导读:本文包含了重组表达蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,免疫,小鼠,病毒,佐剂,质粒,原性。
重组表达蛋白论文文献综述
郭叁君[1]（2018）在《鲍曼不动杆菌叁种重组表达蛋白的免疫原性和免疫保护性研究》一文中研究指出目的:通过原核重组表达获得鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)重组蛋白OmpK、Omp22及Omp K/Omp22融合蛋白,动物免疫接种后检测并比较分析其免疫原性和免疫保护性,探讨构建鲍曼不动杆菌基因重组亚单位疫苗的新策略。方法:1.采用PCR的方法以鲍曼不动杆菌标准菌株ATCC19606基因组DNA为模板扩增OmpK、Omp22基因,并通过重迭延伸PCR获得OmpK/Omp22融合基因,将OmpK、Omp22基因及OmpK/Omp22融合基因分别克隆入pColdI质粒载体,对筛选到的重组质粒进行酶切鉴定和DNA测序鉴定。将重组质粒分别转化大肠杆菌BL21(DE3)株,重组菌经异丙基硫代半乳糖苷诱导后,镍亲和柱纯化重组蛋白。2.分别将3种重组蛋白各20μg(溶于PBS缓冲液50μL)与等体积弗氏佐剂混合后作为抗原免疫接种Balb/c小鼠,并于初次免疫后第14、21天以相同剂量重组蛋白与弗氏佐剂混合后各加强免疫一次,设置PBS对照组(即只给每只动物注射PBS溶液50μL和等体积弗氏佐剂)。于末次免疫后第7、21天小鼠内眦取血,酶联免疫吸附试验测定抗血清效价。3.末次免疫后第3周分离小鼠脾淋巴细胞,体外经相应抗原刺激后,MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平,ELISA法测定IFN-γ细胞因子释放水平。4.末次免疫3周后以鲍曼不动杆菌临床分离株攻击免疫小鼠,记录小鼠存活率,采集小鼠外周血检测其细菌载量,分离小鼠肺组织HE染色后观察其病理变化。结果:成功构建了3个重组质粒pColdI-OmpK/Omp22、pColdI-OmpK、pColdI-Omp22,转化大肠杆菌BL21(DE3)株后经IPTG诱导可表达分子量与理论值一致的3个重组蛋白OmpK/Omp22、OmpK、Omp22,纯化的重组蛋白免疫小鼠后获得的抗血清均具有特异性,末次免疫后的第7、21天融合蛋白OmpK/Omp22免疫组小鼠血清抗体滴度明显高于Omp K免疫组及Omp22免疫组(P<0.05)。Omp K/Omp22免疫组小鼠的脾淋巴细胞经相应抗原再次刺激后的淋巴细胞增殖率明显高于OmpK免疫组及Omp22免疫组(P<0.05)。OmpK/Omp22、OmpK、Omp22免疫小鼠脾淋巴细胞IFN-γ产量分别为:0.521±0.069ng/mL,0.48±0.042ng/mL,0.485±0.050ng/mL均高于PBS对照组(0.423±0.1088ng/mL)。PBS对照组小鼠受到鲍曼不动杆菌临床分离菌株攻击感染后72h内全部死亡,而直至攻击感染后第8天OmpK/Omp22、Omp K、Omp22免疫组小鼠存活率分别为66.7%,25%,37.5%。OmpK/Omp22、OmpK、Omp22免疫小鼠外周血细菌载量均低于PBS对照组(P<0.05),而OmpK/Omp22融合蛋白组细菌载量最低(P<0.01)。肺组织HE染色结果显示PBS对照组肺组织存在严重的间质性肺炎改变,其血管周围可见大量炎性细胞浸润,OmpK和Omp22免疫小鼠的肺组织出现中等度肺炎改变及中等度的炎性细胞浸润,而Omp K/Omp22融合蛋白免疫组小鼠肺组织仅表现为轻度的炎症反应和极少量炎性细胞浸润。结论:3种重组蛋白小鼠免疫接种后均表现出较强的免疫原性和一定程度的免疫保护性,融合蛋白OmpK/Omp22的免疫原性和免疫保护性明显强于单个重组蛋白OmpK及Omp22。该研究结果可为进一步优化鲍曼不动杆菌亚单位疫苗分子设计以及构建包含多个抗原组分的多亚单位疫苗等研究提供参考依据。(本文来源于《川北医学院》期刊2018-05-01）
陈卓[2]（2015）在《马疱疹病毒I型gD基因真核重组质粒与原核表达蛋白联合免疫效果研究》一文中研究指出马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis)被世界动物卫生组织(OIE)列为B类动物疫病,是由马疱疹病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。马疱疹病毒包括马疱疹病毒I型(Equine herpesvirus I)和马疱疹病毒IV型(Equine herpesvirus IV)。EHV-IV主要感染上呼吸道。EHV-I可影响多个器官系统,患畜表现为发热、食欲不振以及呼吸道等症状,有些可引起流产、新生马驹死亡、神经系统疾病等。虽然感染马鼻肺炎后死亡率不高,但是其引起的后遗症会给马匹带来巨大的健康隐患。根据Genbank上公布的马疱疹病毒I型(EHV-I)gD基因的序列分别设计一对特异性引物并进行扩增,获取的目的基因片段克隆到pMD19-T载体中,将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pVAX1上,PCR、酶切及DNA测序结果证实成功构建了含有马疱疹病毒I型gD基因的真核表达载体pVAX1-gD。通过介导重组质粒转染BHK-21细胞,经Western blot证实基因可在BHK-21细胞中表达。随后将gD重组质粒与gD蛋白分别与混合肌肉注射免疫小鼠,检测一免、二免的小鼠血清中和抗体效价,以及二免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。ELISA与MTT检测结果表明,联合免疫能有效的诱导特异性血清中和抗体的产生,同时显着促进了特异性淋巴细胞的增殖。本研究成功构建了pVAX1-gD真核重组质粒,并且与pET-30a-gD蛋白联合免疫能诱导机体产生较高的体液免疫与细胞免疫,为马鼻肺炎基因工程疫苗的研制奠定了基础。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2015-05-01）
顾昀,周晓丽,袁秀芳,杜晓莉,徐丽华[3]（2015）在《猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立》一文中研究指出为了检测猪血清中猪流行性腹泻病毒抗体水平,用纯化的猪流行性腹泻病毒N基因重组表达蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为0.5μg/m L,包被时间4℃过夜,5%脱脂乳的PBS封闭37℃2 h及4℃过夜。血清稀释度为1∶100;37℃作用45 min,辣根过氧化物酶标记兔抗猪Ig G稀释度为1∶10 000,37℃温育60 min,底物显色37℃15 min。抗体临界值为OD450nm≥0.30判为阳性,OD450nm≤0.27判为阴性,介于二者之间判为可疑。经重复性试验和交叉试验,结果表明,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。用已建立的ELISA方法检测临床血清样本184份,总阳性率为68.5%。(本文来源于《华北农学报》期刊2015年01期）
顾昀,周晓丽,袁秀芳,杜晓莉,徐丽华[4]（2014）在《猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立与应用》一文中研究指出引言2010年末至今,浙江省部分地区猪场出现暴发性新生仔猪严重腹泻,大批死亡的疫情,给养猪业带来巨大经济损失~([1])。用ELISA方法检测血清中病毒抗体水平是临床上常用的方法之一,但到目前为止,ELISA抗体检测方法检测PEDV抗体水平在临床上极少应用。虽然许多学者对PEDV ELISA检测方法进行了研究探索~([2]),商品化的PEDV检测试剂盒都是用PEDV全病毒抗原包被的,在检测过程中其(本文来源于《中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集》期刊2014-11-08）
何光志,牛李丽,杨光友,邓家波,王帅[5]（2009）在《似蚓蛔虫Al-Ag1基因的克隆表达和重组表达蛋白的免疫保护研究》一文中研究指出采用RT-PCR分别扩增出了来自于黑猩猩和人的似蚓蛔虫Al-Ag1基因,扩增产物克隆人pMD18-T载体并进行测序,测得扩增片段长度均为530bp。通过BLAST分析,似蚓蛔虫黑猩猩株Al-Ag1基因与猪蛔虫L2R59(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集》期刊2009-08-01）
张立娜,华彦,柴洪亮,贾竞波[6]（2009）在《重组鸡白细胞介素18对不同基因型新城疫病毒HN基因表达蛋白免疫活性的影响》一文中研究指出白细胞介素18(IL-18)是被广泛研究的细胞因子佐剂之一。研究选择了IL-18作为纯化蛋白多肽的佐剂,观察其对多肽疫苗的免疫应答作用,从而为研制新型的多肽疫苗奠定一定的理论基础。1材料与方法1.1材料rChIL-18,自行制备的原核表达载体pPROEX(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2009年11期）
郭晨云,廉艳东,高红昌,林东海[7]（2008）在《小鼠附睾特异表达蛋白Lcn6的重组制备及其配体结合特性的研究》一文中研究指出附睾中分泌着许多特异性表达的蛋白,这些蛋白与精子的成熟密切相关。Lipocalin 6(Lcn6)是在附睾起始端特异表达的蛋白,属于lipocalin蛋白家族。最近,我们的合作者张永莲院士实验室用RNA干挠方法下调小鼠mLcn6表达,用(本文来源于《第十五届全国波谱学学术会议论文摘要集》期刊2008-10-01）
陈洋,张永军,吴孔明,彭于发,郭予元[8]（2008）在《转基因植物重组DNA和表达蛋白的环境分子行为》一文中研究指出转基因植物的安全性已经在全球范围内引起了普遍关注。本文从分子水平上就转基因植物的重组DNA在环境中的降解动态、转基因植物重组DNA在生物体内的传递、转基因植物杀虫蛋白在环境中的降解及在食物链间的传递等有关研究进展作一简要介绍。(本文来源于《植物保护》期刊2008年01期）
王华,王君玮,陈义平,张维,徐天刚[9]（2007）在《猪链球菌2型叁种重组表达蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护性评价》一文中研究指出将150只BALB/c小鼠随机分成5组。用猪链球菌2型pET32a-Sly、pET32a-38ku和pET32a-Sly-38ku表达的重组蛋白制备的疫苗,以及猪链球菌2型全菌灭活疫苗分别免疫A、B、C、D组小鼠,E组为生理盐水对照。首免后第2周加强免疫1次,二免后第2周,用致死量强毒猪链球菌2型四川分离株和江苏分离株以及马链球菌兽疫亚种安徽分离株攻毒,观察攻毒后对小鼠的免疫保护率。结果,A组与C、D组对猪链球菌2型感染的保护率差异显着(P<0.05),而C组与D组之间保护率无显着差异;A、B、C、D组之间对马链球菌兽疫亚种安徽分离株感染的保护率差异不显着;各免疫组的保护率极显着高于对照组。结果表明,3种重组疫苗具有良好的免疫原性,能对强毒株猪链球菌2型的攻击感染起到保护作用。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2007年10期）
冯改丰,胡海涛,李月英,韩华,王全颖[10]（2005）在《重组基因c-Aβ-c的构建及其表达蛋白的免疫原性分析》一文中研究指出目的:构建原核表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白c-Aβ-c的免疫原性,为阿尔茨海默病(AD)基因工程疫苗的研究打下基础。方法:采用PCR法,分别扩增编码HBcAg的1~71、88~144氨基酸的基因片断(HBc1~71和HBc88~144),以及编码淀粉样肽Aβ1-42的基因。将后者连接于HBc1~71和HBc88~144之间,构建重组质粒pGEMEX/c-Aβ-c,并将重组基因亚克隆于原核表达载体pHGhis中,构建表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,通过温度诱导表达。用SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)检测融合基因的表达。以融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,融合基因重组于表达质粒之中,表达质粒与理论设计相符。诱导表达后,表达蛋白约占细菌沉淀的16%。BALB/c小鼠经3次免疫后,其血清中抗-Aβ抗体的滴度可达1∶16000,且检测不到抗-HBcAg抗体。结论:c-Aβ-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2005年05期）
重组表达蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
马鼻肺炎(Equine rhinopneumonitis)被世界动物卫生组织(OIE)列为B类动物疫病,是由马疱疹病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。马疱疹病毒包括马疱疹病毒I型(Equine herpesvirus I)和马疱疹病毒IV型(Equine herpesvirus IV)。EHV-IV主要感染上呼吸道。EHV-I可影响多个器官系统,患畜表现为发热、食欲不振以及呼吸道等症状,有些可引起流产、新生马驹死亡、神经系统疾病等。虽然感染马鼻肺炎后死亡率不高,但是其引起的后遗症会给马匹带来巨大的健康隐患。根据Genbank上公布的马疱疹病毒I型(EHV-I)gD基因的序列分别设计一对特异性引物并进行扩增,获取的目的基因片段克隆到pMD19-T载体中,将测序鉴定正确的目的基因克隆到真核表达载体pVAX1上,PCR、酶切及DNA测序结果证实成功构建了含有马疱疹病毒I型gD基因的真核表达载体pVAX1-gD。通过介导重组质粒转染BHK-21细胞,经Western blot证实基因可在BHK-21细胞中表达。随后将gD重组质粒与gD蛋白分别与混合肌肉注射免疫小鼠,检测一免、二免的小鼠血清中和抗体效价,以及二免后的小鼠淋巴细胞增殖情况。ELISA与MTT检测结果表明,联合免疫能有效的诱导特异性血清中和抗体的产生,同时显着促进了特异性淋巴细胞的增殖。本研究成功构建了pVAX1-gD真核重组质粒,并且与pET-30a-gD蛋白联合免疫能诱导机体产生较高的体液免疫与细胞免疫,为马鼻肺炎基因工程疫苗的研制奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组表达蛋白论文参考文献
[1].郭叁君.鲍曼不动杆菌叁种重组表达蛋白的免疫原性和免疫保护性研究[D].川北医学院.2018
[2].陈卓.马疱疹病毒I型gD基因真核重组质粒与原核表达蛋白联合免疫效果研究[D].新疆农业大学.2015
[3].顾昀,周晓丽,袁秀芳,杜晓莉,徐丽华.猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立[J].华北农学报.2015
[4].顾昀,周晓丽,袁秀芳,杜晓莉,徐丽华.猪流行性腹泻病毒N重组表达蛋白间接ELISA检测方法建立与应用[C].中国畜牧兽医学会2014年学术年会论文集.2014
[5].何光志,牛李丽,杨光友,邓家波,王帅.似蚓蛔虫Al-Ag1基因的克隆表达和重组表达蛋白的免疫保护研究[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集.2009
[6].张立娜,华彦,柴洪亮,贾竞波.重组鸡白细胞介素18对不同基因型新城疫病毒HN基因表达蛋白免疫活性的影响[J].黑龙江畜牧兽医.2009
[7].郭晨云,廉艳东,高红昌,林东海.小鼠附睾特异表达蛋白Lcn6的重组制备及其配体结合特性的研究[C].第十五届全国波谱学学术会议论文摘要集.2008
[8].陈洋,张永军,吴孔明,彭于发,郭予元.转基因植物重组DNA和表达蛋白的环境分子行为[J].植物保护.2008
[9].王华,王君玮,陈义平,张维,徐天刚.猪链球菌2型叁种重组表达蛋白对BALB/c小鼠的免疫保护性评价[J].中国兽医科学.2007
[10].冯改丰,胡海涛,李月英,韩华,王全颖.重组基因c-Aβ-c的构建及其表达蛋白的免疫原性分析[J].细胞与分子免疫学杂志.2005
论文知识图
