基于适配体的微流控芯片电泳分析技术研究

论文摘要

微流控芯片分析以芯片为操作平台,以生命科学为目前主要应用对象,是当前微全分析系统领域发展的重点。它是把整个化验室的功能,包括采样、稀释、加试剂、反应、分离、检测等集成在微芯片上,可多次使用。微流控芯片被广泛应用于生物检测、化学分析、临床医学、药剂合成等研究领域。基于MCE具有的巨大优势和广泛多样的研究领域,本文展开了微流控对大分子,离子和细菌的电泳分析与研究,通过各方面条件的优化,提高了实验对目标物的选择性和灵敏度。论文研究的主要内容主要包括以下四个部分:第一章介绍了微流控芯片电泳的发展背景、主要优势、基本特征、检测方法和主要应用领域。第二章一种微流控芯片电泳结合PCR技术检测食品中奇异形杆菌、坂崎肠杆菌和金黄色葡萄球菌的研究方法。在本研究中,我们通过多重PCR扩增和微芯片电泳（MCE）联合检测金黄色葡萄球菌、奇异变形杆菌和阪崎肠杆菌。同时提取了这些细菌的DNA片段,并添加了三对特异引物,用于多重PCR扩增。三个食源性致病菌的PCR产物在135s实现分离,检测限为1.2-2.2 ngμL-1,（S/N=3）。三种细菌的检测限为:阪崎肠杆菌53 CFU mL-1,奇异变形杆菌32个CFU mL-1,金黄色葡萄球菌28 CFU mL-1。采用此种基于多重PCR的同时检测方法对牛奶样品中三种食源性细菌进行定性定量检测。第三章一种基于特异性适配体的微流控芯片电泳检测血清中细胞色素C的分析方法。本研究基于适配体结合微流控芯片电泳（MCE）对Cyt C进行分析检测。在特异性适配体与Cyt C结合后,适配体会呈现不规则状态,降低MCE中荧光探针的结合亲和力,从而阻碍适配体-Cyt C复合物在MCE中检测。残留适配体检测峰的高度下降,因此利用残留适配体峰值高度与初始适配体峰值高度的差值来定量检测的蛋白浓度。优化了培养时间、pH、温度、离子强度等实验条件。MCE在135 s内测定Cyt C浓度,检测限低至0.4 nM。实验结果表明,该方法快速、样品消耗量小、选择性高、灵敏度高。第四章基于DNAzyme的微流控芯片电泳检测污水中的铅离子的研究方法。重金属污染已成为当今最严重的环境问题之一,其处理受到特别关注。基于DNAzyme联合MCE建立了一种简便、快捷的检测污水中Pb（Ⅱ）的方法。本文中利用DNAzyme和S-DNA的结合双链,在Pb（Ⅱ）存在的条件下,通过裂解出的DNAzyme在MCE检测中的荧光信号对应Pb（Ⅱ）浓度得到标准曲线。Pb（Ⅱ）可在135 s内通过MCE定量检测,检测限低至2 nM。在实际样品检测中可通过DNAzyme在MCE中的荧光信号来定量Pb（Ⅱ）浓度。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
•   1.微流控芯片电泳概述
•   2.微流控芯片电泳的进样方式
•   3.微流控芯片电泳在线富集技术
•   4.微流控芯片电泳的检测系统
•   5.微流控芯片PCR扩增
•   6.微流控芯片的应用
•   7.本论文的研究内容和意义
•   参考文献
• 第二章 微流控芯片电泳结合PCR技术检测食品中奇异形杆菌、坂崎肠杆菌和金黄色葡萄球菌的研究
•   1.引言
•   2.实验部分
•   3.结果与讨论
•   4.结论
•   参考文献
• 第三章 基于特异性适配体的微流控芯片电泳检测血清中细胞色素C的研究
•   1.引言
•   2.实验部分
•   3.结果与讨论
•   4.结论
•   参考文献
• 第四章 基于DNAzyme的微流控芯片电泳检测污水中的铅离子的研究
•   1.引言
•   2.实验部分
•   3.结果与分析
•   4.结论
•   参考文献
• 附录 硕士期间科研成果
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 祝璐琪

导师: 王清江

关键词: 微流控芯片,食源性细菌,细胞色素

来源: 华东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,医药卫生科技

专业: 生物学,化学,生物医学工程

单位: 华东师范大学

分类号: R318;O658.9

总页数: 75

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