胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对小鼠卵丘细胞自噬与胞吞相关因子表达的影响

论文摘要

卵丘细胞的质量对卵母细胞的生长发育至关重要,其自噬和胞吞可调控细胞生长及营养运输,以应对恶劣环境对卵母细胞质量的威胁。从促排处理的小鼠输卵管膨大部收集卵丘—卵母细胞复合体（Cumulus oocyte complexes, COCs）,分离卵丘细胞进行体外培养,并添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1处理细胞,分别提取细胞总RNA和总蛋白,实时荧光定量PCR检测各处理组 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1和 Cav2 mRNA的相对表达水平。免疫荧光定位不同蛋白在细胞中的表达,并结合蛋白免疫印迹（Western-blot,WB）测定不同质量浓度IGF-1处理组Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的蛋白表达水平,分析IGF-1对卵丘细胞自噬和胞吞的影响。结果显示:正常培养的卵丘细胞均可表达 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1、 Cav2 mRNA和蛋白,蛋白主要定位在细胞质。IGF-1可调控小鼠卵丘细胞Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白的表达,与对照组相比,各处理组的Atg5蛋白表达量均升高;Beclin1和LC3蛋白表达量显著降低,且在100 ng/mL IGF-1处理组中最低。Cav1和Cav2蛋白在50 ng/mL和200 ng/mL处理组的表达量均显著降低,但在该质量浓度变化范围内,随着IGF-1质量浓度增大,2种蛋白的表达量不是线性降低,而是在100 ng/mL和150 ng/mL处理组表达量有回升现象。表明IGF-1可调控小鼠卵丘细胞的自噬和胞吞相关因子的表达,调控效果与IGF-1的质量浓度有关。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要材料
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要方法
•     1.3.1 小鼠卵丘细胞的收集及培养
•     1.3.2 免疫荧光检测Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白
•     1.3.3 IGF-1处理小鼠卵丘细胞
•     1.3.4 总RNA提取,反转录及PCR反应
•     1.3.5 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1和 Cav2基因表达检测
•     1.3.6 Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白表达检测
•     1.3.7 数据分析
• 2 结果与分析
•   2.1 小鼠卵丘细胞的分离培养
•   2.2 卵丘细胞中Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白的分布
•   2.3 IGF-1对小鼠卵丘细胞 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1和 Cav2基因表达的影响
•   2.4 IGF-1对Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白表达的影响
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马睿,潘阳阳,王萌,李秦,何翃闳,胡学权,赵凌,王靖雷,崔燕,余四九

关键词: 胰岛素样生长因子,自噬,胞吞,卵丘细胞

来源: 西北农业学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 甘肃农业大学动物医学院/甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金青年基金(31702311),甘肃省省青年科技基金计划(17JR5RA141),甘肃省重点研发项目(17YF1NA058),甘肃农业大学动物医学院创新基金(JYCX-KX016),甘肃农业大学伏羲青年英才基金(Gaufx-02Y10),甘肃农业大学博士科研启动基金(GSAU-RCZX201701)~~

分类号: Q953

页码: 1394-1402

总页数: 9

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