猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化

论文摘要

为了探索猪IgG1-Fc（pIgG1-Fc）基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR（RT-PCR）扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a（+）-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间,实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明,成功克隆了pIgG1-Fc的基因666 bp,共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a（+）-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确,重组质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中能够表达,表达的融合蛋白分子量约为36 ku。其最佳表达条件如下:在25℃条件下加入终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导6 h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达,为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础,为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒与菌株
•   1.2 试剂
•   1.3 pIgG1-Fc基因的克隆
•   1.4 重组表达质粒的构建
•   1.5 目的基因在大肠杆菌中的表达
•   1.6 重组蛋白原核表达条件的优化
•     1.6.1 IPTG诱导浓度的优化
•     1.6.2 表达温度的优化
•     1.6.3 表达时间的优化
•   1.7 重组蛋白可溶性表达分析
• 2 结果与分析
•   2.1 pIgG1-Fc基因克隆
•   2.2 重组质粒的构建
•   2.3 重组蛋白的表达
•   2.4 表达条件的优化
•     2.4.1 IPTG最佳诱导浓度的摸索
•     2.4.2 最佳表达温度的摸索
•     2.4.3 最佳表达时间的摸索
•   2.5 重组蛋白可溶性表达鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 连凯琪,周玲玲,王英杰,李翠,宋玉伟,张明亮

关键词: 原核表达,包涵体,融合蛋白

来源: 江苏农业科学 2019年15期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院

基金: 安阳工学院博士科研启动基金(编号:BSJ2016008)

分类号: Q78

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.15.021

页码: 91-94

总页数: 4

文件大小: 1584K

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