导读:本文包含了抗原筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗原,蛋白,抗体,噬菌体,免疫性,血清,文库。
抗原筛选论文文献综述
乔艳辉,梁静[1]（2019）在《乌鲁木齐地区少数民族无偿献血者Yt~b、Kp~c、K稀有血型抗原筛选》一文中研究指出目的了解乌鲁木齐地区少数民族献血者Yt和Kell血型系统稀有抗原的分布情况。方法采用2套多重PCR体系,以每5份DNA标本混合检测方式,对1 020份无血缘关系健康少数民族献血者的血液DNA标本进行Yt~b、Kp~c和K稀有血型抗原基因分型。通过单一PCR-SSP方法,分别检测多重PCR中含有Yt~b、Kp~c和K阳性标本的高频等位基因Yt~a、Kp~b或k。结果在1 020例少数民族献血者中,检出90例Yt~a/Yt~b,4例Yt~b/Yt~b,未检出Kp~c阳性个体,检出24例K阳性标本均为杂合子K/k,Yt~b、K稀有血型抗原基因频率分别为4.8%和1.18%。结论通过筛选获得的稀有血型数据,为本地稀有血型库的建设、临床稀有血型患者输注配合性血液提供了重要参考资料。(本文来源于《中国输血杂志》期刊2019年09期）
刘东利,贺小龙,杜延玲,杨拴盈,彭丹[2]（2019）在《肺癌抗原组中强免疫原性抗原的筛选》一文中研究指出目的筛选肺癌抗原组中强免疫原性抗原,以期为肺癌的早期诊断、疫苗研制提供参考。方法选取5份异体肺癌患者血清以重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)技术筛选肺癌cDNA表达文库,并进行生物信息学分析。此外,选取2017年2月至2018年2月收治的肺癌患者60例为肺癌组,另取同期进行体检的正常人员60例为对照组。分别采集两组人员血清标本,对比相关肺癌抗原的异体血清反应结果。并对差异有统计学意义的肺癌抗原进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,明确其在肺癌早期诊断中的价值。结果本实验共完成3轮血清学筛选,最终得到70个阳性克隆。采用NCBI网上序列分析软件BLAST对各cDNA序列的同源性进行比对,结果显示上述70个阳性克隆分别表示63个不同基因,包括35个已知基因、26个功能未知基因以及2个新基因。其中35个已知基因中仅有DNA拓扑异构酶Ⅱα(Top2A)基因与肺癌相关,2个新基因分别为热休克蛋白90α(HSP90α)、真核翻译延长因子1γ(EF-1γ),功能未知基因中可能与肺癌相关的包括二羟基苯甲酸内置结合蛋白1配偶体(POB1)、中枢神经系肽酶Ⅰ(TPP1),共5种肺癌相关抗原。肺癌组Top2A、HSP90α、POB1抗原克隆的IgG血清抗体阳性率高于对照组(P<0.01)。Top2A、HSP90α、POB1抗原克隆联合检测诊断肺癌的曲线下面积、敏感性、特异性高于上述叁项指标单独检测(P<0.05)。结论 SEREX技术可用于肺癌抗原组中强免疫原性抗原的筛选、鉴定,临床工作中可将Top2A、HSP90α、POB1基因作为肺癌早期诊断以及免疫治疗的靶向基因。(本文来源于《中国临床研究》期刊2019年06期）
刘欣[3]（2019）在《B细胞成熟抗原特异性单域抗体的筛选制备和鉴定》一文中研究指出B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen,BCMA)是在多发性骨髓瘤(Multiple myeloma,MM)细胞和浆细胞表面上特异性表达的蛋白。研究靶向BCMA的单域抗体(Single domain antibody,sdAb),可以特异性MM细胞表面的结合BCMA蛋白;sdAb又有高水溶性、低免疫原性、较强的组织渗透力和强稳定性的特点,将在MM的特异性免疫分析和治疗中发挥作用。本试验中使用BCMA蛋白免疫双峰驼,获得重链可变区(VHH)基因库,将基因库转化到大肠杆菌TG1中,构建噬菌体抗体库进行叁轮富集、淘筛,选取了 Phage ELISA鉴定出的与BCMA蛋白高结合活性的重组噬菌体。将VHH基因克隆到原核表达载体pET-25b-SBP,采用低温诱导工程菌进行可溶性表达,用镍柱对破碎菌上清进行纯化。进行ELISA鉴定,鉴定其亲和活性,试验研究结果如下:(1)免疫后测得血清抗体效价为1:16000,建立BCMA特异性噬菌体抗体库库容3.15×106,富集筛选后经Phage ELISA检测阳性重组噬菌体共有52株。(2)将VHH基因克隆入原核表达载体pET-25b-SBP,菌落PCR及表达鉴定进行高表达筛选,诱导表达得到可溶的BCMA特异性sdAb;经ELISA试验鉴定,筛选表达得到的sdAb与BCMA蛋白结合,并具有一定的亲和活性。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2019-06-01）
杨柳慧[4]（2019）在《人类自身抗原数据库的建立及银屑病免疫复合物筛选体系》一文中研究指出自1945年第一篇人类自身抗原论文发表以来,有关人类自身抗原(autoantigen)的论文已发表超过12万篇。目前我们在1000多篇论文中发现了一些已被证明是健康人和不同疾病患者的重要调节剂或生物标志物。这些有关人类自身抗原的报告出现在分散的数千篇论文和文献中,因此建立一个能囊括所有已发表的自身抗原的数据库是有必要的。本研究使用文本挖掘结合手动筛选的方法构建了AAgAtlas数据库1.0。使用了“自身抗原”或“自身抗体”或其词汇变体的关键词从PubMed中提取了45830个自身抗原相关的基因和94313个句子,我们进一步将其提炼为25520篇摘要,43253个句子和3984个候选者。基于蛋白质组学的生物筛选后,筛选出了1126个基因作为人类自身抗原和1071个相关的人类疾病信息,用这些数据构建了一个人类自身抗原数据库,即AAgAtlas数据库1.0。本数据库为用户提供简单方便的,便于浏览的、可以删除和下载人类自身抗原及相关疾病信息的界面。本数据库可在http://biokb.ncpsb.org/aagatlas/自由访问。自AAgAtlas数据库1.0发布以来的18个月内,用户对AAgAtlas 1.0数据库进行了17,658次访问,这表明我们的数据库为人类AAb/AAg研究领域提供了许多有价值的信息以及人性化的服务。但我们逐渐发现AAgAtlas数据库1.0并不完整,还有许多分散存在不同文献中的大量相关信息不能被检索到。因此,我们通过添加与翻译后修饰(PTM)相关的人类自身抗原大大扩展了AAgAtlas1.0数据库的信息,使至升级为AAgAtlas数据库2.0,不但增加了自身抗原/抗体的数量,并且对网站进行了更新,使用户有更好的使用体验。在此基础上,我们还采用了新的生物信息学方法,通过统计分析,可以搜索PubMed的全文,扫描补充信息,搜索微阵列数据库,包括OmicsDI,GEO,AAgMarker,ArrayExpress和PMD等。确定了与1,090种人类疾病相关的总共8,382个人类自身抗原和52个翻译后修饰自身抗原,包括了迄今为止最多的人类自身抗原数目。此外,我们开发了一个新的AAgAtlas 2.0数据库网站,允许用户查询人类自身抗原基因和疾病,并通过Expression Atlas和Reactome借助http://biokb.ncpsb.org分析人类自身抗原的基因表达和生物途径。AAgAtlas数据库2.0包含众多有关自身免疫病的自身抗原及疾病信息,但有关银屑病自身抗原的报道甚少,而银屑病是最常见的全身性炎症性疾病之一,影响全世界约2%至3%的人群和超过1.25亿患者,其发病机制目前尚不清楚,对其免疫复合物的筛选也少有报道。本研究采用自身配对设计,用protein A/G beads与血清及组织裂解液混合物进行孵育,免疫沉淀抗原抗体复合物,并用质谱鉴定。还对筛选过程中的部分关键参数进行了摸索和优化,确定了清洗次数为4次、组织裂解液与血清用量比为1:3、沉淀物处理方法选用电泳法等为适宜条件,并建立了鉴定免疫复合物的筛选体系。接着利用建立的筛选体系测定银屑病病人样本,经质谱检测到的蛋白数共有474个蛋白,去除IgG后仍有361个蛋白。此前Monach PA等人报道过在测定类风湿关节炎(RA)中免疫复合物的研究中,检测到的蛋白数仅43个,而本实验建立的筛选体系为过去可鉴定自身抗原数目的8倍。由此可见,该筛选体系的建立是高效、可行的。(本文来源于《河北大学》期刊2019-06-01）
何泊宁[5]（2019）在《牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位》一文中研究指出多杀性巴氏杆菌是动物机体上呼吸道和眼部黏膜的常在菌群,当机体受到应激或其他呼吸性病原体感染时,常发生内源性感染。牛巴氏杆菌病多发于运输应激的牛群或者犊牛群中。现有的牛出败灭活疫苗免疫原是荚膜血清型B型的多杀性巴氏杆菌,然而大量的研究表明A型多杀性巴氏杆菌引起的牛呼吸道感染较为普遍,不同荚膜血清型间的交叉保护效果并不理想。本研究从黑龙江省两个规模化奶牛场发生严重呼吸道感染的病死牛肺脏和患病牛鼻拭子中分离鉴定致病菌,筛选多杀性巴氏杆菌转铁蛋白结合蛋白TbpA的抗原表位,对于研制高效疫苗防治该病具有重要的现实意义。首先,无菌采集病死牛的肺脏和患病牛鼻拭子,进行病原分离培养、染色镜检及生化试验、细菌16S rDNA及OmpH基因PCR鉴定,应用PCR方法确定分离株的荚膜血清型和毒力因子。结果表明,两个分离株WC16551、LY01均为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,药敏试验显示对恩诺沙星、环丙沙星高度敏感。检测22种毒力因子,两株菌均携带19种毒力因子(oma87、fimA、ompA、tonB、exbD、Fur、hgbA、sodC、PmHAS、TbpA、hsf-2、hsf-1、PfhA、ptfA、sodA、nanH、plpB、exbB和tadD),有叁种未被检出(toxA、hgbB和nanB)。LD_(50)分别为:2.3×10~8 CFU/mL和2.08×10~5 CFU/mL。其次,构建pET-32a-TbpA蛋白原核表达质粒,蛋白诱导表达,Western Blot检测;用Ni-NTA对蛋白进行纯化,蛋白复性及浓缩,选用ISA206佐剂制备免疫原,免疫小鼠,制备高免血清,随后进行抗体纯化。结果表明,目的蛋白大小为104 KDa,当IPTG浓度为0.1 mM时37℃诱导5 h表达量较多,以包涵体形式存在,目的蛋白具有较好的抗原性。第叁,构建十五肽库质粒,电转入TG1感受态中,制备噬菌体随机十五肽库,检测肽库多样性及库容量,计算噬菌体滴度,进行叁次淘洗,将筛选出噬菌体进行测序,与TbpA蛋白进行同源性分析,最终获得TbpA蛋白抗原表位。结果表明,成功构建了十五肽库质粒和随机肽库,库容量为1.32×10~9 CFU/mL,经多抗淘洗筛选,确定G_(103)和W_(232)两个模拟结合位点,抗原表位主要分布于95-265、573-765蛋白序列中。综上所述,本研究确定了发病牛的病原为荚膜血清型A型多杀性巴氏杆菌,成功筛选出TbpA蛋白抗原表位,为研制牛多杀性巴氏杆菌病基因工程亚单位疫苗奠定了基础。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-06-01）
王晓旭[6]（2019）在《肝片吸虫病诊断抗原的筛选及间接ELISA方法的建立》一文中研究指出肝片吸虫病是由肝片形吸虫(Fasciola hepatica)寄生于牛、羊等反刍动物的肝脏和肝胆管内而引起的一种吸虫病。本病呈世界性流行,据统计,全球约有2.5亿-3亿牛、羊感染片形吸虫,每年因片形吸虫感染造成的经济损失超过30亿美元,特别重要的是,该虫还可感染人,是一种非常重要的人兽共患病病原。因此,肝片吸虫病不仅给畜牧业生产带来巨大经济损失,同时也给人类健康带来极大威胁。目前,我国对肝片吸虫病的诊断主要以虫卵检查法和剖检法为主,但虫卵检查只能检测肝片吸虫感染晚期的动物,而肝片吸虫对动物的危害则主要集中在感染早期的移行阶段;剖检法是对疑似感染的动物进行剖杀检查,不适用于活体诊断。近年来发展了一些免疫学诊断方法,如间接血凝、ELISA方法等,但这些方法多处在实验室研究阶段,还没有在临床中大面积应用。虽然国外已有商品化的诊断试剂盒,但其价格十分昂贵。因此,我们急需建立一种早期、敏感,特异的诊断方法,为其市场化奠定基础。利用本实验室前期研究的绵羊肝片吸虫阳性血清与肝片吸虫排泄分泌抗原免疫共沉淀产物的质谱分析结果,筛选出5种存在于肝片吸虫生长发育各个时期的蛋白,分别为组织蛋白酶L1(Cathepsin L1,CL1)、组织蛋白酶L2(Cathepsin L2,CL2)、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase,LAP)和天冬氨酰内肽酶(Legumain,LEG),其中LEG在肝片吸虫蛋白中的研究还未见报道。通过RT-PCR获得肝片吸虫的cDNA,设计特异性引物扩增出5种蛋白的基因片段,目的片段经双酶切后,连接至表达载体pET-28a(+)中,将连接产物转化至BL21感受态细胞中,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE,确定蛋白正确表达后再Western blot分析蛋白是否具有反应原性。对蛋白的纯化方法及条件进行优化,收集纯化后的蛋白并进行浓度测定。蛋白纯化后,对5种蛋白进行棋盘法ELISA检测,棋盘法结果进行分析后,根据P/N值筛选出CL1为最适ELISA诊断蛋白进行后续优化实验。优化间接ELISA反应条件,包括包被液选择、包被蛋白浓度、封闭液选择及封闭时间摸索、一抗、二抗浓度、血清中非特异性因素的去除、特异性实验、敏感性实验及阴阳性临界值确定等。结果表明:最佳包被液为碳酸盐缓冲液(CBS),包被抗原最适浓度为7.5μg/mL,最佳封闭液为5%的脱脂乳,最佳封闭温度及时间为37℃2 h,最佳一抗稀释浓度为1:200,37℃孵育2 h,二抗按照1:10000倍稀释最佳;建立的间接ELISA诊断方法不与大片吸虫、日本血吸虫等阳性血清发生交叉反应。本方法重复性好,批内及批间的变异系数均低于10%,特异性为97.3%,敏感性为94.0%,最早可以检出人工感染28天的肝片吸虫绵羊血清。与国外商品化诊断试剂盒比较其符合率为99.1%。临床检测了黑龙江省及吉林省的绵羊308份血清,阳性率为3.9%。本实验成功地表达了5种蛋白,筛选出了反应原性良好,能适用于肝片吸虫病诊断的蛋白——组织蛋白酶L1,并利用该蛋白作为诊断抗原建立了检测肝片吸虫抗体的间接ELISA方法,该方法具有早期、敏感、特异、价格低廉等优点。为肝片吸虫病诊断试剂盒的研究奠定基础。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-06-01）
鹿香云[7]（2019）在《旋毛虫与小鼠Lewis肺癌细胞相关抗原筛选及其抗血清抗肿瘤效应的研究》一文中研究指出肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。肿瘤生物治疗被认为是癌症新兴疗法,包括靶向治疗、免疫疗法、基因疗法等,随着生物技术发展,研究发现一些寄生虫感染也具有抗肿瘤作用,其中在20世纪70年代时研究人员就发现了旋毛虫感染具有抗肿瘤作用。近年来研究发现旋毛虫抗原对多种肿瘤生长具有抑制作用,如H7402肝癌、MCF_7乳腺癌、Sp2_0骨髓瘤、Hela宫颈癌和A549肺癌等。在肺癌研究中裸鼠肿瘤模型是常用动物模型之一,但因裸鼠为免疫缺陷小鼠,缺乏完整的免疫系统,肿瘤在其体内的发生发展与肿瘤正常发生过程差异较大,数据参考价值有待商榷。小鼠Lewis肺癌模型是肺癌研究中常用的另一小鼠模型,它是将LLC细胞接种于SPF级C57BL/6小鼠而建立,荷瘤过程经历了小鼠的正常免疫应答。该模型更接近于肿瘤的正常发生过程,在肺癌的发病机制、药物治疗和生物治疗等研究中发挥重要作用。而目前,关于旋毛虫与小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞之间相关抗原及其抗血清的抗肿瘤作用尚未报道。本试验对旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库进行免疫筛选,获取了旋毛虫与LLC细胞相关抗原sHSPs,原核表达,检测该相关抗原sHSPs体外对LLC细胞的作用,并制备sHSPs抗血清,对荷瘤小鼠模型治疗,观察其抗肿瘤效应。通过细胞因子和免疫组化检测,分析旋毛虫sHSPs抗血清抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长机制,为深入研究旋毛虫抗肿瘤机制和肿瘤治疗药物的研发提供参考。旋毛虫与LLC细胞相关抗原筛选和其抗血清的制备与鉴定以LLC细胞全蛋白抗血清为阳性血清筛选旋毛虫肌幼虫cDNA表达文库,经筛选将获得的阳性噬菌斑进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序。与Genbank中公布旋毛虫基因序列比对后获得4个旋毛虫与LLC细胞相关抗原基因Tsp_09334、Tsp_07696、Tsp_09092、DQ986457.1,经生物学分析后发现编码旋毛虫小热休克蛋白(sHSPs)的DQ 986457.1基因具有多个亲水区及抗原表位,因此选取该基因进行下一步试验。根据比对获取的旋毛虫sHSPs基因序列设计特异性引物,以旋毛虫肌幼虫cDNA为模板,PCR扩增sHSPs基因,并将其连接至表达载体p ET-32a(+)进行原核表达,获得重组sHSPs。用镍柱亲和层析法纯化sHSPs,免疫小鼠制备抗血清。Western blot鉴定sHSPs,结果显示sHSPs与LLC细胞全蛋白抗血清可发生特异性结合反应,说明sHSPs具有良好反应原性。间接免疫荧光试验对sHSPs抗血清进行鉴定,结果显示sHSPs抗血清与LLC细胞可以发生结合反应。旋毛虫与LLC细胞相关抗原sHSPs体外对LLC细胞的作用检测LDH释放情况分析sHSPs对LLC细胞活性的影响,结果显示随着sHSPs浓度增大,LLC细胞死亡率增大,说明sHSPs对LLC细胞具有毒性作用。利用CCK-8法检测sHSPs对LLC细胞增殖的影响,结果表明LLC细胞存活率随着sHSPs浓度增大而减小,说明sHSPs对体外LLC细胞增殖具有抑制作用。采用Western blot检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达情况,结果显示sHSPs各浓度组未见caspase-3活化片段,说明sHSPs对LLC细胞的增殖抑制可能不是由caspase-3引起的凋亡发挥作用。旋毛虫与LLC细胞相关抗原sHSPs抗血清的体内抗肿瘤效应LLC细胞悬液接种于C57 BL/6小鼠前肢背部皮下,建立小鼠Lewis肺癌肿瘤模型。小鼠接种LLC细胞7天后,用sHSPs抗血清对荷瘤小鼠进行治疗,连续治疗7天后,将小鼠处死,剥离肿瘤称重,测量体积,计算抑瘤率。结果表明,sHSPs抗血清具有抑制小鼠Lewis肺癌细胞生长的作用,最高抑瘤率为69.23%。ELISA检测IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平无差异,发现sHSPs抗血清可能并非调节这些细胞因子发挥抗肿瘤作用;免疫组化分析治疗后各组小鼠肿瘤组织细胞中增殖凋亡相关基因VEGF、Bcl-2的表达,与对照组比较其余各组VEGF基因表达无差异,Bcl-2基因表达显着下降,表明旋毛虫sHSPs抗血清可能通过下调Bcl-2基因发挥抗Lewis肺癌肿瘤作用。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
张攀,石宇,徐颖[8]（2019）在《儿童免疫性血小板减少症血清中抗核仁抗体纯化以及靶抗原的筛选》一文中研究指出免疫性血小板减少症为儿童常见获得性免疫性疾病,本研究前期发现有较高比例的抗核仁抗体阳性的儿童为免疫性血小板减少症患者。为筛选鉴定抗核仁抗体阳性免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体识别的靶抗原,本研究利用HEP-2细胞系建立了细胞固定-抗体结合-抗体洗脱-抗体中和体系,成功纯化免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体。利用蛋白免疫共沉淀和质谱分析法筛选出Ncl、Krt1、Krt2、Krt10等蛋白可能为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体结合的靶抗原。这些结果为免疫性血小板减少症患儿血清中抗核仁抗体靶抗原的鉴定提供有效方法,可进一步深化我们对免疫性血小板减少症发病机制的认识。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2019年05期）
钟杰,蔡宜冰,周瑶琴,徐作波,吴建云[9]（2019）在《猪肺炎支原体部分血清体液免疫显性蛋白抗原的筛选鉴定》一文中研究指出旨在筛选猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)部分血清体液免疫显性蛋白抗原。利用生物信息学软件筛选到7个普遍存在于Mhp菌株中的蛋白Mhp104、Mhp299、Mhp367、Mhp462、Mhp465、Mhp477、Mhp488。将其对应的基因分别连接pGEX-6P-1载体后转化至大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达目的蛋白。将诱导表达目的蛋白的7个重组菌裂解液和GST工程菌裂解液分别加入谷胱甘肽板进行抗原包被,以PBS+10%FBS+2.5%脱脂奶粉为封闭液,血清和酶标二抗分别按照1∶500,1∶40 000稀释,将抗原包被板分别与11份Mhp恢复期血清和7份Mhp阴性血清进行ELISA反应。结果表明,所有7个重组融合蛋白均能以可溶形式表达,且GST-Mhp299、GST-Mhp367、GST-Mhp488能被PreScission Protease酶切。最终共筛选出5个Mhp血清体液免疫显性蛋白抗原,分别为Mhp104、Mhp367、Mhp462、Mhp477、Mhp488,从而为Mhp基因工程亚单位疫苗的研发提供了抗原靶标。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年05期）
许婉婷[10]（2019）在《铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究》一文中研究指出目的旨在克服现有抗原筛选方法的不足,构建我国铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)临床分离株XN-1的全基因组文库,从中筛选PA疫苗的候选抗原,为防控PA感染打下基础。方法1.全基因组文库的构建:提取PA XN-1全基因组DNA,内切酶Sau3A I酶切DNA,内切酶BamH I酶切的载体pMal-c5x。通过连接酶将其与随机基因组片段连接,构建随机重组子质粒。转化随机重组子至大肠杆菌感受态细胞X-Blue中。挑选出随机重组子克隆,通过PCR反应和酶切鉴定等方法,对随机重组子进行初步鉴定,评价插入基因组片段的特点。IPTG诱导溶菌酶上清液的阳性重组子的MBP融合蛋白表达,SDS-PAGE检测其表达情况,从而构建PA XN-1全基因组文库。2.PA候选抗原的筛选及保护效果评价:为了进一步从随机重组子文库中筛选到PA疫苗候选抗原,本研究制备了抗MBP多克隆抗体,将其包被于ELISA板上,以捕获随机重组子表达的MBP融合蛋白。以PA感染患者恢复期血清作为一抗,检测随机重组子携带的未知抗原的反应性。测定强反应性抗原的编码序列,通过BLAST序列比对,获得强反应性抗原的基因信息。通过基因工程手段在大肠杆菌中制备候选抗原免疫Balb/c小鼠。ELISA方法检测抗原特异性IgG抗体效价。气管插管攻毒致死剂量PA XN-1,并统计小鼠生存率。综合评价候选抗原的免疫反应性、免疫原性和免疫保护效果,筛选出新的铜绿假单胞菌疫苗候选抗原。结果1.提取PA XN-1的全基因组,经过Sau3A I酶切处理后,DNA条带弥散分布在100-1000bp之间。这些基因组片段与pMal-c5x载体连接,获得随机重组子克隆若干。随机挑选3个重组子克隆,酶切鉴定发现其中2个有基因组片段的插入;PCR方法检测插入片段大小,发现其插入片段位于100-1000bp之间,具有良好的随机性;IPTG诱导随机重组子表达,SDS-PAGE检测重组子蛋白表达情况,发现随机挑选的6个重组子中,有4个成功表达出MBP融合蛋白。这些结果表明,构建PA全基因组文库成功,可用于下一步强反应性抗原的筛选。2.通过13轮试验,筛选获得随机重组子2392个,得到反应性重组子115个,其中,有13个强反应性抗原(相对于PcrV反应强度大于10%的抗原)。这13个抗原分别为:PpiA、PtsP、OprP、CAZ10_34235、HmuU_2、PcaK、CarAd、RecG、YjiR_5、LigD、KinB、RtcA、PscF。3.通过MBP亲和层析法,成功制备了这13个带有MBP标签的强反应性抗原。动物实验发现以上13个抗原免疫,可分别诱导小鼠产生抗原特异性IgG抗体,其效价与MBP诱导的抗体效价有显着统计学差异(P<0.05)。同时,动物攻毒保护实验发现,候选抗原保护率最高的前五名抗原分别是:PscF、LigD、RecG、OprP和PtsP。其中,抗原PscF的保护率最高达95%,抗原LigD和RecG的保护率达80%,抗原OprP和PtsP的保护率达65%。以上结果提示,抗原PscF的免疫保护效果最优。结论本研究成功建立了我国铜绿假单胞菌临床菌株XN-1的全基因组文库,并从中筛选到13个强反应性抗原。进一步通过动物实验证实,强反应性抗原PscF在小鼠上具有良好的免疫原性,且攻毒保护率为95%,提示其是良好的PA候选抗原。这些结果为下一步成功研制PA新型疫苗提供了新的实验依据,对PA感染的防控具有积极的意义。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
抗原筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的筛选肺癌抗原组中强免疫原性抗原,以期为肺癌的早期诊断、疫苗研制提供参考。方法选取5份异体肺癌患者血清以重组cDNA表达文库血清学分析(SEREX)技术筛选肺癌cDNA表达文库,并进行生物信息学分析。此外,选取2017年2月至2018年2月收治的肺癌患者60例为肺癌组,另取同期进行体检的正常人员60例为对照组。分别采集两组人员血清标本,对比相关肺癌抗原的异体血清反应结果。并对差异有统计学意义的肺癌抗原进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,明确其在肺癌早期诊断中的价值。结果本实验共完成3轮血清学筛选,最终得到70个阳性克隆。采用NCBI网上序列分析软件BLAST对各cDNA序列的同源性进行比对,结果显示上述70个阳性克隆分别表示63个不同基因,包括35个已知基因、26个功能未知基因以及2个新基因。其中35个已知基因中仅有DNA拓扑异构酶Ⅱα(Top2A)基因与肺癌相关,2个新基因分别为热休克蛋白90α(HSP90α)、真核翻译延长因子1γ(EF-1γ),功能未知基因中可能与肺癌相关的包括二羟基苯甲酸内置结合蛋白1配偶体(POB1)、中枢神经系肽酶Ⅰ(TPP1),共5种肺癌相关抗原。肺癌组Top2A、HSP90α、POB1抗原克隆的IgG血清抗体阳性率高于对照组(P<0.01)。Top2A、HSP90α、POB1抗原克隆联合检测诊断肺癌的曲线下面积、敏感性、特异性高于上述叁项指标单独检测(P<0.05)。结论 SEREX技术可用于肺癌抗原组中强免疫原性抗原的筛选、鉴定,临床工作中可将Top2A、HSP90α、POB1基因作为肺癌早期诊断以及免疫治疗的靶向基因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原筛选论文参考文献
[1].乔艳辉,梁静.乌鲁木齐地区少数民族无偿献血者Yt~b、Kp~c、K稀有血型抗原筛选[J].中国输血杂志.2019
[2].刘东利,贺小龙,杜延玲,杨拴盈,彭丹.肺癌抗原组中强免疫原性抗原的筛选[J].中国临床研究.2019
[3].刘欣.B细胞成熟抗原特异性单域抗体的筛选制备和鉴定[D].内蒙古农业大学.2019
[4].杨柳慧.人类自身抗原数据库的建立及银屑病免疫复合物筛选体系[D].河北大学.2019
[5].何泊宁.牛多杀性巴氏杆菌分离鉴定及应用噬菌体展示技术筛选TbpA蛋白抗原表位[D].黑龙江八一农垦大学.2019
[6].王晓旭.肝片吸虫病诊断抗原的筛选及间接ELISA方法的建立[D].黑龙江八一农垦大学.2019
[7].鹿香云.旋毛虫与小鼠Lewis肺癌细胞相关抗原筛选及其抗血清抗肿瘤效应的研究[D].吉林大学.2019
[8].张攀,石宇,徐颖.儿童免疫性血小板减少症血清中抗核仁抗体纯化以及靶抗原的筛选[J].基因组学与应用生物学.2019
[9].钟杰,蔡宜冰,周瑶琴,徐作波,吴建云.猪肺炎支原体部分血清体液免疫显性蛋白抗原的筛选鉴定[J].中国兽医学报.2019
[10].许婉婷.铜绿假单胞菌XN-1随机重组子文库的构建及其在疫苗抗原筛选中的应用研究[D].重庆医科大学.2019
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