导读:本文包含了造血细胞分化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,干细胞,小鼠,胚胎,综合征,骨髓,内皮。
造血细胞分化论文文献综述
倪海涛,胡凯猛,王越,刘厚奇[1]（2019）在《5-Aza联合GF(SCF/GM-CSF)诱导人脐带间充质细胞向造血细胞分化》一文中研究指出为了探索5-Aza联合GF(SCF/GM-CSF)诱导人脐带间充质细胞(hUCMSCs)向造血细胞分化潜能及联合诱导优势,设计实验如下:采用贴壁法分离培养hUCMSCs,取第4代(P4)进行免疫荧光和流式细胞仪检测间充质干细胞的标志性分子vimentin、α-SMA、Oct-4、Sox-2、HLA-1、CD29、CD34、CD133、CD44和CD45。诱导实验分为:(1)GF组(50 ng/ml GM-CSF和SCF);(2)5-Aza+(本文来源于《中国解剖学会2019年年会论文文摘汇编》期刊2019-08-18）
郝俊凯[2]（2019）在《小鼠胚胎干细胞定向血管内皮和造血细胞分化体系的建立》一文中研究指出研究背景:在血管发生和重塑的过程中,血管内皮细胞(endothelial cell,EC)起源于血液血管母细胞(hemangioblast,HA)。但由于缺乏对这一发育过程诸多细节的深入了解,因而成熟的血管内皮在体外扩增十分困难,极大地限制了它的功能研究和临床应用。近年来,多项研究表明哺乳动物成体血管内皮中存在一群具有特定分子表型的“血管内皮干细胞(vascular endothelial stem cell,VESC)”,表达Kit(也称CD117)、Procr(也称EPCR、CD201)等分子,能在体外形成稳定克隆并产生数千万的子代内皮细胞。不仅如此,VESC还具有分化为原代内皮细胞和周细胞的双向潜能,可以在体内产生功能性血管,这为组织工程化血管和临床治疗提供了新的研究方向。造血细胞(hematopoietic cell,HC)的起源与血管内皮密不可分。目前的主流观点认为,造血细胞是由中胚层来源、功能特化的生血内皮(hematopoietic endothelium,HE)通过内皮-造血转化(endothelial to hematopoietic cell transition,EHT)分化演变而来,以产生原始造血和定向造血两大主要形式出现于胚胎早期的多个位点和时间节点,具有明显的时空特异性。小鼠胚胎期的造血细胞表达内皮细胞标志CD31、CD144等,来自外周血CD34~+的造血细胞可以通过体外培养分化为内皮细胞,这些研究也间接证实了造血细胞与内皮细胞有着共同的发育起源。胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)是一类能够分化成机体几乎所有细胞类型的全能干细胞,增殖能力强,是组织工程化研究理想的种子细胞。近年来多项研究表明,在干细胞因子(stem cell factor,SCF)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)等细胞因子的诱导下,ESC在体外能被诱导分化为内皮干祖细胞(endothelial stem and progenitor cell,ESPC),进而分化成内皮细胞、血管壁细胞(周细胞和血管平滑肌)并进一步向动、静脉内皮特化;或者分化为造血干祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell,HSPC),进而向髓系祖细胞(myeloid progenitor)、巨核-红系祖细胞(megakaryocyte–erythrocyte progenitor,MEP)等及其下游血细胞分化。这些发现为ESC的体外诱导编辑研究奠定了理论基础,然而因诱导手段局限、调控网络不清晰、微环境缺失等原因,ESC体外定向内皮细胞和造血细胞的分化体系仍不十分成熟。研究目的:本研究利用胚胎干细胞的发育全能性和诱导可塑性,通过各种细胞因子和条件控制,定向诱导其分别向内皮细胞和造血细胞分化,构建完整的体外定向分化体系。通过流式检测、免疫组化等各种手段验证诱导后2种细胞的表面分子特征,探索诱导过程中是否存在“干祖细胞”的中间态及其表面分子特征,探讨内皮和造血发育的相关性,为优化稳定、成熟的体外诱导分化体系,进而进行大规模组织工程化应用研究提供实验基础。研究方法:根据胚胎期内皮、造血细胞的起源规律,本研究在无血清的StemPro培养体系中,使用能够诱导干细胞向中胚层分化的BMP4(bone morphogenetic protein 4,骨形态发生蛋白4)、Activin A(激活素-A),以及能够诱导内皮细胞增殖、迁移的FGF-Basic(fibroblast growth factor basic,碱性成纤维细胞生长因子)和VEGF这4种因子,诱导小鼠胚胎干细胞系R1/E形成拟胚体(embryoid body,EB),模拟中胚层发育过程,再用SCF、VEGF和SCF、FLt3L(FLt-3 ligand)、IL-3分别定向诱导EB向EC和HC分化,建立胚胎干细胞体外定向血管内皮和造血细胞的分化系统。研究结果:经过四因子体系诱导分化4天后,ESC成功被诱导为大量形态饱满、克隆边界清楚的EB;继续向内皮和造血定向分化6天后,成功诱导出多个内皮管状结构和造血集落。通过流式检测分析,CD31~+的内皮细胞比例为1.35±0.05%,进一步分析CD31~+CD144~+CD45~-群体,发现其中有3.0±0.2%的细胞表型为Kit~+CD201~+,提示该部分细胞可能是处于分化上游的ESPC;CD45~+的造血细胞比例为35.0±0.5%,其中有0.35±0.05%的细胞表型为Kit~+CD201~+,提示该部分细胞可能是处于分化上游的HSPC。这两群细胞数量非常有限,但具有非常典型的干祖细胞特征标记,且表型相似,间接印证了内皮细胞和造血细胞有着共同的命运起源,与既往的研究认识不谋而合。研究结论:本研究成功地建立了将胚胎干细胞体外定向内皮细胞和造血细胞分化的体系,间接验证了二者可能存在共同的胚胎起源,并且通过流式检测捕捉到具有内皮、造血干祖细胞分子特征的细胞,可作为良好体外诱导分化体系,为深入探讨内皮、造血细胞的发育调控机制及以胚胎干细胞体外大规模定向诱导分化奠定了实验基础。(本文来源于《军事科学院》期刊2019-05-30）
郝俊凯,周杰,刘兵[3]（2019）在《小鼠胚胎干细胞定向血管内皮和造血细胞分化体系的建立》一文中研究指出目的:建立小鼠胚胎干细胞体外定向分化为血管内皮细胞和造血细胞的体系,并验证诱导后2种细胞的表面分子特征。方法:以小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,首先在无血清培养基StemPro中加入骨形态发生蛋白4(BMP4)、激活素A、碱性成纤维细胞生长因子(FGF-Basic)和血管内皮细胞生长因子(VEGF),诱导小鼠胚胎干细胞系R1/E 4 d后形成拟胚体;再将拟胚体消化后与OP9-DL1基质细胞共孵育,分别用干细胞因子(SCF)、VEGF和SCF、FLt3、白细胞介素3(IL-3)诱导向内皮和造血2个方向分化,并以CD31、CD45、CD144、Kit、CD201作为表面标志,流式检测诱导后细胞的表面分子特征和诱导效率;诱导10 d后免疫组化染色,进行内皮细胞的形态学鉴定。结果:诱导分化10 d后,免疫组化染色观察到多个内皮管状结构,流式检测CD31~+的内皮细胞比例为1.35%±0.05%,进一步分析CD31~+CD144~+CD45~-群体,有3.0%±0.2%的细胞表型为Kit~+CD201~+,提示该部分细胞可能是处于分化上游的内皮干祖细胞;CD45~+的造血细胞比例为35.0%±0.5%,其中0.35%±0.05%的细胞表达Kit和CD201,提示该部分细胞可能是处于分化上游的造血干祖细胞。结论:本研究将胚胎干细胞诱导为内皮细胞和造血细胞,并且能诱导出具有内皮、造血干祖细胞分子特征的细胞,可作为理想的体外诱导分化体系。(本文来源于《生物技术通讯》期刊2019年02期）
赵晓丽[4]（2018）在《构建基因工程小鼠Dp(16)1Yey/miR-155-并利用该小鼠研究miR-155基因剂量对DS小鼠造血细胞增殖分化以及相关TPO信号传导途径的影响》一文中研究指出目的:唐氏综合征即,又称先天愚型或Down综合征,是由染色体异常多了一条21号染色体而导致的疾病。此研究旨在构建唐氏综合征模型小鼠Dp(16)1Yey/mi R-155-并利用该小鼠研究mi R-155基因剂量对唐氏综合征小鼠造血细胞增殖分化以及相关TPO信号传导途径的影响。方法:将mi R155敲除小鼠(mi R155+/-)和DS小鼠(Dp16/+)交配获得含有两个mi R155拷贝的DS小鼠(Dp16/mi R155-)以及含有叁个mi R155拷贝的DS小鼠(Dp16/+),同窝后代小鼠中还有野生型小鼠(+/+)。首先分析叁种基因型小鼠不同月龄外周血异常。比较了不同基因型小鼠脾脏重量,并将小鼠脾脏、肝脏、骨髓组织切片HE染色观察造血分布。为了进一步在细胞学水平进行验证造血细胞分布,使用流式细胞术对不同基因型小鼠脾脏及骨髓进行分析。使用流式细胞术分析了不同基因型15月龄小鼠骨髓造血干细胞(lineage-,Sca1+,c-Kit+)(LSK)及髓系祖细胞(lineage-,Sca1-,c-Kit+)数量,用于明确外周血及脾脏和骨髓细胞学异常是否与造血干细胞或祖细胞变化有关。使用Westernblot方法分析了不同基因型小鼠造血系统中STAT信号蛋白表达异同。结果:成功构建了这叁种基因型小鼠。这叁种基因型3月龄至15月龄小鼠外周血全血计数结果表明,与野生型对照小鼠相比,Dp16/+小鼠自3月龄起,外周血红细胞(RBC)数目开始减少;自9月龄起,血红蛋白浓度(HGB)开始降低。而Dp16/mi R155-与野生型小鼠几乎一致。此外,外周血计数结果还表明,Dp16/+小鼠自3月龄起平均红细胞体积(MCV)及平均红细胞血红蛋白含量(MCH)比野生型对照显着增高,而Dp16/mi R155-与野生型小鼠差异不显着。自6月龄起,Dp16/+小鼠血小板数(PLT)及血小板体积(MPV)目显着提高,而Dp16/mi R155-与野生型小鼠差异不显着。以上结果表明,Dp16/+小鼠外周血异常可能与mi R155水平有关。在16-24月龄小鼠中,与野生型对照小鼠(104.07±25.34 mg,n=6)相比,Dp16/+小鼠脾脏重量(225.67±38.41 mg,n=6)显着增加,而Dp16/mi R155-(142.55±39.28 mg,n=6)与野生型小鼠差别不大。脾脏组织切片HE染色结果表明,野生型小鼠的白髓和红髓之间的分隔比较明显,在Dp16/+小鼠和Dp16/mi R155-之间区分不明显。肝脏病理切片HE染色结果表明,野生型小鼠肝脏组织的中央静脉周围的肝索结构明显,在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中该结构不明显。在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中,CD41+巨核系细胞含量显着高于野生型对照小鼠,同时还发现,Ter119+红系细胞数目在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中显着下降。没有发现Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠之间的区别。与野生型对照小鼠相比,Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠造血干细胞(LSK)数量增加而髓系祖细胞(lineage-,Sca1-,c-Kit+)数量减少,Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠之间无显着差异。在髓系祖细胞中,虽然共同髓系祖细胞(CMP)(lineage-,Sca1-,c-Kit+,CD34+,FcγR-)数目在各基因型小鼠中差异不大,巨红系祖细胞(MEP)(lineage-,Sca1-,c-Kit+,CD34-,FcγR-)数量在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中增加了,而粒单核系祖细胞(GMP)(lineage-,Sca1-,c-Kit+,CD34+,FcγR+)数量在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中减少了,Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠之间差异不显着。STAT3蛋白在DS小鼠Dp16/+中的表达量最高,而在野生型和Dp16/mi R155-小鼠中没有显着性差异。结论:成功构建了基因工程小鼠Dp(16)1Yey/mi R-155-。在Dp16/mi R155-和Dp16/+小鼠中,mi R-155基因异常导致骨髓造血干细胞增加,髓系中巨红系造血祖细胞增加,粒单系造血祖细胞减少;骨髓中CD41+巨核系细胞含量显着高,Ter119+红系细胞数目显着下降,脾脏及肝索结构、骨髓组织结构紊乱,这些证据表明mi R-155基因增多或异常导致了唐氏综合征小鼠急性巨核细胞白血病(DS-AMKL)的发病,并出现了脾脏、肝脏的白血病浸润;同时发现叁个mi R-155基因的Dp16/+小鼠外周血中红细胞数量减少,体积变大,存在类巨变反应,血小板数目增多,体积增大,同样存在类巨变,红细胞及血小板均存在畸大反应,存在脾脏增大(与白血病浸润相关)。STAT3蛋白在DS小鼠Dp16/+中的表达量最高,mi R-155异常表达导致TPO信号传导途径相关蛋白STAT3过量表达是外周血异常的重要原因。(本文来源于《华中科技大学》期刊2018-05-01）
单威[5]（2018）在《叁维自组装多肽生物材料介导的小鼠多能干细胞向造血细胞分化的作用及机制研究》一文中研究指出研究背景:造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC)是一种具有自我更新和多向分化潜能的干细胞,目前HSC移植用来治疗各种疾病包括白血病、淋巴瘤、免疫系统疾病、多发性骨髓瘤以及骨髓衰竭综合征。目前全球同种异体和自体HSC移植得到广泛临床应用,但是仍然面临着诸多问题,如供着来源的HSC数量,获得人的白细胞抗原匹配的供者以及移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)。多能干细胞(Pluripotent Stem Cell,PSC)包括胚胎干细胞(Embryonic Stem Cell,ESC)和诱导性多能干细胞(Induced Pluripotent Stem Cell,iPSC),具有体外自我更新和多向分化潜能,因此可以源源不断的提供移植所需要的HSC,另外从病人身上通过体细胞重编程技术获得的PSC,体外诱导分化产生HSC,可作为疾病模型探究疾病的病因,同时提供一个以细胞为基础药物筛选平台。尽管在过去数十年,研究者们不断在探究PSC诱导分化产生可移植的HSC,但并没有建立一种高效获得PSC来源的可供移植的HSC。目前PSC向HSC分化方法主要有(1)利用小鼠或人的基质细胞来诱导PSC造血分化;(2)利用拟胚体(Embryonic bodies,EBs)方法来诱导PSC造血分化;(3)两种方法相结合;(4)畸胎瘤方法。同时采用细胞因子和转录因子结合上述方法,但是PSC向HSC分化依然存在关键科学问题需待解决:(1)诱导分化效率不高;(2)诱导分化获得的HSC体内很难实现长期造血植入潜能。前期的PSC造血分化研究集中于二维环境中进行,其实叁维环境较二维环境能更接近的模拟自然状态下叁维组织结构,在体内胚胎造血发育过程中,细胞与细胞之间不仅相互接触,还需要与周围的细胞外基质环境所包含的各种黏附分子、胶原蛋白等组分相互接触共同来完成胚胎造血发育的过程。细胞外基质环境对细胞的增殖、分化、维持以及组织形态构成起着重要作用。现在研究者们日益致力于开发新型具有型模拟体内叁维组织结构和细胞外基质生物学功能的生物材料来调控干细胞的生物学功能。体内胚胎造血发育过程中,造血微环境如主动脉-性腺-中肾区(aorta-gonads-mesonephros,AGM)、胎肝和骨髓中的基质细胞有利于促进体外PSC向HSC分化并维持和扩增PSC来源的HSC。研究报道AGM区来源的基质细胞AGM-S3促进人和小鼠的HSC扩增[34]。同时AGM-S3联合各种细胞因子促进人PSC向造血干细胞及下游谱系成体有核红细胞分化[35,36]。小鼠胎肝部位来源的基质细胞AFT024能体外高效维持小鼠造血干细胞的长期造血潜能[37]。人的胚胎干细胞与S17、骨髓来源的基质细胞OP9以及胎肝来源的基质细胞共培养自然诱导其向造血细胞分化,但是体外诱导分化效率低,获得的HSC体内没有或非常低的造血植入潜能[38]。本研究拟利用叁维生物材料结合外源性促进PSC向HSC分化和扩增HSC的细胞生长因子,建立一种叁维诱导小鼠PSC向HSC分化的体系,并结合HSC造血微环境中的基质细胞来优化建立的叁维诱导分化体系,目的为了获得小鼠PSC来源的长期造血的HSC,同时我们比较3D培养系统和2D培养环境下对小鼠造血干祖细胞的扩增效果,为体外探究PSC向HSC分化的分子调控机制提供研究平台,为促进PSC来源的HSC向临床应用转化奠定理论基础。1第一章利用自组装多肽生物材料建立小鼠多能干细胞向造血细胞分化的诱导体系目的:体外诱导PSC产生HSC能作为替代骨髓移植的有效手段,并且不会引起GVHD。目前,多种方法被用于评估PSC向HSC的分化,但是诱导分化效率低以及获得HSC功能不完整限制了造血分化的进一步研究。我们研究目的为了建立一种更好模拟体内胚胎发育的3D造血诱导分化环境,促进PSC产生功能性的HSC,而这种3D诱导的条件的复杂性很难通过2D培养系统来实现。方法:首先用扫描电镜技术观察3D自组装多肽水凝胶的结构特征;其次探究3D自组装多肽水凝胶联合造血相关细胞因子诱导小鼠PSC向造血细胞分化,流式检测ckit、CD41、CD45表面分子蛋白的表达水平,荧光定量PCR检测多能性基因Oct3/4、内皮细胞相关基因CDH5、造血相关基因Gata1和HOXA9,造血表面分子CD41和CD45的表达;免疫荧光检测CD41和CD45表面分子蛋白水平表达;克隆形成实验(Colony Formation Unit,CFU)验证3D诱导系统分化获得的造血细胞体外向造血各谱系分化的潜能;6-8周NOD-SCID小鼠用来评估3D诱导系统来源的造血细胞的体内植入潜能。结果:利用3D自组装多肽水凝胶联合细胞因子能有效诱导小鼠PSC向造血细胞分化,流式检测结果显示ckit、CD41、CD45表面分子明显表达;荧光定量PCR检测表明多能性基因Oct3/4表达下调、内皮细胞相关基因CDH5、造血相关基因Gata1和HOXA9,造血表面分子CD41和CD45的基因表达上调;免疫荧光检测CD41、CD45表面分子得到表达;CFU克隆形成实验表明,3D造血诱导系统来源的造血细胞具有向各造血谱系克隆分化潜能;另外体内动物移植实验显示,移植叁周后,外周血检测,CD45.2+细胞在NOD-SCID(CD45.1)小鼠体内植入率有3%,3D造血诱导系统分化获得具有短期造血植入潜能的多潜能造血祖细胞。结论:利用3D自组装多肽水凝胶联合细胞因子能有效诱导小鼠PSC向造血细胞分化,获得体外向各谱系造血分化潜能的造血细胞,体内具有短期造血植入潜能的造血祖细胞。2第二章利用OP9基质细胞提高自组装多肽生物材料介导的3D诱导分化体系的效率目的:OP9或OP9-DL1基质细胞体外有利于促进PSC向HSC分化,同时可促进体外胚胎发育过程中造血前体细胞和生血内皮细胞向HSC成熟分化,在第一章建立3D诱导小鼠PSC向HSC分化中,每个PSC向HSC分化不是同步的,3D系统中存在多种造血前体和发育早期造血细胞,我们接下来研究目的是利用造血微环境基质细胞OP9来进一步优化3D造血诱导分化系统,目的为了增强PSC向造血干祖细胞分化效率,获得更多功能性的HSC,为PSC向HSC分化的机制研究奠定工作基础。方法:OP9基质细胞联合细胞因子进一步诱导3D诱导系统分化来的造血样克隆,流式检测不同时间段中胚层表面分子、生血内皮细胞、造血干祖细胞的表面分子flk1、ckit、TIE2、CD144、CD41、CD45、Sca-1 以及目前最新文献报道的 CD201表面分子的表达;CFU克隆形成实验验证OP9基质细胞优化3D诱导系统分化获得的造血细胞向造血各谱系分化的潜能;结果:OP9基质细胞能有效促进3D诱导系统分化来的造血样克隆向造血前体及造血干祖细胞进一步成熟分化,流式检测结果显示ckit、TIE2、CD144、CD41、CD45、Sca-1、CD201表面分子明显表达;中胚层表面分子标记flk1表达水平在共培养诱导分化第2天到第5天上调,第5天到第8天明显下调;CFU克隆形成实验表明,OP9基质细胞优化3D造血诱导系统来源的造血细胞具有向各造血谱系克隆分化潜能;结论:利用OP9基质细胞能有效促进3D诱导系统分化来的造血样克隆向造血前体及造血干祖细胞进一步成熟分化,产生一群类似于胚胎发育过程中AGM区的pre-HSC,并且获得一群未见报道的CD201+LSK造血细胞。3第叁章自组装多肽生物材料介导的3D培养体系较2D培养体系利于小鼠造血干祖细胞的扩增目的:为了探究自组装多肽生物材料介导的3D诱导系统确实有助于为体外探究PSC向HSC提供好的平台,我们进一步比较所建立的3D诱导系统较2D诱导系统是否有效对小鼠骨髓来源的造血干祖细胞进行扩增,为探究3D系统之所以利于PSC向HSC诱导分化的机理研究奠定基础。方法:分选小鼠骨髓来源的ckit+细胞,利用3D自组装多肽生物材料水凝胶联合造血相关细胞因子及小分子化合物对其扩增,并与2D同样扩增条件下作以比较扩增效果,普通光镜下观察ckit+细胞生长情况,流式检测两种不同条件下Lineage-Sca-1+ckit+(LSK)细胞比例,以及向下游各造血谱系细胞分化的程度。CFU克隆形成实验比较两种不同扩增条件克隆形成能力差别。结果:3D自组装多肽水凝胶联合细胞因子及小分子化合物,较2D同样条件下扩增ckit+细胞,能更好维持造血干祖细胞,3D环境中LSK(Lineage-Sca-1+ckit+)阳性细胞比例较2D条件下高,有明显差异;CFU克隆形成实验表明,3D与2D比较,同样细胞数量条件下,3D的CFU克隆数比2D的CFU克隆数高,有明显差异。结论:自组装多肽生物材料介导的3D培养体系较2D培养体系更有利于维持小鼠骨髓来源的造血干祖细胞干性,并且利于HSC下游血液各谱系细胞的生长维持,与2D比较,3D系统能更好模拟体内,营造维持HSC干性微环境,为探究PSC向HSC分化提供理论依据。(本文来源于《浙江大学》期刊2018-03-01）
景鹏伟,胡文煦,宋小英,张岩岩,贾道勇[6]（2016）在《衰老模型骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖分化》一文中研究指出目的研究衰老骨髓基质细胞对骨髓造血细胞增殖分化能力的影响,为阐述机体造血微环境衰老对造血干/祖细胞增殖的影响提供实验依据。方法全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓基质细胞,分为对照组和衰老组。衰老组:常规培养基内加入30 mg/m L D-半乳糖作用48 h。CCK-8法测定BMSCs增殖;流式细胞术分析细胞周期;β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老BMSCs百分率;Western blot检测P16、P21和P53蛋白表达。骨髓造血细胞与BMSCs共培养,集落计数检测髓系多向性造血祖细胞(CFU-Mix)增殖分化。ELISA检测BMSCs培养上清液中IL-1β、GM-CSF和SCF含量;DCFH-DA流式荧光检测BMSC活性氧簇(ROS)水平;酶学法检测BMSCs内过氧化物丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果与对照组相比,D-半乳糖诱导BMSCs衰老,细胞阻滞于G0/G1期(P<0.01),增殖能力显着下降,SA-β-Gal染色阳性率升高(P<0.01);衰老相关蛋白P16、P21和P53表达明显上调(P<0.01)。与衰老BMSCs共培养的骨髓造血细胞增殖分化能力减弱。衰老BMSCs内ROS、MDA氧化损伤指标上升,SOD抗氧化指标下降(P<0.01);BMSCs培养上清液IL-1β、GM-CSF和SCF含量明显下降(P<0.01)。结论衰老骨髓基质细胞抑制造血细胞增殖、分化能力,其机制可能与骨髓基质细胞氧化损伤,分泌活性因子改变有关。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2016年01期）
李丽娟,邵宗鸿[7]（2015）在《骨髓增生异常综合征造血细胞增殖分化异常研究进展》一文中研究指出骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一组克隆性造血干/祖细胞疾病,其主要临床特征是病态造血及无效造血、难治性血细胞质/量异常,以及高风险向急性白血病转化。本文通过对这一领域的相关研究进展进行综述,表明MDS存在造血细胞分化异常,与血细胞生成有关的细胞和分子因素与MDS的发病机制相关,这些因素可以影响细胞周期相关基因、转录因子、抗凋亡基因及抑癌基因等,结果导致造血细胞凋亡和增殖过程的失衡、细胞周期失控、DNA修复受损、造血微环境和免疫应答改变等。证实了MDS患者存在骨髓造血细胞增殖和分化异常,患者表现为骨髓一系或多系"无效造血"。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2015年05期）
袁雅红,李大哲,于莉,马石楠,李东升[8]（2015）在《脐带间充质干细胞条件培养液促进人胚胎干细胞分化为造血细胞》一文中研究指出目的利用人脐带间充质干细胞造血支持的特性,优化人胚胎干细胞造血分化方案。方法利用组织块培养法分离扩增人脐带间充质干细胞,收集条件培养液。以小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层培养人胚胎干细胞,再用拟胚体培养液诱导拟胚体形成。分别用条件培养液和拟胚体培养液培养拟胚体,再用流式细胞术检测EB中造血标志CD45和CD34的表达。结果利用组织块培养法获得大量形态均一、增殖迅速的脐带间充质干细胞;间充质干细胞条件培养液诱导8d后,拟胚体中的CD45表达60%以上,CD34表达30%以上,远高于含有BMP4的拟胚体培养液的诱导率。结论人脐带间充质干细胞条件培养液可促进人胚胎干细胞的造血分化,并避免动物源污染,节约成本。(本文来源于《贵州医药》期刊2015年09期）
马峰[9]（2015）在《人多能干细胞向造血细胞的体外诱导分化:方法和目标》一文中研究指出由于方法的不同,人类多能干细胞(h PSCs)在体外产生的各种造血细胞的成熟度和功能存在偏差。我们实验室建立了高效的h PSCs与造血微环境基质细胞共培养产生大量造血干/祖细胞的方法。本专题就2种自然免疫相关细胞的早期发育和成熟,以及初期原始造血和成体造血的比较,建立了时序性地观察了h PSCs向造血细胞逐级诱导分化的方法 。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2015年05期）
罗晓鸿,谢建兴[10]（2014）在《骨髓增生异常综合征骨髓造血细胞分化异常及相关机制探析》一文中研究指出目的探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)骨髓造血细胞分化异常的原因及其相关机制。方法选取2010年1月~2012年12月新余市人民医院诊断的MDS患者34例,将所有患者分为低危组(n=11)和高危组(n=23),并另选病例对照组(n=12)和正常对照组(n=15),分别对他们进行相关指标测定。结果高危组CD-11b/CD+11b比值明显高于其它3组,CD-16/CD+16比值高于正常对照组和病例对照组,MFI(CD13)明显高于正常对照组,而MFI(SSC)明显低于病例对照组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床的诊断中加强对骨髓造血细胞分化异常的诊断,有助于提高MDS患者诊断的可靠性。(本文来源于《当代医学》期刊2014年19期）
造血细胞分化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
研究背景:在血管发生和重塑的过程中,血管内皮细胞(endothelial cell,EC)起源于血液血管母细胞(hemangioblast,HA)。但由于缺乏对这一发育过程诸多细节的深入了解,因而成熟的血管内皮在体外扩增十分困难,极大地限制了它的功能研究和临床应用。近年来,多项研究表明哺乳动物成体血管内皮中存在一群具有特定分子表型的“血管内皮干细胞(vascular endothelial stem cell,VESC)”,表达Kit(也称CD117)、Procr(也称EPCR、CD201)等分子,能在体外形成稳定克隆并产生数千万的子代内皮细胞。不仅如此,VESC还具有分化为原代内皮细胞和周细胞的双向潜能,可以在体内产生功能性血管,这为组织工程化血管和临床治疗提供了新的研究方向。造血细胞(hematopoietic cell,HC)的起源与血管内皮密不可分。目前的主流观点认为,造血细胞是由中胚层来源、功能特化的生血内皮(hematopoietic endothelium,HE)通过内皮-造血转化(endothelial to hematopoietic cell transition,EHT)分化演变而来,以产生原始造血和定向造血两大主要形式出现于胚胎早期的多个位点和时间节点,具有明显的时空特异性。小鼠胚胎期的造血细胞表达内皮细胞标志CD31、CD144等,来自外周血CD34~+的造血细胞可以通过体外培养分化为内皮细胞,这些研究也间接证实了造血细胞与内皮细胞有着共同的发育起源。胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)是一类能够分化成机体几乎所有细胞类型的全能干细胞,增殖能力强,是组织工程化研究理想的种子细胞。近年来多项研究表明,在干细胞因子(stem cell factor,SCF)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、白细胞介素3(interleukin-3,IL-3)、促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)等细胞因子的诱导下,ESC在体外能被诱导分化为内皮干祖细胞(endothelial stem and progenitor cell,ESPC),进而分化成内皮细胞、血管壁细胞(周细胞和血管平滑肌)并进一步向动、静脉内皮特化;或者分化为造血干祖细胞(hematopoietic stem and progenitor cell,HSPC),进而向髓系祖细胞(myeloid progenitor)、巨核-红系祖细胞(megakaryocyte–erythrocyte progenitor,MEP)等及其下游血细胞分化。这些发现为ESC的体外诱导编辑研究奠定了理论基础,然而因诱导手段局限、调控网络不清晰、微环境缺失等原因,ESC体外定向内皮细胞和造血细胞的分化体系仍不十分成熟。研究目的:本研究利用胚胎干细胞的发育全能性和诱导可塑性,通过各种细胞因子和条件控制,定向诱导其分别向内皮细胞和造血细胞分化,构建完整的体外定向分化体系。通过流式检测、免疫组化等各种手段验证诱导后2种细胞的表面分子特征,探索诱导过程中是否存在“干祖细胞”的中间态及其表面分子特征,探讨内皮和造血发育的相关性,为优化稳定、成熟的体外诱导分化体系,进而进行大规模组织工程化应用研究提供实验基础。研究方法:根据胚胎期内皮、造血细胞的起源规律,本研究在无血清的StemPro培养体系中,使用能够诱导干细胞向中胚层分化的BMP4(bone morphogenetic protein 4,骨形态发生蛋白4)、Activin A(激活素-A),以及能够诱导内皮细胞增殖、迁移的FGF-Basic(fibroblast growth factor basic,碱性成纤维细胞生长因子)和VEGF这4种因子,诱导小鼠胚胎干细胞系R1/E形成拟胚体(embryoid body,EB),模拟中胚层发育过程,再用SCF、VEGF和SCF、FLt3L(FLt-3 ligand)、IL-3分别定向诱导EB向EC和HC分化,建立胚胎干细胞体外定向血管内皮和造血细胞的分化系统。研究结果:经过四因子体系诱导分化4天后,ESC成功被诱导为大量形态饱满、克隆边界清楚的EB;继续向内皮和造血定向分化6天后,成功诱导出多个内皮管状结构和造血集落。通过流式检测分析,CD31~+的内皮细胞比例为1.35±0.05%,进一步分析CD31~+CD144~+CD45~-群体,发现其中有3.0±0.2%的细胞表型为Kit~+CD201~+,提示该部分细胞可能是处于分化上游的ESPC;CD45~+的造血细胞比例为35.0±0.5%,其中有0.35±0.05%的细胞表型为Kit~+CD201~+,提示该部分细胞可能是处于分化上游的HSPC。这两群细胞数量非常有限,但具有非常典型的干祖细胞特征标记,且表型相似,间接印证了内皮细胞和造血细胞有着共同的命运起源,与既往的研究认识不谋而合。研究结论:本研究成功地建立了将胚胎干细胞体外定向内皮细胞和造血细胞分化的体系,间接验证了二者可能存在共同的胚胎起源,并且通过流式检测捕捉到具有内皮、造血干祖细胞分子特征的细胞,可作为良好体外诱导分化体系,为深入探讨内皮、造血细胞的发育调控机制及以胚胎干细胞体外大规模定向诱导分化奠定了实验基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
造血细胞分化论文参考文献
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