H9N2亚型禽流感病毒NA和M2基因的克隆与表达

论文摘要

旨在分别构建NA蛋白和M2蛋白的重组质粒,并进行表达鉴定。采用PCR扩增了H9N2分离株A/chicken/Shandong/LY1/2017毒株的NA基因和M2基因。同源性分析证实,这2个基因序列与目前流行毒株的基因同源性很高。将NA基因克隆至pcold1原核表达载体,将M2基因克隆至pET28a原核表达载体,成功构建了pcold1-NA和pET28a-M2重组质粒,并成功表达出相应的融合蛋白。然后对表达的融合蛋白进行纯化,并采用免疫印迹验证其免疫反应性。本试验为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒致病机制及检测技术奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 引物的合成
•   1.3 RNA提取及RT-PCR反应
•   1.4 NA和M2基因的原核载体构建
•     1.4.1 酶切并对片段进行纯化
•     1.4.2 酶切产物的连接
•   1.5 蛋白表达与鉴定
•   1.6 蛋白表达形式的鉴定
•   1.7 蛋白纯化及鉴定
• 2 结果
•   2.1 NA和M2基因的扩增
•   2.2 重组质粒pcold1-NA和pET28a-M2的构建
•   2.3 NA基因和M2基因的同源序列分析
•     2.3.1 NA基因测序及同源性比较分析
•     2.3.2 M2基因测序及同源性分析
•   2.4 重组载体pcold1-NA和pET28a-M2的原核表达及纯化
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郝珊珊,郑阳,余远楠,张则,蔡佳希,宗嫚嫚,冯秀丽

关键词: 禽流感病毒,基因,原核表达

来源: 畜牧与兽医 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 南京农业大学动物医学院/农业部动物细菌学重点实验室/教育部"动物健康与食品安全"国际合作联合实验室

基金: 国家重点研发项目(2017YFD0500706),国家自然科学基金(31872458)

分类号: S852.65

页码: 121-127

总页数: 7

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