受体相互作用蛋白激酶-3参与甲型流感病毒H1N1感染C57BL/6小鼠诱导特异性CD8+T细胞应答

论文摘要

目的研究受体相互作用蛋白激酶-3（receptor-interacting protein 3, RIP3）在C57BL/6小鼠感染甲型流感病毒H1N1 PR8后,在特异性CD8+T细胞免疫应答中的作用。方法用剂量为0.7×103半数组织细胞感染剂量(50%tissue culture infective dose, TCID50)的甲型流感H1N1 PR8病毒株,通过滴鼻方式分别感染RIP3敲除(RIP3-/-)和野生型（WT）的C57BL/6小鼠。在感染后第8天（day post infection, d.p.i）分离小鼠脾细胞,使用流式细胞术（fluorescence-activated cell sorting, FACS）检测流感抗原特异性CD8+T细胞数量及功能:MHC I表位肽四聚体法（tetramer staining）染色流感特异性CD8+T细胞,细胞内细胞因子染色法（intracellular cytokine staining, ICS）检测CD8+T细胞产生IFN-γ、TNF-α、IL-2等效应性细胞因子水平和与CD8+T细胞杀伤功能有关的颗粒酶（granzyme B）的表达情况。结果 0.7×103TCID50流感病毒感染后,WT小鼠中流感抗原特异性CD8+T细胞比例为RIP3-/-小鼠的2.71倍;WT小鼠中CD8+T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-2的能力均显著高于RIP3-/-小鼠（P<0.01）;且WT小鼠CD8+T表达granzyme B水平显著高于RIP3-/-小鼠（P<0.01）。结论本研究在甲型流感病毒感染的小鼠体内发现敲除RIP3分子可导致流感感染诱导的特异性CD8+T细胞数量减少、功能降低,表明RIP3是参与流感抗原特异性CD8+T细胞的诱生及功能发挥的关键分子之一。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 实验动物
•     1.1.2 病毒
•     1.1.3 实验试剂
•     1.1.4 实验仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 动物分组及小鼠攻毒
•     1.2.2 样本采集
•     1.2.3 流式细胞术（FACS）检测流感特异性CD8+T细胞
•     1.2.4 流式细胞术（FACS）检测细胞内因子表达
•   1.3 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 RIP3对小鼠流感抗原特异性CD8+T细胞诱生能力的影响
•   2.2 RIP3对小鼠CD8+T细胞分泌内因子能力的影响
•   2.3 RIP3对小鼠CD8+T细胞分泌Granzyme B能力的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 秦波音,王超,刘洋,谭丹,方钟,李顺,周晓辉

关键词: 流感病毒,细胞,特异性细胞

来源: 中国实验动物学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 复旦大学附属公共卫生临床中心

基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500208),国家十三五传染病重大专项(2017ZX10304402-001-012,2017ZX10304402-001-006),国家自然科学基金(31601908,81471397),上海市公共卫生临床中心院内项目(KY-GW-2018-48,KY-GW-2019-19)~~

分类号: R373.13

页码: 549-554

总页数: 6

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