人乳头瘤病毒52型L1蛋白病毒样颗粒在毕赤酵母中的优化表达、纯化及其免疫原性

论文摘要

目的利用毕赤酵母系统表达人乳头瘤病毒52型（human papillomaviruses 52,HPV52）L1蛋白,并检测其病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）的免疫原性。方法采用同义密码子替换的方法对HPV52 L1蛋白的野生型基因进行密码子优化,并在体外构建多拷贝表达质粒,经转化和筛选获得在毕赤酵母系统中高表达的HPV52 L1 VLP菌种。采用15 L发酵罐大规模培养,菌液破碎上清经阳离子交换层析和分子筛排阻层析两步法纯化,获得HPV52 L1VLP。动态光散射和透射电子显微镜观察HPV52 L1 VLP的大小和形态,假病毒中和试验检测HPV52 L1 VLP在小鼠及大鼠体内的免疫原性。结果 HPV52 L1 VLP在溶液中呈较均一的单一组分,水合粒径为91. 37 nm;镜下观察呈均一的、直径约50 nm的球状空心颗粒,大小与HPV52天然病毒颗粒相近。HPV52 L1 VLP相对分子质量约56 000,纯度达95%以上,产量为3. 6 mg/L,且可与小鼠抗HPV L1多克隆单抗发生特异性结合。HPV52 L1 VLP在小鼠体内的半数有效剂量(ED50)为0. 010μg,在大鼠体内诱导产生的中和抗体滴度高达106。结论于毕赤酵母系统成功表达了HPV52 L1 VLP,且具有良好的免疫原性,为相关预防性疫苗的研发奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌种及质粒
•   1.2 主要试剂及仪器
•   1.3 实验动物
•   1.4 培养基的制备
•   1.5 HPV52 L1野生型基因密码子的优化
•   1.6 多拷贝表达质粒的构建
•   1.7 毕赤酵母的电转化
•   1.8 目的蛋白的诱导表达
•   1.9 目的蛋白的检测
•   1.1 0 15 L发酵罐培养
•   1.1 1 HPV52 L1 VLP的纯化
•   1.1 2 HPV52 L1 VLP的形态学检测
•     1.1 2. 1 动态光散射分析
•     1.1 2. 2 透射电镜观察
•   1.1 3 HPV52 L1 VLP免疫效果的评价
•     1.1 3. 1 HPV52 L1 VLP在BALB/c小鼠体内的免疫原性
•     1.1 3. 2 HPV52 L1 VLP在SD大鼠体内的免疫原性
• 2 结果
•   2.1 HPV52 L1基因的优化
•   2.2 多拷贝质粒的鉴定
•   2.3 高表达HPV52 L1蛋白毕赤酵母菌株的筛选
•   2.4 HPV52 L1 VLP纯化产物的鉴定
•   2.5 动态光散射分析结果
•   2.6 HPV52 L1 VLP的镜下观察结果
•   2.7 HPV52 L1 VLP在BALB/c小鼠体内的免疫原性
•   2.8 HPV52 L1 VLP在SD大鼠体内的免疫原性
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 仝光杰,王文伟,蔡蓓蓓,王蓓,胡海涛,楼觉人

关键词: 人乳头瘤病毒型,蛋白,病毒样颗粒,毕赤酵母,免疫原性

来源: 中国生物制品学杂志 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 上海生物制品研究所有限责任公司

分类号: Q78

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002910

页码: 1336-1342

总页数: 7

文件大小: 467K

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