非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

将合成的非洲猪瘟病毒K205R基因序列插入p ET-28a（+）表达载体,经IPTG诱导表达p ET-28aK205R重组蛋白。用制备的重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用化学融合方法融合、筛选,获得了6A4、7F5和7G3三株抗K205R蛋白的杂交瘤细胞株。经鉴定,这3株单克隆抗体（单抗）的亚类均为Ig G1型;单抗的腹水效价分别为1∶51 200、1∶409 600和1∶102 400。将这3株杂交瘤细胞连续培养20代,在第20代仍有很高的分泌抗体的能力,表明其稳定性较好。Western-blot检测结果表明,这3株单抗与K205R重组蛋白有良好的反应性和特异性。上述结果表明,本研究制备的这3株杂交瘤细胞株能够稳定分泌抗体,分泌的抗体特异性高,为非洲猪瘟诊断技术的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂与实验动物
•   1.2 K205R基因的合成及表达载体的构建
•   1.3 K205R蛋白的表达与纯化
•   1.4 重组K205R蛋白单克隆抗体的制备
•     1.4.1 动物免疫
•     1.4.2 细胞融合及筛选
•     1.4.3 单抗腹水的制备及效价测定
•     1.4.4 单抗与全病毒抗原反应性的鉴定
•   1.5 单抗稳定性和亚类鉴定
•   1.6 单抗反应性与特异性鉴定
• 2 结果
•   2.1 K205R基因的合成及表达载体的构建
•   2.2 重组K205R蛋白的表达与纯化
•   2.3 细胞融合及阳性克隆筛选
•   2.4 单抗腹水效价的测定
•   2.5 杂交瘤细胞株分泌抗体的稳定性和单抗亚类的鉴定
•   2.6 单抗与K205重组蛋白反应性与特异性的鉴定
•   2.7 7F5单抗与全病毒抗原反应性检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵亚茹,韩蓉,杨吉飞,牛庆丽,关贵全,罗建勋,刘光远,殷宏,GRZEGORZ Wozniakowski,刘志杰

关键词: 非洲猪瘟,非洲猪瘟病毒,蛋白,单克隆抗体

来源: 中国兽医科学 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室,江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,Department of Swine Diseases,National Veterinary Research Institute,Pulawy,Poland

基金: 甘肃省重点研发计划项目(18YF1WA131),农业科技创新工程项目(CAAS-ASTIP-2016-LVRI),国家重点研发计划项目(2017YFD0502300),国家肉牛牦牛产业技术体系项目(CARS-37)

分类号: S852.651

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0092

页码: 805-811

总页数: 7

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