组合策略促进碱性果胶酶在毕赤酵母中高效表达

论文摘要

本研究组合了基因密码子优化及分子伴侣共表达策略提高碱性果胶酶（PGL）在毕赤酵母中的胞外产量。基于Pichia pastoris密码子偏好性,优化了来源于Bacillus sp.WSHB04-02 PGL高热稳定性突变体K314M基因,并克隆至pPIC9K的Eco R I-Not I得到PGL表达载体p PIC9K-PGL。p PIC9K-PGL转化Pichia pastoris GS115（his-）得到重组菌GS115/PGL 14#,胞外PGL酶活达到301.32 U/mL,较优化前提高25.1%。在此基础上,分别及同时共表达分子伴侣内质网蛋白折叠氧化还原辅助因子（ERO1）和泛素共轭酶（UBC1）。结果显示,同时表达ERO1和UBC1（GS115/PGLl-ERO1-UBC1 2#）使重组菌胞外PGL较共表达前提高49.3%,达到450.12 U/mL。应用指数流加策略对重组菌株GS115/PGLl-ERO1-UBC1 2#进行3 L罐发酵,诱导发酵96h胞外PGL可达1 362.31 U/mL。研究结果对促进PGL产量的提升及其应用具有重要现实意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 PGL及分子伴侣表达载体构建
•     1.2.2 P.pastoris GS115转化与筛选
•     1.2.3 重组P.pastoris摇瓶发酵
•     1.2.4 3 L罐发酵
•     1.2.5 指数流加
•     1.2.6 PGL蛋白纯化
•     1.2.7 PGL活力测定
•     1.2.8 荧光定量PCR
•     1.2.9 PGL去糖基化
•     1.2.10 PGL半衰期的测定
•     1.2.1 1 SDS-PAGE分析
• 2 结果与分析
•   2.1 密码子优化对PGL表达的影响
•   2.2 共表达分子伴侣对PGL胞外表达的影响
•   2.3 3 L罐发酵培养
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈双全,刘松,堵国成,陈坚

关键词: 碱性果胶酶,毕赤酵母,密码子优化,分子伴侣,指数流加

来源: 食品与生物技术学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学生物工程学院

基金: 国家自然科学基金项目(31401638),江苏省自然科学基金项目(BK20130132)

分类号: Q78;Q55

页码: 35-43

总页数: 9

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