稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞模型的建立

论文摘要

目的建立稳定表达TRPA1的HEK-293T细胞模型,并鉴定模型构建是否成功。方法构建TRPA1真核表达质粒,采用脂质体转染法将其转入HEK-293T细胞中,经G418筛选稳定表达株,采用RT-PCR、免疫组化技术,检测HEK-293T细胞TRPA1基因的转录和蛋白的表达。结果经酶切、测序证明,TRPA1基因的真核重组表达质粒已成功构建;PCR、免疫组化检测结果表明,将此重组质粒转入HEK-293T细胞可稳定表达TRPA1基因。结论成功构建了能稳定表达TRPA1通道的HEK-293T细胞株,为体外研究TRPA1生理病理功能和筛选相关TRPA1通道调节剂奠定了基础。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 细胞、菌株及试剂
•   1.2 仪器
• 2 方法
•   2.1 TRPA1基因的扩增及克隆
•   2.2 TRPA1基因真核表达质粒的构建及鉴定
•   2.3 脂质体介导质粒转染HEK-293T细胞
•   2.4 转染细胞TRPA1基因转录和蛋白表达的检测
•     2.4.1 RT-PCR检测基因的转录
•     2.4.2 免疫组化检测蛋白的表达
• 3 结果
•   3.1 TRPA1基因的RT-PCR扩增
•   3.2 T-easy-1.9和T-easy-1.5重组克隆质粒的酶切鉴定与测序
•   3.3 TRPA1真核重组表达质粒的酶切鉴定
•   3.4 TRPA1基因转录和蛋白表达的RT-PCR及免疫组化检测结果
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄娟,明露,陈艳芬,唐春萍,张玉英,杨超燕

关键词: 通道,克隆,细胞,脂质体转染,真核质粒,细胞模型

来源: 中国药理学通报 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 广东药科大学中药学院,广东药科大学广州市新药筛选模型体系构建与应用重点实验室,广东药科大学生命科学与生物制药学院

基金: 国家自然科学基金资助项目(No 81302894),广东省自然科学基金资助项目(No S2012040006768)

分类号: R329.2

页码: 440-443

总页数: 4

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