导读:本文包含了抗纤维蛋白单链抗体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,纤维蛋白,尿激酶,噬菌体,基因,大肠杆菌,血栓。
抗纤维蛋白单链抗体论文文献综述
王沂,张春明,王洋,郝建秀,宋娜玲[1]（2012）在《抗人纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定》一文中研究指出目的应用噬菌体展示技术构建抗人纤维蛋白单链抗体(scFv)文库,筛选高亲和力抗人纤维蛋白scFv并进行鉴定。方法利用人纤维蛋白免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重迭延伸聚合酶链反应(PCR)将VH和VL基因拼接成scFv基因,SfiⅠ/NotⅠ双酶切克隆入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1构建成库,采用人纤维蛋白原对抗体库进行负筛选,人纤维蛋白进行正筛选,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测阳性克隆的抗原特异性并进行测序分析。结果构建了库容为8.7×106的抗人纤维蛋白scFv库,ELISA测定显示scFv具有较高的抗原特异性;抗人纤维蛋白scFv基因序列长732 bp,编码244个氨基酸,VH和VL基因均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗人纤维蛋白scFv文库,并筛选到高亲和力的抗人纤维蛋白scFv,为新型血栓显像剂的开发奠定了实验基础。(本文来源于《生物医学工程与临床》期刊2012年03期）
王沂[2]（2012）在《抗纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定》一文中研究指出血栓显像是新近发展起来的一种新型血栓定位诊断方法,以其无创、精确、高灵敏的特点成为目前最有潜力的深静脉血栓(DVT)诊断方法。该方法的基本原理是将放射性同位素与能够同血栓成分结合的物质或者参与血栓形成的物质偶联,由这些物质携带放射性同位素到达血栓部位,然后通过影像学方法在体外进行观察定位。目前常用来与放射性同位素相连的物质主要是一些针对血栓成分的单克隆抗体,包括抗纤维蛋白抗体、抗血小板抗体、抗D二聚体抗体等。当前,抗人纤维蛋白单克隆抗体介导的血栓显像在临床前动物实验已经取得了较好的效果,但是应用于人体却存在异源蛋白大分子引发的人抗鼠抗体和体内清除缓慢的问题。单链抗体(scFv)是用一段弹性连接肽把抗体的重链可变区与轻链可变区相连,拥有完整抗体的全部抗原结合特异性和与天然抗体分子Fab段相似的抗原亲和力。单链抗体作为最小功能结构单位,具有分子量小、穿透力强、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达以及易于进行基因工程操作等特点。噬菌体文库技术很好地解决了单链抗体构建过程中出现的诸多问题,通过几轮筛选,就能获得比普通单克隆抗体亲和力、特异性更强的单链抗体,且单链抗体表达在噬菌体的表面,而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过分泌型噬菌体的单链DNA测序推导出来,使得表达蛋白(表现型)和编码基因(基因型)之间完美地联系起来,非常适于大规模生产。在本研究中,我们利用人纤维蛋白免疫小鼠,利用简并引物从小鼠脾脏cDNA中分别扩增VH和VL基因,经重迭延伸PCR将VH和VL基因通过柔性linker拼接成scFv基因,并引入Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切位点,通过Sfi Ⅰ/Not Ⅰ双酶切克隆入pCANTAB5E噬菌粒载体,转化E. coli TG1构建成噬菌体文库,由于纤维蛋白和纤维蛋白原序列之间只有几个氨基酸残基的区别,为了保证纤维蛋白单链抗体的特异性,采用纤维蛋白原对抗体库进行负筛选,纤维蛋白进行正筛选,经四轮筛选后,用ELISA检测阳性克隆的抗原亲合力和特异性,选择抗原亲合力最强的克隆进行测序分析并在E. coli TOP10中进行可溶性表达。实验结果显示,构建的抗人纤维蛋白噬菌体文库的库容为8.7×106,ELISA测定显示单链抗体具有较高的抗原亲合力和结合特异性；测序结果表明抗人纤维蛋白scFv基因序列全长732bp,编码244个氨基酸,VBASE2数据库分析VH和VL基因序列,显示二者均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。抗人纤维蛋白噬菌体文库成功构建为新型血栓显像剂的研究奠定了良好的基础。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2012-05-01）
胡晓林[3]（2007）在《重组鼠抗人纤维蛋白单链抗体的构建和表达》一文中研究指出深部静脉血栓症在世界范围内是一种致死率和致残率都相当高的疾病，其及时诊断和治疗显得尤为重要。临床上，医生常依据症状和体征得出初步判断，然后选用一些辅助检查如D-二聚体的检测、电阻抗体积描记检查辅助确诊。血栓的影像学检查因为其客观可靠性而逐渐成为一项常规的辅助诊断的手段。在多种血栓影像学检查方法中，静脉造影因为能够直观呈现血栓部位和血流状态而被喻为“金标准”，但过敏症患者对造影剂敏感而引发的并发症预后是非常严重的，而且操作上也有技术困难；超声扫描是一项非常方便的非侵入性的检查，但是其敏感性比较差；螺旋CT和核磁共振血栓显像由于其技术上的难度和费用昂贵得不到广泛的应用；现有的放射性核素的检查对已确诊的病例诊断支持率低。特异安全的血栓定位显像还是一个亟待解决的问题。血栓形成过程中，由纤维蛋白原转变的纤维蛋白是血栓骨架主要的蛋白质成分。利用抗原和抗体结合的特异性，制备特异的针对人纤维蛋白的抗体，然后对该抗体进行放射性核素标记，以期对体内的血栓进行特异的定位显像是进行体内血栓显像的一个思路。国内外针对抗人纤维蛋白的单克隆抗体的制备和血栓显像的研究都已经很丰富了，实验室和临床前动物实验也有较好的效果，但是应用于人体却存在异源蛋白大分子引发的人抗鼠抗体和体内清除缓慢的问题，此类问题的解决将为新型血栓显像剂的研制提供良好的技术支持。鼠源性单克隆抗体基因工程改造成单链抗体可以有效解决上述问题，但是随之而来的抗原抗体亲和力低和体内清除过快也将给临床应用造成困难。多项研究结果表明，使用非常规的短长度的连接肽可以得到功能状态下非共价结合的单链抗体的多聚体，抗原抗体的结合能力从而得到显着提高，体内清除率也随之下降。此类研究发现可能为临床血栓显像剂的研制提供新的思路和解决办法。在本研究中，我们对本试验室保存的一株单克隆抗体杂交瘤细胞所分泌的高活性鼠抗人纤维蛋白单克隆抗体AFkβ8E5进行基因工程改造，制备成连接肽长度为5肽的单链抗体，旨在该单链抗体在活性状态下主要以非共价的二聚体的形式存在，从而有效地提高抗原抗体的结合能力，并使得体内清除率也下降，为临床血栓显像剂的研制提供新的思路和解决办法。我们首先从分泌鼠抗人纤维蛋白单克隆抗体AFkβ8E5的杂交瘤细胞中提取总RNA，逆转录合成cDNA第一链，参考经典文献合成通用简并引物，以之为模板扩增抗体轻链和重链可变区基因，扩增产物连入TA克隆载体pMD-19T，在E.coli DH5α中克隆，并提取质粒，采用双脱氧链末端合成终止法进行测序，对测序结果进行互联网的序列同源性比对，验证为鼠源性的免疫球蛋白家族的轻链和重链的可变区基因后，重新合成带有限制性内切酶酶切位点和部分连接肽的引物，按VL-linker-VH方向，采用重迭延伸拼接法引入5肽的连接肽连接轻重链可变区基因，扩增产物连入TA克隆载体pMD-19T，在大肠杆菌DH5α中克隆，并提取质粒，测序验证无误后，通过酶切、连接，将单链抗体基因片段导入有组氨酸标签的原核表达载体pET28a(+)中，最后在E.coli BL21(DE3)中实现初步表达，进行SDS-PAGE电泳和Western blot验证表达产物存在，并进一步优化了表达条件，为深入研究其生物学功能奠定了良好的基础。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2007-05-01）
胡晓林,张春明[4]（2006）在《抗纤维蛋白单链抗体及其非共价二聚体基因的构建、表达和功能比较研究》一文中研究指出目的:深部静脉血栓症在世界范围内都是一种致死率和致残率相当高的疾病,特异安全的血栓定位显像可以帮助及时诊断,并迅速的开展治疗。我室制备并保存的抗人纤维蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株 AFkβ8E5分泌对血栓骨架纤维蛋白特异的单克隆抗体,本课题意欲对其进行基因工程,构建抗纤维蛋白单(本文来源于《中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要》期刊2006-11-01）
刘志刚,林建波,徐桂清,俞炜源[5]（2003）在《人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-尿激酶杂合体在CHO细胞中的高表达研究》一文中研究指出尿激酶是目前临床上广泛使用的一种有效的溶栓制剂,但由于尿激酶缺乏对血栓的特异亲和性,导致临床上尿激酶的使用剂量较大,容易出现全身性出血等副作用。因而开发对血栓特异的导向溶栓制剂是目前溶栓药研制的一个重要方向。本实验室在以前的工作中,利用噬菌体表面呈现技术,筛选到一种对人纤维蛋白特异的鼠单链抗体,在对该鼠抗体可变区进行结构模建的基础上,对其进行了人源化改造和体外亲和力成熟,得到亲和力和特异性较鼠抗体更好的人源化单链抗体。(本文来源于《第四届中国酶工程学术交流讨论会论文集》期刊2003-10-12）
刘志刚,林建波,袁旭东,康铁军,俞炜源[6]（2002）在《人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-尿激酶融合蛋白在大肠杆菌中的功能性表达》一文中研究指出The fusion protein of Humanized mouse anti-human fibrin ScFv and the low molecuar weight urokinase (IIn-UK) contained seven disulfide bonds and formed inclusion body while expressing in normal E.coli strain.By coexpressing DsbC and using the special E.coli strain Origami(DE3) which was trxB/gor double mutant,the fusion protein IIn-UK was functionally expressed in the cytoplasm of E.coli. The expressed fusion protein in the soluble fraction was purified by using affinity chromatography specific against urokinase. The purified fusion protein could combine the thrombus in vitro ,and the specific activity of urokinase reached 80 000IU/mg fusion protein.The result showed that the fusion protein retained the activity of two moieties,and this study laid a foundation for further research of targeting thrombolytic agent.(本文来源于《生物工程学报》期刊2002年04期）
刘志刚,俞炜源,林建波[7]（2002）在《人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外分子进化》一文中研究指出以人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的 5株CDR3突变体为基础 ,利用致错PCR和DNA重排方法对其进行了突变和重排 ,然后克隆重组装的突变单链抗体至载体pHB 1HSCFV而构建了库容为 10 5的抗体库 ,利用噬菌体表面呈现技术对构建的人源化抗体突变库进行了富集 ,并利用单链抗体 -碱性磷酸酶系统进行了阳性克隆的筛选和鉴定。随后以鉴定的 5株阳性克隆为基础进行了第二轮的致错PCR、DNA重排、抗体库的构建和富集 ,并筛选到 4株亲和力较亲本鼠抗体All更好的人源化抗体 ,该研究为研制低免疫原性的导向溶栓制剂奠定基础。(本文来源于《遗传学报》期刊2002年01期）
刘志刚,俞炜源,林建波[8]（2001）在《人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外成熟》一文中研究指出目的提高人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的亲和力和特异性。方法以人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体为基础,通过合成部分随机化的突变引物和PCR等方法构建HCDR3和LCDR3的混合突变库,然后利用噬菌体表面呈现技术对抗体库进行筛选,并利用本实验室建立的单链抗体-碱性磷酸酶系统进行单克隆的鉴定。结果得到4株亲和力和特异性有明显改善的人源化抗体。结论构建CDR3突变库是抗体体外成熟的一个有效方法,该研究为研制低免疫原性的导向溶栓制剂奠定了基础。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2001年05期）
舒东,徐兵,俞炜源,罗深秋[9]（2001）在《鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建》一文中研究指出目的 构建鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体。方法 应用重组ＤＮＡ技 术，将人工合成的尿激酶原信号肽基因与鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合基因连接，并保 证在同一阅读框架，然后分别插科到pcＤＮＡ３和ＰＭＪＫ３两种真核表达载体中。结果构建成可以在真核细胞中分泌表 达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的重组质粒pcＤＮＡ３－Ｄ１和ｐＭＪＫ３－Ｄ１。结论为建 立稳定分泌表达鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低相对分子质量单链尿激酶融合蛋白的细胞工程株奠定了基础。(本文来源于《第一军医大学学报》期刊2001年04期）
孙雷,高新胜,黄仪秀,朱圣庚[10]（2000）在《从噬菌体抗体库中淘选血纤维蛋白特异的单链抗体》一文中研究指出为构建小鼠噬菌体抗体库 ,以获得对人血纤维蛋白特异的抗体 ,由小鼠脾脏提取 m RNA,经反转录 PCR扩增出抗体重链、轻链可变区基因片段 ,将二者和一段编码十五肽 (Gly4 Ser) 3的 DNA接头借助重组 PCR组装成为单链抗体 (single- chain antibody,Sc Ab)基因 .将单链抗体基因插入噬菌体展示载体 p CANTAB- 5E,通过电击法转化大肠杆菌 TG1细胞 ,用辅助噬菌体 M1 3K0 7超感染 ,构建了库容量在 1 0 8以上的噬菌体单链抗体库 .利用亲和选择方法 (淘选 ) ,从噬菌体抗体库中选得血纤维蛋白特异的单链抗体 .模拟抗体成熟过程 ,用 DNA改组 (DNA shuffling)技术使抗体基因重新组合 ,构建新的改组抗体库 ,并从中选择到提高了亲和力的噬菌体单链抗体 .抗体基因在大肠杆菌中表达 ,表达蛋白经 Sephadex G- 75柱层析分离 ,得到初步纯化的单链抗体蛋白 .(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2000年06期）
抗纤维蛋白单链抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
血栓显像是新近发展起来的一种新型血栓定位诊断方法,以其无创、精确、高灵敏的特点成为目前最有潜力的深静脉血栓(DVT)诊断方法。该方法的基本原理是将放射性同位素与能够同血栓成分结合的物质或者参与血栓形成的物质偶联,由这些物质携带放射性同位素到达血栓部位,然后通过影像学方法在体外进行观察定位。目前常用来与放射性同位素相连的物质主要是一些针对血栓成分的单克隆抗体,包括抗纤维蛋白抗体、抗血小板抗体、抗D二聚体抗体等。当前,抗人纤维蛋白单克隆抗体介导的血栓显像在临床前动物实验已经取得了较好的效果,但是应用于人体却存在异源蛋白大分子引发的人抗鼠抗体和体内清除缓慢的问题。单链抗体(scFv)是用一段弹性连接肽把抗体的重链可变区与轻链可变区相连,拥有完整抗体的全部抗原结合特异性和与天然抗体分子Fab段相似的抗原亲和力。单链抗体作为最小功能结构单位,具有分子量小、穿透力强、体内半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达以及易于进行基因工程操作等特点。噬菌体文库技术很好地解决了单链抗体构建过程中出现的诸多问题,通过几轮筛选,就能获得比普通单克隆抗体亲和力、特异性更强的单链抗体,且单链抗体表达在噬菌体的表面,而其编码基因作为病毒基因组中的一部分可通过分泌型噬菌体的单链DNA测序推导出来,使得表达蛋白(表现型)和编码基因(基因型)之间完美地联系起来,非常适于大规模生产。在本研究中,我们利用人纤维蛋白免疫小鼠,利用简并引物从小鼠脾脏cDNA中分别扩增VH和VL基因,经重迭延伸PCR将VH和VL基因通过柔性linker拼接成scFv基因,并引入Sfi Ⅰ/Not Ⅰ酶切位点,通过Sfi Ⅰ/Not Ⅰ双酶切克隆入pCANTAB5E噬菌粒载体,转化E. coli TG1构建成噬菌体文库,由于纤维蛋白和纤维蛋白原序列之间只有几个氨基酸残基的区别,为了保证纤维蛋白单链抗体的特异性,采用纤维蛋白原对抗体库进行负筛选,纤维蛋白进行正筛选,经四轮筛选后,用ELISA检测阳性克隆的抗原亲合力和特异性,选择抗原亲合力最强的克隆进行测序分析并在E. coli TOP10中进行可溶性表达。实验结果显示,构建的抗人纤维蛋白噬菌体文库的库容为8.7×106,ELISA测定显示单链抗体具有较高的抗原亲合力和结合特异性；测序结果表明抗人纤维蛋白scFv基因序列全长732bp,编码244个氨基酸,VBASE2数据库分析VH和VL基因序列,显示二者均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。抗人纤维蛋白噬菌体文库成功构建为新型血栓显像剂的研究奠定了良好的基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗纤维蛋白单链抗体论文参考文献
[1].王沂,张春明,王洋,郝建秀,宋娜玲.抗人纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定[J].生物医学工程与临床.2012
[2].王沂.抗纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定[D].北京协和医学院.2012
[3].胡晓林.重组鼠抗人纤维蛋白单链抗体的构建和表达[D].中国协和医科大学.2007
[4].胡晓林,张春明.抗纤维蛋白单链抗体及其非共价二聚体基因的构建、表达和功能比较研究[C].中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要.2006
[5].刘志刚,林建波,徐桂清,俞炜源.人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-尿激酶杂合体在CHO细胞中的高表达研究[C].第四届中国酶工程学术交流讨论会论文集.2003
[6].刘志刚,林建波,袁旭东,康铁军,俞炜源.人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体-尿激酶融合蛋白在大肠杆菌中的功能性表达[J].生物工程学报.2002
[7].刘志刚,俞炜源,林建波.人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外分子进化[J].遗传学报.2002
[8].刘志刚,俞炜源,林建波.人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体的体外成熟[J].细胞与分子免疫学杂志.2001
[9].舒东,徐兵,俞炜源,罗深秋.鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建[J].第一军医大学学报.2001
[10].孙雷,高新胜,黄仪秀,朱圣庚.从噬菌体抗体库中淘选血纤维蛋白特异的单链抗体[J].中国生物化学与分子生物学报.2000
论文知识图
