用于评价中和抗体广谱性的HIV-1假病毒系统的构建

论文摘要

截至2017年,HIV共计感染约7730万人,造成3540万人死于AIDS相关疾病,全球现有存活约有3690万人感染HIV。HIV潜伏感染、高突变性、破坏免疫系统等特征,是研发有效预防和治疗性疫苗的极大障碍。HIV疫苗研发、抗病毒治疗药物开发以及中和抗体评价鉴定,需要有效、标准的评估体系,基于HIV假病毒的细胞评价方法,是HIV研究的重要工具。本研究旨在构建能用于评价候选疫苗抗血清、中和抗体效价和广谱性的HIV Env假病毒体系,建立假病毒两质粒系统;实现HIV-1 Env假病毒10株全球盘代表性毒株和8株全球流行株的包装生产,涉及6种流行亚型（A、B、C、D、DC和G）和2种重组亚型（CRF07BC、CRFO1AE）。通过对比三种表达载体对重组Env表达以及假病毒包装效率差异,确定具有毒株Env表达通用性的真核表达载体pVRC8400;摸索优化转染条件,测定关键蛋白含量、病毒滴度,确定各毒株包装的最优条件。通过对比HIV-1流行株94UG114、NL4-3两质粒体系包装的假病毒与感染性分子克隆包装的真病毒在评价免疫血清、三类中和抗体的效价的差异,证明本研究所构建的假病毒可以替代真病毒工作。以该假病毒盘为工具,对实验室获得的广谱中和抗体、靶向CD4受体的抗体15A7、gp140交叉中和抗体进行中和效价和广谱性评价,为后续HIV疫苗的研究和中和抗体的开发提供了重要的评估工具。假病毒具有安全性高、应用性强和易于获得等优点,替代真病毒进行各类抗体、药物评价,对HIV-1研究具有重要意义。假病毒盘作为中和抗体性质鉴定的重要工具,对指导疫苗设计、攻克艾滋难题提供强有力支持。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• Abbreviations
• 第一章 前言
•   1. AIDS流行情况
•     1.1 AIDS在全球流行情况
•     1.2 AIDS在中国流行情况
•   2. HIV生物学特征
•     2.1 HIV起源、危害与分类
•     2.2 HIV结构与基因组
•     2.3 HIV生活周期
•   3. HIV预防与治疗研究
•     3.1 HIV-1广谱中和抗体研究与疫苗设计
•     3.2 HIV疫苗设计面临的困难
•     3.3 抗病毒治疗
•   4. HIV假病毒
•     4.1 假病毒
•     4.2 HIV假病毒分类
•     4.3 HIV假病毒的应用
•     4.4 评价抗体中和能力的HIV-1 Env假病毒参考盘的建立
•     4.5 HIV假病毒的应用优势及局限性
•   5. 本研究的思路、方法和意义
• 第二章 材料与方法
•   1. 材料
•     1.1 主要仪器与设备
•     1.2 菌株、质粒、蛋白、抗体、细胞、实验动物
•     1.3 常用实验溶液配制
•   2. 方法
•     2.1 分子克隆实验操作方法
•     2.2 细胞实验操作方法
•     2.3 蛋白鉴定方法
•     2.4 ELISA实验
•     2.5 免疫荧光
•     2.6 动物实验
•     2.7 单克隆抗体的制备方法
• 第三章 结果与分析
•   1. HIV-1假病毒的构建与鉴定
•     1.1 HIV-1 Env包膜蛋白真核表达载体的选择
•     1.2 HIV-1 Env表达质粒的克隆构建
•     1.3 HIV-1 Env表达鉴定
•     1.4 包装HIV-1假病毒的转染条件优化
•     1.5 HIV-1相关蛋白含量与假病毒滴度测定
•     1.6 本节小结
•   2. HIV-1假病毒与真病毒的生物学性质比较
•     2.1 TZM-b1细胞感染实验
•     2.2 对免疫小鼠多抗血清中和能力评价的比较
•     2.3 对广谱中和抗体、鼠源单克隆抗体中和能力评价的比较
•     2.4 负染电镜结果比较
•     2.5 本节小结
•   3. HIV-1假病毒系统的应用
•     3.1 HIV-1假病毒评价bnAbs的中和反应性
•     3.2 HIV-1假病毒评价gp140单克隆抗体的中和反应性
•     3.3 HIV-1假病毒评价靶向CD4受体的单克隆抗体15A7的中和反应性
•     3.4 本节小结
• 讨论
•   1. HIV-1假病毒平台构建
•   2. HIV-1假病毒的滴度
•   3. HIV-1假病毒平台的应用
•   4. HIV-1假病毒构建的意义及难点
• 小结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间科研成果

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 黄芳

导师: 顾颖

关键词: 人类免疫缺陷病毒,假病毒,中和广谱性抗体

来源: 厦门大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 厦门大学

分类号: R392

总页数: 96

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