单纯疱疹病毒Ⅰ型新开放读码框UL57的鉴定

论文摘要

单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1,HSV-1）潜伏感染期间LATs的活跃转录可能与其启动子与增强子两侧的CTCF结合序列有关。本研究对位于UL56下游与LAT启动子上游之间并与CTCF结合序列重叠存在的一个新开放读码框（本研究中命名为UL57）进行了鉴定。首先利用HSV-1（F）细菌人工染色体（HSV-BAC）系统构建重组病毒HSV-EGFP-UL57,将EGFP序列插入UL57 5’端;然后分别通过Northern Blot和Western Blot检测EGFP标记的UL57的转录和表达;同时构建敲除UL57的重组病毒HSV-ΔUL57,观察UL57对病毒增殖的影响。结果显示,重组病毒HSV-EGFP-UL57感染HEp-2细胞17h后,EGFP探针检测到两条转录产物,其中1.8kb转录产物与预测大小相符;使用放线菌酮（Cycloheximide,CHX）阻断病毒即刻早期蛋白/早期蛋白合成后,UL57转录受到明显抑制。重组病毒HSV-EGFP-UL57感染Vero细胞后,9h可见融合蛋白表达,24h表达明显;融合蛋白分子量与预测大小（58kD）一致。病毒生长曲线显示,重组病毒HSV-EGFP-UL57及HSV-ΔUL57在Vero细胞中的增殖水平与HSV-1（F）基本一致。本研究表明,在HSV-1基因组（GenBank:GU734771.1）UL56下游与LAT启动子上游之间存在一个新开放读码框UL57（116 921bp～117 799bp）,UL57可以进行转录,且其转录受病毒即刻早期蛋白/早期蛋白调控;转录产物可以翻译出融合蛋白,但表达水平较低。删除UL57对病毒增殖无明显影响。

论文目录

• 材料与方法
•   1 细胞与病毒
•   2 质粒
•   3 试剂
•   4 质粒构建
•     4.1 重组质粒pcDNA-EGFP-UL57的构建
•     4.2 重组质粒PKO-EGFP-UL57的构建
•     4.3 重组质粒pcDNA-EGFP的构建
•     4.4 重组质粒PKO-EGFP的构建
•     4.5 重组质粒pcDNA-ΔUL57的构建
•     4.6 重组质粒PKO-ΔUL57的构建
•   5 重组病毒的构建
•     5.1 重组病毒HSV-EGFP-UL57的构建
•     5.2 重组病毒HSV-EGFP的构建
•     5.3 重组病毒HSV-ΔUL57的构建
•   6 Northern Blot检测UL57的转录
•   7 Western Blot检测UL57融合蛋白的表达
•   8 UL57融合蛋白表达的动态观察
•   9 重组病毒生长曲线观察
• 结果
•   1重组病毒HSV-EGFP-UL57及HSV-ΔUL57的构建
•   2 Northern Blot检测UL57的转录
•   3UL57的转录依赖病毒即刻早期蛋白/早期蛋白的调节
•   4 Western Blot检测UL57的表达
•   5 UL57融合蛋白表达的动态观察
•   6 UL57对病毒增殖的影响
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 佘明敏,蒋海芳,陈晓湘

关键词: 单纯疱疹,单纯疱疹病毒型,开放读码框,基因转录,基因表达

来源: 病毒学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 广州医科大学病原生物学与免疫学教研室

基金: 广州市属高校科研项目(项目号:1201620304),题目:HSV-1潜伏感染期ATF3的表达及其在病毒潜伏,激活中的机制研究~~

分类号: R373.11

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003496

页码: 51-57

总页数: 7

文件大小: 969K

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