干扰素在肝癌细胞Huh7.0中诱导SAMHD1抑制HBV复制

论文摘要

目的:研究干扰素调节宿主限制性因子SAMHD1的表达而抑制HBV复制的分子机制。方法:首先不同剂量的干扰素α、β和γ处理Huh7. 0细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测SAMHD1在转录和翻译后的表达水平;进一步通过siRNA干扰内源性的SAMHD1,再评价干扰素α、β对病毒的抑制效应;最后通过免疫荧光检测了干扰素α诱导内源性SAMHD1的细胞定位及Southern blot检测了SAMHD1细胞定位对病毒复制的影响。结果:在Huh7. 0细胞中,SAMHD1的RNA水平和蛋白表达明显受干扰素α和β的诱导升高;干扰SAMHD1后干扰素α和β对HBV复制的抑制作用消失; SAMHD1定位在细胞核内,干扰素α诱导SAMHD1同样定位在细胞核内,缺失核定位信号后SAMHD1丧失了其抑制病毒复制的作用。结论:在Huh7细胞中,干扰素α、β能诱导SAMHD1表达上调来抑制HBV的复制,SAMDH1的抗病毒作用依赖于其细胞定位。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 质粒构建和细胞培养
•     1.2.2 免疫荧光检测SAMHD1在细胞中的定位
•     1.2.3 荧光定量PCR检测干扰素处理后SAMHD1的表达
•     1.2.4 Western blot检测不同处理后的SAMHD1的表达
•     1.2.5 病毒核心颗粒DNA的提取
•     1.2.6 Southern Blot检测HBV的复制水平
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 干扰素处理后SAMHD1的表达
•   2.2 沉默SAMHD1后拮抗干扰素α、β对HBV的抑制作用
•   2.3 SAMHD1抑制HBV依赖于其细胞定位
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 乔淼,胡杰,毛彬力,皮思蝶,胡源

关键词: 乙型肝炎病毒,干扰素,抑制

来源: 中国生物工程杂志 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金(81471945),重庆市科委自然科学基金(cstc2018jcyjAX0166),重庆市教委重庆市青少年创新人才培养雏鹰计划(第七期)资助项目

分类号: R373.21

DOI: 10.13523/j.cb.20190301

页码: 1-6

总页数: 6

文件大小: 328K

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