壁法分离兔骨髓源性间充质干细胞和内皮祖细胞及其生物学特性的研究》一文中研究指出本研究探讨一种高效、稳定的从兔骨髓中同时分离培养间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSC)和内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPC)的方法并观察其生物学特性。抽取兔骨髓,应用密度梯度分离单个核细胞,采用差速贴壁经纤连蛋白包被并结合EGM-2MV培养基分别扩增MSC和EPC。用台盼蓝法测定细胞传代成活率,通过绘制生长曲线法、MTT法、DNA周期检测MSC和EPC的增殖能力及诱导分化成骨细胞、成脂肪细胞能力,并结合流式细胞术(FCM)检测MSC免疫原型以鉴定MSC;细胞吞噬功能特异性地摄取Dil-ac-LDL及FITC-UEA-1,并结合CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光鉴定EPC,并计算其纯度。结果表明,经密度梯度分离单个核细胞,在早期贴壁细胞24 h换液时即可见明显集落形成,8 d后达80%融合,细胞呈均匀一致的长梭形排列;2次贴壁细胞经EGM-2MV培养基培养,第3天开始伸展,约8 d可融合近80%,细胞呈多角形,出现条索状结构;2种细胞台盼蓝法测定细胞传代成活率均在90%以上,传至第2代后,生长曲线均近似"S"形;MTT法检测显示,细胞生长d 3至d 5时光密度值变化较明显;MSC G0-G1期为(93.32±1.65)%、EPC G0-G1为(93.05±1.95)%,2种细胞DNA周期无明显差异;早期贴壁细胞FCM检测CD90、CD44阳性率为(99.7±1.12)%、(99.1±2.33)%;CD14、CD45、CD79a阳性率分别为(4.8±0.38)%、(6.8±0.49)%及(0.4±0.08)%,经体外诱导能够向成骨细胞及脂肪细胞分化,鉴定为MSC;2次贴壁细胞传至第2代经Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色阳性率(82.1±3.4)%,CD133、VEGFR2/KDR、CD34免疫荧光染色阳性率分别为(74.2±3.2)%、(64.7±4.3)%及(43.5±1.5)%,鉴定为EPC。结论:应用密度梯度分离法结合差速贴壁筛选法可培养出高纯度的MSC,2次贴壁细胞经纤连蛋白预包被并结合EGM-2MV培养基体外诱导可培养出增殖能力较强的EPC,为组织工程学研究提供种子细胞。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2013年03期）
杨娜娜,焦鹏,李大伟,王孟赞,姚树桐[10]（2011）在《差速贴壁分离法:获得小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养的最佳贴壁时间》一文中研究指出本文旨在比较差速贴壁方法分离的不同时间点贴壁的小鼠骨髓单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞的生物学特性,探讨最适宜贴壁时间。Ficoll密度梯度离心分离小鼠骨髓单个核细胞,接种于预先铺有纤维连接蛋白的培养板上,定义为1d贴壁细胞组,取1d非贴壁细胞再接种为3d贴壁细胞组,继续培养2d取非贴壁细胞再接种为3d非贴壁细胞组,继续培养20d后,分别检测3组诱导分化内皮祖细胞亚群表面标志、粘附能力和成血管能力。结果显示,1d贴壁细胞中CD34+、FLK-1+、CD34+/FLK-1+细胞数明显多于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞(P<0.01);1d贴壁细胞粘附能力、成血管能力均显着高于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞;1d贴壁细胞和3d贴壁细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial NO synthase,eNOS)表达量无显着差异,但均显着高于3d非贴壁细胞(P<0.01);3d贴壁细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平显着高于1d贴壁细胞和3d非贴壁细胞(P<0.01)。以上结果提示,小鼠骨髓单个核细胞1d贴壁诱导分化的内皮祖细胞生物学功能显着高于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞;3d贴壁细胞较1d贴壁细胞和3d非贴壁细胞表达较多的VEGF,1d贴壁细胞和3d贴壁细胞eNOS表达高于3d非贴壁细胞。小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养最适宜贴壁时间为1～3d。(本文来源于《生理学报》期刊2011年06期）
差速贴壁论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨改良差速贴壁法原代培养成年大型哺乳类动物绵羊肌源性干细胞(muscle-derived stem cells,MDSC)的可行性。方法改良差速贴壁法分离培养原代绵羊MDSC,并通过免疫荧光检测及western blotting法检测干细胞抗原-1(stem cell antigen,Sca-1),Desmin及CD 34表达情况。Western blotting法检测贴壁细胞(pp)1~pp6的Desmin表达情况来反应纯化情况。结果利用改良差速贴壁法可以成功分离培养出绵羊MDSC,该干细胞Sca-1,Desmin及CD 34表达均阳性,贴壁慢的细胞Desmin表达增高,在pp6中表达最高。结论改良差速贴壁法可以成功分离培养原代绵羊MDSC,且可扩增至20代。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
差速贴壁论文参考文献
[1].李艳,张瑜,李斐雪.差速贴壁法在原代星形胶质细胞纯化中的应用[J].杭州师范大学学报(自然科学版).2019
[2].李玢,邓卓,甘露,姜向阳,张璐.关于改良差速贴壁法原代培养大型成年哺乳动物绵羊肌源性干细胞的研究[J].中国计划生育和妇产科.2017
[3].胡永凯,孙浩林,漆龙涛,李淳德.差速贴壁法原代培养椎间盘髓核细胞中的应用优势[J].中国组织工程研究.2016
[4].焦国华,高洪丽,吴贽,张志光.差速贴壁法体外分离培养小型猪脂肪间质干细胞的实验研究[J].中华细胞与干细胞杂志(电子版).2016
[5].陈秋月,徐稳安,陈佳婧,屈茜,吴补领.改良差速贴壁法纯化GFP转基因小鼠骨髓间充质干细胞[C].2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议论文汇编.2014
[6].张鸿,黄挺.酶差速脱壁法联合差速贴壁法分离人颊黏膜上皮干细胞[J].眼科新进展.2014
[7].陈伟斌.侧群细胞分选法与差速贴壁法在骨骼肌肌源性干细胞提取中的比较[D].华中科技大学.2014
[8].印文静,颜海华,冯亚松,田洁,王胜军.采用差速贴壁法培养动物及人细胞研究进展[J].吉林医学.2013
[9].辛毅,刘小希,赵伟,刘飒,李娜.差速贴壁法分离兔骨髓源性间充质干细胞和内皮祖细胞及其生物学特性的研究[J].中国实验血液学杂志.2013
[10].杨娜娜,焦鹏,李大伟,王孟赞,姚树桐.差速贴壁分离法:获得小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养的最佳贴壁时间[J].生理学报.2011
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