来源于Wenyingzhuangia属海洋细菌的一种β-琼胶酶的克隆表达及性质研究

论文摘要

琼胶是一种重要的海洋多糖,其寡糖被证实具有丰富的生理调节功能。该研究拟从微生物基因组出发,利用生物信息学及分子生物学技术发掘新型琼胶酶。以海洋细菌Wenyingzhuangia fucanilytica CZ1127T为实验材料,从该菌的基因组中发掘出1条潜在的GH16家族β-琼胶酶编码基因序列aga16A,通过分子克隆、异源表达及分离纯化,证实其编码的蛋白Aga16AWf具有琼胶酶活力。酶学性质及作用方式分析表明,Aga16AWf的最适反应温度（50℃）高于琼胶的凝胶温度,且该酶展现出适冷性;Aga16AWf的动力学常数Km为3.6 g/L,Kcat为287.88 s-1;该酶为内切型水解酶,最小作用底物为四糖,最小产物为二糖。Aga16AWf可作为高效制备琼胶寡糖的工具酶,该酶的获取为琼胶及琼胶寡糖的进一步研究与应用提供了良好支撑。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 生物信息学分析
•     1.2.2 Aga16A＿Wf的克隆表达
•     1.2.3 酶的分离纯化及纯度检测
•     1.2.4 β-琼胶酶酶活测定
•     1.2.5 酶学性质研究
•       1.2.5. 1 温度对Aga16A＿Wf的影响
•       1.2.5. 2 p H对Aga16A＿Wf的影响
•       1.2.5. 3 金属离子及化学试剂对Aga16A＿Wf的影响
•       1.2.5. 4 动力学常数的测定
•     1.2.6 作用方式研究
•     1.2.7 数据统计
• 2 结果与分析
•   2.1 Aga16A＿Wf的生物信息学分析
•   2.2 Aga16A＿Wf的克隆表达及功能验证
•   2.3 Aga16A＿Wf酶学性质研究
•     2.3.1 温度对酶活的影响
•     2.3.2 p H对酶活的影响
•     2.3.3 Na Cl、金属离子及化学试剂稳定性
•     2.3.4 动力学常数
•   2.4 作用方式研究
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田雪健,申晶晶,常耀光

关键词: 琼胶酶,克隆表达,琼胶寡糖

来源: 食品与发酵工业 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国海洋大学食品科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金(31671883),国家自然科学基金(U1606403)

分类号: Q78;Q936

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019584

页码: 22-28

总页数: 7

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