导读:本文包含了人恶性黑色素瘤细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:NDV,FMW,维罗非尼,耐药,恶性黑色素瘤
人恶性黑色素瘤细胞论文文献综述
邵晓雁,王雪珂,陈健华,朱忠政,孟松树[1]（2019）在《NDV/FMW对耐维罗非尼的恶性黑色素瘤细胞免疫原性死亡相关分子表达的影响》一文中研究指出目的探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)毒株FMW(NDV/FMW)对恶性黑色素瘤维罗非尼(vemurafenib)耐药细胞株WM3248/vemurafenib免疫原性死亡相关分子表达的影响。方法通过病毒滴度检测考察病毒复制情况;采用CCK8试剂盒检测细胞存活率; Western印迹法检测细胞凋亡蛋白、细胞和上清液中高迁移率族蛋白1(HMGB1)和热休克蛋白90(HSP90)变化;流式细胞术和激光共聚焦技术检测细胞膜上钙网蛋白(calreticulin,CRT)的表达;荧光素酶法检测细胞上清液中的叁磷酸腺苷(ATP)的释放。结果 NDV/FMW在WM 3248/vemurafenib细胞株内复制,降低耐药细胞存活率并增加细胞凋亡(P <0. 001); NDV/FM W诱导WM 3248/vemurafenib细胞膜CRT表达增加(P <0. 01),ATP分泌、HM GB1和HSP90释放(P <0. 05)。结论NDV/FM W促进WM 3248/vemurafenib细胞株死亡,免疫原性死亡是其死亡机制之一。(本文来源于《同济大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
金龙,王清湲,何珈缘,吴晓兰,周昕欣[2]（2019）在《β-榄香烯抑制B16恶性黑色素瘤细胞的EPHA2表达和血管生成拟态》一文中研究指出目的研究β-E对B16恶性黑色素瘤细胞上皮细胞激酶(epithelial cell kinase,EphA2)表达和血管生成拟态的影响及其相关机制。方法培养B16细胞,建立体外恶性黑色素瘤模型,应用qRT-PCR法和Western-blot法检测β-E对B16细胞EPHA2 mRNA和蛋白表达影响,应用Matrigel诱导血管生成实验检测β-E对B16细胞血管生成拟态生成能力的影响。结果成功建立体外恶性黑色素瘤模型,β-E显着抑制B16细胞EPHA2mRNA和蛋白表达,抑制B16细胞血管生成拟态生成能力。结论β-E可在治疗恶性黑色素瘤中起重要作用。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2019年04期）
雷华,陈金,戴耕武,吴冬梅,罗东升[3]（2019）在《恶性黑色素瘤细胞miR-21与PTPN14关系及其对迁移和侵袭影响》一文中研究指出目的 miR-21在恶性黑色素瘤进展中扮演癌基因的角色,但具体机制不清。本研究旨在探讨miR-21和蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型14(tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 14,PTPN14)的关系及其在恶性黑色素瘤中的表达和作用机制。方法通过RT-qPCR检测miR-21在恶性黑色素瘤细胞及正常黑色素细胞中的表达,转染miR-21inhibitors沉默恶性黑色素瘤A375细胞miR-21的表达,RT-qPCR检测其沉默效果及对PTPN14mRNA水平的影响;蛋白质印迹法检测其对PTPN14蛋白水平的影响;荧光素酶报告基因技术检测PTPN14是否为miR-21的直接靶基因;Transwell实验检测转染miR-21后A375细胞侵袭及迁移能力的变化。结果与人表皮黑色素(human epidermal melanoma,HEM)细胞相比,A375细胞中miR-21表达明显增高,t=2.732,P=0.029,转染miR-21inhibitors的A375细胞中miR-21的表达明显下调,F=9.415,P=0.021;下调A375细胞中miR-21表达可以促进PTPN14的表达、抑制细胞的侵袭(F=6.585,P=0.032)及迁移(F=8.351,P=0.019)能力,miR-21mimics可降低野生型PTPN14 3′-UTR的荧光素酶报告基因相对活性,t=3.42,P=0.035。结论 miR-21下调可以促进靶分子PTPN14的表达,阻滞恶性黑色素瘤细胞的侵袭及迁移。(本文来源于《中华肿瘤防治杂志》期刊2019年05期）
黄海潮,周捷,郑公铭,徐单单,臧林泉[4]（2018）在《柯里拉京对人恶性黑色素瘤细胞抑制作用机制的研究》一文中研究指出目的研究柯里拉京对人黑色素瘤细胞产生抑制作用的机制。方法以A375细胞株为病理模型,观察不同浓度的柯里拉京的作用效果。采用CCK-8检测细胞存活率;Hoechst 33258染色观察细胞的凋亡形态,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、p-Akt、p-GSK-3β、cyclin D1的表达量;采用比色法测定酪氨酸酶活性以及黑色素的生成量。结果 CCK-8结果显示,柯里拉京可明显降低A375细胞的存活率,且其抑制作用与药物浓度相关;柯里拉京可以引起A375细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的形态学特征明显;柯里拉京作用后可以明显上调Bax、cleaved-caspase-3,降低Bcl-2表达量,下调p-Akt、p-GSK-3β、cyclin D1表达;与空白细胞组对比,柯里拉京能明显抑制酪氨酸酶的活性,并减少黑色素的生成量。结论柯里拉京可诱导A375细胞凋亡并抑制其增殖,其作用机制可能与线粒体凋亡通路,以及影响PI3K/Akt信号转导相关蛋白有关。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2018年11期）
贺佳妮[5]（2018）在《Rsf-1通过NF-κB信号通路来调节恶性黑色素瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及耐药性》一文中研究指出目的:近几十年来,恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)的发病率和死亡率均明显上升,其恶性程度较高,最多累及的器官是皮肤。虽然部分早期患者可通过手术治疗得到治愈,而其较早转移、死亡率高,放化疗对其作用较差,很多患者预后不良。黑色素瘤的具体病因目前还不明确,主要认为可能与过长时间紫外线照射有一定关系。所以,揭示恶性黑色素瘤发病分子机制,发现关键分子或靶点,对于诊断和治疗恶性黑色素瘤具有重要的理论和临床意义。Rsf-l是染色体重塑复合物ISWI的一个亚单位。染色体重塑复合物使染色质发生重塑而调节核酸合成,转录调节,DNA修复、甲基化及重组等关键生物活动,该复合物的任何组成蛋白发生异常时会引起基因的异常表达和肿瘤的发生。近些年来,对于恶性黑色素瘤的研究很多,已表明11q13区的基因在食管癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌、及恶性黑色素瘤中都有扩增,同属11q13.5染色体区的Rsf-1基因在口腔鳞状细胞癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌等上皮恶性肿瘤中存在Rsf-1的过表达和/或基因扩增,其表达上调与肿瘤的增殖、侵袭等等的不良生物学行为有关,并且与肿瘤患者预后不良有关,也有文献报道称扩增后高表达的Rsf-1蛋白可以与hSNF2H形成RSF复合体,使染色质结构发生重塑后使某些基因表达增强进而导致肿瘤的发生。但Rsf-1在恶性黑色素瘤中的表达情况及生物学作用尚未见报道。我们应用免疫组化的方法检测Rsf-1在恶性黑色素瘤中的表达情况,采用小RNA干扰技术敲除黑色素瘤细胞中的Rsf-1,检测其对细胞的侵袭以及增殖、凋亡等生物学行为的影响,同时探讨其可能发生分子机制。为进一步恶性黑色素瘤的发病机理和生物学行为及寻找诊断和治疗手段提供理论和临床基础。方法与结果:1、在人黑色素瘤组织标本中检测Rsf-1表达情况,对比癌与正常皮肤间的表达差异。我们选取52例黑色素瘤组织和对应的正常皮肤组织进行免疫组织化学染色,结果发现Rsf-1在肿瘤组织中表达明显高于正常皮肤组织。与之前的文献报道一致,Rsf-1在恶性黑色素瘤中定位于细胞核,其阳性表达率为40.4%(21/52)。2、在人黑色素瘤细胞系中转染和干扰Rsf-1后,检测Rsf-1对黑色素瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。我们在内源性高表达Rsf-1的MV3和A375黑色素瘤细胞系中用siRNA敲除Rsf-1。在内源性低表达Rsf-1的M14细胞中转染Rsf-1质粒。MTT,克隆形成实验及细胞周期实验发现,Rsf-1敲除抑制细胞增殖,阻滞细胞周期进程。而Transwell侵袭实验结果显示下调Rsf-1抑制细胞侵袭。3、通过检测细胞增殖及侵袭相关蛋白来探讨Rsf-1促进黑色素瘤细胞增殖和侵袭的可能机制。我们用Western Blot方法检测黑色素瘤细胞中Rsf-1水平变化对细胞增殖及侵袭相关蛋白cyclin E,MMP2和p-IκB的影响。结果显示,Rsf-1敲除能下调cyclin E,MMP2和p-IκB的蛋白水平。我们还通过免疫共沉淀的方法证实了Rsf-1和hSNF2H在黑色素瘤细胞中的结合。4、通过紫杉醇诱导凋亡后,转染以及干扰Rsf-1,检测Rsf-1对黑色素瘤细胞存活率,凋亡率以及线粒体膜电位变化的影响。我们在黑色素瘤细胞MV3,A375和M14中加入5μm的紫杉醇诱导凋亡,然后再干扰或转染Rsf-1,调节Rsf-1的表达。MTT实验结果显示抑制Rsf-1可以明显减少恶性黑色素瘤细胞的存活率,Annexin V-FITC细胞凋亡双染实验显示抑制Rsf-1可以明显增加恶性黑色素瘤细胞的凋亡。流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化显示Rsf-1干扰可以下调肿瘤细胞线粒体膜电位。5、通过检测细胞凋亡相关蛋白来探讨Rsf-1抑制黑色素瘤细胞凋亡的可能机制。我们用Western Blot方法检测黑色素瘤细胞中Rsf-1水平变化对凋亡抑制因子Bcl-2、cIAP1、cIAP2蛋白和促凋亡因子Bax的影响。结果显示,Rsf-1敲除可以显着减少凋亡抑制因子Bcl-2、cIAP1、cIAP2蛋白的表达,增加促凋亡因子Bax蛋白的表达。细胞经NF-κB信号通路抑制剂处理后,Western Blot方法检测Rsf-1对Bcl-2以及bax的调控作用丧失。结论:1、Rsf-1在正常组织中表达明显低于黑色素瘤,阳性表达率为40.4%(21/52)。2、干扰Rsf-1抑制黑色素瘤细胞的增殖和侵袭能力。3、干扰Rsf-1下调黑色素瘤细胞中MMP2和cyclin E的表达及IκB的磷酸化。4、Rsf-1在黑色素瘤细胞中能与hSNF2H结合。5、干扰Rsf-1降低恶性黑色素瘤细胞经紫杉醇诱导后的存活率,增加细胞的凋亡率,降低细胞线粒体膜电位。6、干扰Rsf-1减少凋亡抑制因子Bcl-2、cIAP1、cIAP2蛋白的表达,增加促凋亡因子Bax蛋白的表达。7、干扰Rsf-1抑制黑色素瘤细胞中NF-κB信号通路活性水平。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-10-01）
邱小明,李锋,石贤爱[6]（2018）在《紫菜多酚对人恶性黑色素瘤细胞A375增殖和诱导凋亡的影响及机制探讨》一文中研究指出以紫菜为原料,通过乙醇溶剂提取、硅胶柱层析、高效液相制备色谱等步骤,得到紫菜多酚组分C1、C2、D1、D2四个组分.通过MTT法测定组分C1、C2对人恶性黑色素瘤细胞A375的增殖抑制作用,结果表明:组分C1、C2作用于A375细胞48 h的IC50分别为1.10、1.58 mg·m L-1.采用Annexin V/PI双染测定细胞凋亡情况发现,A375细胞经紫菜多酚组分C1处理后凋亡的细胞比例增加.经组分C1作用的A375细胞中黑色素含量和相对酪氨酸酶活力均得到提高,且与药物浓度呈正相关关系;透射电镜检测A375细胞超微结构的变化发现紫菜多酚组分C1可诱导A375细胞趋向正常分化.(本文来源于《福州大学学报(自然科学版)》期刊2018年03期）
张玫莹,朱铁年,赵瑞景,崔玉洁,范婧[7]（2018）在《小凹蛋白-1调控表皮生长因子受体活化对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响》一文中研究指出目的探讨小凹蛋白-1(Cav-1)调控表皮生长因子受体(EGFR)活化对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响。方法体外培养恶性黑色素瘤M2细胞,利用质粒转染技术建立过表达Cav-1的稳定细胞株M2(Cav-1)并验证;MTS法、细胞划痕实验以及Transwell侵袭实验分别检测稳定转染细胞株的增殖、迁移与侵袭能力;蛋白免疫印迹法检测稳转细胞株EGFR及其下游信号转导通路的活化水平。结果通过质粒转染技术得到的M2(Cav-1)细胞中Cav-1的表达量明显高于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。在不同浓度表皮生长因子(EGF)刺激下,M2(Cav-1)细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力均低于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。M2(Cav-1)细胞经EGF刺激后磷酸化EGFR、ERK及Akt水平明显低于M2(pcDNA3.1)细胞(P<0.01)。结论 Cav-1可通过调控恶性黑色素瘤M2细胞EGFR的活化水平,影响MAPK/ERK及PI3K/Akt信号转导通路激酶的活化,进而影响M2细胞的生物学行为。(本文来源于《解放军医药杂志》期刊2018年04期）
谢汶蓉,梁桂丽,石本艳,孙雪荣,刘新光[8]（2018）在《AHA1蛋白对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响》一文中研究指出目的研究AHA1蛋白对恶性黑色素瘤细胞增殖的影响。方法恶性黑色素瘤A375细胞转染真核表达载体过表达AHA1蛋白后,用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫印迹检测P21蛋白表达。结果AHA1过表达抑制A375细胞增殖(P<0.01),增加G0/G1期细胞(P<0.05)和P21表达。结论过表达AHA1通过上调P21表达、G1期阻滞,抑制恶性黑色素瘤细胞增殖。(本文来源于《广东医科大学学报》期刊2018年01期）
张玫莹[9]（2018）在《Caveolin-1调控EGFR活化对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响》一文中研究指出恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)多好发于皮肤、粘膜。是起源于胚胎期神经嵴的恶性肿瘤,易转移,预后较差,发病率为全部恶性肿瘤的1%~3%。然而近十几年来,恶性黑色素瘤的发病率日益增加。传统的手术、放化疗一直是恶性黑色素瘤治疗的主要方法,但对于晚期患者来说,手术治疗无生存获益,且其对放疗和化疗敏感性欠佳。近年来,随着黑色素瘤相关突变基因的发现与深入研究,分子靶向药物为其治疗带来了突破性进展。因此,探索更多的有效靶点成为了当前首要任务。表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)分子量为170kDa,是一种参与细胞增殖、存活、转移的蛋白质。表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)为其配体,当EGFR受到刺激后,可与EGF发生结合,产生构型变化,形成同源或异源二聚体,使其胞内段受体酪氨酸激酶发生自身磷酸化,进而激活其下游通路。其中主要包括Ras/Raf/MEK/ERK、PI3K/AKT通路等。目前有研究证明,包括黑色素瘤在内的人多种恶性肿瘤中均可发现有EGFR过表达现象的存在,且EGFR的表达水平可与治疗效果差、疾病恶化快以及存活率低有关。小凹蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是分子量为21-24kDa的膜内在蛋白,是膜内陷囊泡的重要结构蛋白。Cav-1由178个氨基酸残基组成,位于肽链中的疏水残基(102-134)在膜结构上形成特殊的发卡样结构,将Cav-1蛋白分成N端及C端两个区域,其中N端为主要的功能区域,该区域通过与EGFR相连接,调控EGFR酪氨酸激酶的活性。目前已有多项研究显示,Cav-1可在不同恶性肿瘤中发挥抑制或促进的作用。然而Cav-1通过调控EGFR在恶性黑色素瘤细胞中发挥作用的研究尚未见报道。根据预实验结果提示,恶性黑色素瘤UACC647细胞中的Cav-1的表达量明显高于M2细胞,而M2细胞中Cav-1表达量较少。故本次研究分别以高表达Cav-1的UACC647细胞和低表达Cav-1的M2细胞为研究对象,通过质粒稳定转染技术,改变两组细胞中Cav-1的表达水平,通过对比Cav-1水平改变前后恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化,探讨Cav-1对恶性黑色素瘤细胞生物学行为的影响,并进而探讨其可能存在的分子机制。为恶性黑色素瘤的新靶点的探索以及治疗预后提供新的理论依据。方法:1细胞转染选取高表达Cav-1的UACC647细胞,分别转染Ctrl shRNA和Cav-1shRNA质粒,嘌呤霉素进行抗性筛选,从而构建稳定转染的UACC647Ctrl shRNA[UACC647(Ctrl)]和UACC647 Cav-1 shRNA[UACC647(KD)]细胞。另外选取低表达Cav-1的M2细胞,分别转染pcDNA3.1和pcDNA3.1/Cav-1质粒,G418进行抗性筛选,进而构建稳定转染的M2(pcDNA3.1)和M2(pcDNA3.1/Cav-1)[M2(Cav-1)]细胞。Western blot验证Cav-1表达情况。2 MTS实验检测细胞增殖能力将细胞接种于96孔板中,待细胞贴壁后加入不同浓度的EGF溶液刺激,培养一定时间后检测各孔的吸光度值(OD)。3细胞划痕修复实验检测细胞迁移能力将细胞接种于24孔板中,待形成单细胞层后用移液器枪头进行划痕,观察在有或无EGF刺激下细胞的迁移情况,在不同时间点拍照记录,直至划痕愈合。4 Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力将细胞接种于Transwell小室中,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养24h。观察并统计穿膜细胞数。5 Western blot检测蛋白表达水平分别用终浓度为20nM EGF的培养基培养UACC647(Ctrl)和UACC647(KD)细胞以及M2(pcDNA3.1)和M2(Cav-1)细胞,培养时间分别为0、5、10、30min。提取各组细胞总蛋白。将蛋白样品等体积上样,电泳、转膜、孵育抗体,分别检测UACC647(Ctrl)和UACC647(KD)细胞以及M2(pcDNA3.1)和M2(Cav-1)细胞中EGFR、pY-EGFR、Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Cav-1和β-actin的蛋白表达水平,测量灰度值,分别计算各组细胞磷酸化EGFR、Akt和Erk占总EGFR、Akt和Erk的相对值。结果1稳定转染细胞株中Cav-1蛋白表达量蛋白印迹检测UACC647(Ctrl)和UACC647(KD)细胞中Cav-1的蛋白表达量,测得的相对灰度值分别为(0.84±0.03,0.24±0.01)。与相应的其他两组细胞相比,UACC647(KD)细胞Cav-1蛋白表达水平明显降低,差异有显着性(P<0.01)。M2(pcDNA3.1)和M2(Cav-1)细胞中Cav-1表达量的相对灰度值分别是(0.83±0.08,2.01±0.21)。与相应的其他两组相比,M2(Cav-1)细胞中Cav-1蛋白表达明显增高,差异有显着性(P<0.01)。2 Cav-1表达对恶性黑色素瘤细胞增殖能力的影响采用MTS法,检测抑制Cav-1表达水平后,UACC647细胞增殖能力的变化。在不同浓度EGF(4nM、20nM、100nM)刺激下,与UACC647(Ctrl)细胞相比,低表达Cav-1的UACC647(KD)细胞生长活力均有所增高(0.78±0.02 vs.0.88±0.04、0.86±0.01 vs.1.03±0.03、0.98±0.03 vs.1.15±0.03),且差异有显着性(P<0.05)。MTS法检测过表达Cav-1表达水平后,M2细胞增殖能力的变化。在终浓度分别为0nM、4nM、20nM、100nM的EGF刺激下,与M2(pcDNA3.1)细胞相比,M2(Cav-1)细胞生长活力均有所下降(0.92±0.03 vs.0.63±0.05、1.03±0.11 vs.0.73±0.06、1.10±0.10 vs.0.80±0.02、1.22±0.09 vs.0.89±0.03),差异均有显着性(P<0.01)。3 Cav-1表达对恶性黑色素瘤细胞迁移能力的影响利用细胞划痕修复实验,检测敲低Cav-1表达水平后,UACC647细胞迁移能力的变化。每间隔8h,在各组细胞划痕固定位置拍照,直至划痕愈合。以初始划痕宽度为1,计算各时间点划痕宽度相对值。在没有EGF刺激条件下,各时间点均可见低表达Cav-1的UACC647(KD)细胞划痕愈合速度较快,划痕相对宽度值均小于正常表达Cav-1的UACC647(Ctrl)细胞(0.72±0.02 vs.0.87±0.02、0.67±0.01 vs.0.81±0.03、0.46±0.01 vs.0.76±0.01),差异有显着性(P<0.01)。当存在EGF刺激条件下,UACC647(KD)细胞在各拍照时间点愈合速度均较快,划痕相对宽度明显小于UACC647(Ctrl)细胞(0.57±0.03 vs.0.75±0.02、0.28±0.03 vs.0.68±0.02、0.09±0.01 vs.0.49±0.01),差异有显着性(P<0.01)。同样方法检测M2(Cav-1)细胞的迁移能力。每间隔5h,在各组细胞划痕固定位置拍照。在没有EGF刺激条件下,M2(Cav-1)细胞划痕愈合速度较慢,在各个时间点划痕愈合的相对宽度均大于M2(pcDNA3.1)细胞(0.92±0.03 vs.0.72±0.02、0.81±0.05 vs.0.57±0.03、0.65±0.01 vs.0.34±0.04),差异有显着性(P<0.01)。当存在EGF刺激条件下,M2(Cav-1)细胞在各时间点愈合速度同样慢于M2(pcDNA3.1)细胞,其划痕相对宽度明显较大(0.82±0.03 vs.0.63±0.03、0.73±0.02 vs.0.42±0.02、0.46±0.03 vs.0.00±0.00),差异均有显着性(P<0.01)。4 Cav-1表达对恶性黑色素瘤细胞侵袭能力的影响利用transwell小室侵袭实验,检测敲低Cav-1表达水平后,UACC647细胞侵袭能力的变化。可见,与UACC647(Ctrl)细胞相比,低表达Cav-1的UACC647(KD)细胞侵袭能力增强,穿过Transwell小室滤膜的细胞数量相对增高(1±0.00 vs.2.37±0.09),差异有显着性(P<0.01)。同样方法检测过表达Cav-1后,M2细胞侵袭能力的变化。与M2(pcDNA3.1)细胞相比,M2(Cav-1)细胞侵袭能力减弱。穿过Transwell小室滤膜的细胞数相对值明显降低(1±0.00 vs.0.59±0.08),差异具有显着性(P<0.01)。5 Cav-1表达对MAPK和PI3K信号通路蛋白表达的影响选取UACC647(Ctrl)细胞和UACC647(KD)细胞,采用Western blot检测EGF刺激0、5、10、30min后pY-EGFR、p-Akt以及p-Erk水平。分别提取UACC647(Ctrl)和UACC647(KD)细胞总蛋白,用Cav-1抗体检测证实UACC647(KD)细胞中Cav-1表达量明显降低,为进一步分析Cav-1在EGFR信号通路中的作用提供依据。统计结果分析显示,在有EGF刺激的条件下,UACC647(KD)细胞各时间点(5、10、30min)磷酸化EGFR相对值明显高于UACC647(Ctrl)细胞(4.41±0.11 vs.1.80±0.20、1.35±0.07 vs.0.78±0.09、1.19±0.05 vs.0.51±0.14),差异有显着性(P<0.01);EGF刺激条件下,UACC647(KD)细胞各时间点(5、10、30min)磷酸化Erk相对值明显高于UACC647(Ctrl)细胞(0.89±0.05 vs.0.37±0.03、0.95±0.02 vs.0.65±0.03、0.90±0.04 vs.0.72±0.02),差异有显着性(P<0.05);EGF刺激条件下,UACC647(KD)细胞各时间点(5、10、30min)磷酸化Akt相对值明显高于UACC647(Ctrl)细胞(0.69±0.02 vs.0.38±0.06、0.78±0.05 vs.0.38±0.06、1.08±0.05 vs.0.68±0.05),差异有显着性(P<0.01)。综上所述,下调细胞中的Cav-1时,可促进EGF诱导的EGFR活化水平,并且激活其下游的MAPK/ERK及PI3K/AKT通路。同样方法检测M2(pcDNA3.1)细胞和M2(Cav-1)细胞EGF刺激0、5、10、30min后pY-EGFR、p-Akt以及p-Erk水平。分别提取M2(pcDNA3.1)和M2(Cav-1)细胞总蛋白,用Cav-1抗体检测证实M2(Cav-1)细胞中Cav-1表达量明显升高,为进一步分析Cav-1在EGFR信号通路中的作用提供依据。统计结果分析显示,在有EGF刺激的条件下,M2(Cav-1)细胞各时间点(5、10、30min)磷酸化EGFR相对值明显低于M2(pcDNA3.1)细胞(1.41±0.10 vs.2.60±0.28、0.36±0.04 vs.1.83±0.06、0.21±0.07 vs.0.67±0.08),差异有显着性(P<0.01);磷酸化Erk相对值明显低于M2(pcDNA3.1)细胞(0.72±0.05 vs.1.15±0.04、0.88±0.07 vs.1.47±0.09、0.68±0.08 vs.1.36±0.03),差异有显着性(P<0.01);磷酸化Akt相对值明显低于M2(pcDNA3.1)细胞(0.56±0.02 vs.1.16±0.05、0.40±0.08 vs.1.93±0.07、0.37±0.06 vs.1.26±0.09),差异有显着性(P<0.01)。综上所述,过表达细胞中的Cav-1时,可降低EGF诱导的EGFR活化水平,并且抑制其下游的MAPK/ERK及PI3K/AKT通路。结论:1敲低Cav-1表达可促进人恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力;2过表达Cav-1可抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力;3 Cav-1可通过调控EGFR的活化水平,可以抑制其下游的Ras/Raf/MEK/ERK和PI3K/AKT信号通路,进而抑制恶性黑色素瘤细胞的生长。(本文来源于《承德医学院》期刊2018-03-01）
李静[10]（2018）在《NCAM通过Src/Akt信号介导的cofilin活性影响人恶性黑色素瘤细胞迁移》一文中研究指出背景黑色素瘤是一种源于神经黑色素细胞、具有高度转移能力的恶性肿瘤,可发生于患者身体的各个部位。尽管目前存在多种治疗肿瘤的方法手段,但转移性黑色素瘤患者的预后效果并不乐观。因此,进一步深入研究恶性黑色素瘤的转移发展机制,寻找预防以及治疗黑色素瘤转移的有效靶点成为目前亟待解决的问题。神经细胞黏附分子(Neural cell adhesion molecule,NCAM),属于免疫球蛋白超家族的一员,在神经系统高度表达,主要参与调节神经细胞的黏附、迁移、分化及突触形成等。近期的研究发现,NCAM还参与肿瘤细胞的侵袭、发展及肿瘤转移。我们前期针对骨髓间充质干细胞的研究表明,敲除NCAM基因能抑制骨髓间充质干细胞定向伪足的形成,进而影响细胞的迁移能力。然而,关于NCAM在人恶性黑色素瘤中的作用及机制尚缺少相关数据。本研究的目的在于评价NCAM对人恶性黑色素瘤A375和M102细胞迁移的影响以及可能参与调控的分子机制。目的1.明确NCAM对人恶性黑色素瘤A375和M102细胞迁移的影响;2.探索NCAM影响人恶性黑色素瘤细胞迁移的分子机制。方法1.筛选NCAM基因沉默的人恶性黑色素瘤稳转细胞系用携带shNCAM质粒的慢病毒感染人恶性黑色素瘤A375和M102细胞,96 h后,用含有最佳筛选浓度的嘌呤霉素的培养基继续培养细胞,筛选得到两种NCAM基因沉默的人恶性黑色素瘤稳转细胞系。2.检测NCAM对人恶性黑色素瘤细胞迁移能力的影响通过划痕愈合实验和Transwell迁移实验分析NCAM基因沉默对人恶性黑色素瘤细胞迁移的影响。3.检测NCAM对人恶性黑色素瘤细胞肌动蛋白骨架重排的影响通过免疫荧光和Western blot实验分析NCAM基因沉默对人恶性黑色素瘤细胞肌动蛋白骨架重排及肌动蛋白结合蛋白cofilin活性的影响。4.分析NCAM影响人恶性黑色素瘤细胞肌动蛋白骨架重排的相关作用机制首先,通过查阅文献寻找既位于NCAM的下游又与肌动蛋白骨架重排相关的信号分子,最终目标锁定Src/Akt信号途径。然后通过Western blot实验检测NCAM基因沉默对Src及Akt磷酸化水平的影响;进一步地,向正常的黑色素瘤细胞中分别加入Src抑制剂PP2和Akt抑制剂LY294002,检测Src/Akt信号通路被抑制后对cofilin活性的影响。结果1.用携带shNCAM质粒的慢病毒分别感染人恶性黑色素瘤A375和M102细胞,获得两种NCAM基因沉默的稳转细胞系,所获得的稳转细胞系用于后续的实验;2.NCAM基因沉默抑制人恶性黑色素瘤细胞A375和M102的迁移;3.NCAM基因沉默抑制人恶性黑色素瘤细胞A375和M102中cofilin的磷酸化,进而影响肌动蛋白骨架的重排;4.NCAM基因沉默抑制人恶性黑色素瘤细胞A375和M102中Src和Akt的磷酸化水平;当在A375和M102细胞中分别加入Akt和Src抑制剂后,cofilin的磷酸化水平均明显降低。结论1.NCAM调控人恶性黑色素瘤细胞A375和M102的迁移;2.NCAM可能通过Src/Akt信号通路影响cofilin的磷酸化,进而调控黑色素瘤细胞肌动蛋白骨架的重排。(本文来源于《新乡医学院》期刊2018-03-01）
人恶性黑色素瘤细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究β-E对B16恶性黑色素瘤细胞上皮细胞激酶(epithelial cell kinase,EphA2)表达和血管生成拟态的影响及其相关机制。方法培养B16细胞,建立体外恶性黑色素瘤模型,应用qRT-PCR法和Western-blot法检测β-E对B16细胞EPHA2 mRNA和蛋白表达影响,应用Matrigel诱导血管生成实验检测β-E对B16细胞血管生成拟态生成能力的影响。结果成功建立体外恶性黑色素瘤模型,β-E显着抑制B16细胞EPHA2mRNA和蛋白表达,抑制B16细胞血管生成拟态生成能力。结论β-E可在治疗恶性黑色素瘤中起重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人恶性黑色素瘤细胞论文参考文献
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