陈国忠(娄底市第二人民医院检验科湖南娄底417000)
【摘要】目的：观察探讨再生障碍性贫血患者治疗前后骨髓碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的变化情况，总结其临床指导意义。方法：选取我院2005年1月至2012年1月再生障碍性贫血（AA）的患者24例，设为观察组，再选取我院同期体检健康的人群30例，设为对照组，观察对比两组人群和观察组治疗前后用免疫组化方法检测bFGF、VEGF在骨髓组织中的表达情况。结果：观察组骨髓组织中bFGF、VEGF表达水平均显著低于对照组（P＜0.05），具有统计学意义；观察组治疗后骨髓组织中bFGF、VEGF表达水平均显著对比治疗前提高（P＜0.05），具有统计学意义。结论：bFGF、VEGF表达水平可以为临床监测骨髓基质的改善情况，评价疗效提高可靠、客观的临床参考依据。
【关键词】再生障碍性贫血骨髓碱性成纤维细胞生长因子血管内皮生长因子
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）02-0194-01
再生障碍性贫血(AA)是一种造血微环境和/或骨髓干细胞发生损伤，导致脂肪组织取代了红髓，但确切的发病机制尚未完全明确。而bFGF与VEGF在基质内皮细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞上具有广泛表达。本文通过观察探讨再生障碍性贫血患者治疗前后骨髓bFGF、VEGF的变化情况，总结其临床指导意义如下：
1、材料与方法
1.1一般资料选取我院2005年1月至2012年1月再生障碍性贫血（AA）的患者24例，设为观察组，男有13例，女有11例，年龄在12～47岁，中位年龄为46.5±1.7岁，皆符合《血液病诊断及疗效标准》中的AA诊断标准[1]，选取我院同期体检健康的人群30例，设为对照组，男有14例，女有16例，年龄在11～48岁，中位年龄为46.8±1.8岁，两组患者的骨髓样本皆为正常肋骨活检取出的骨髓，观察对比两组人群和观察组治疗前后用免疫组化方法检测bFGF、VEGF在骨髓组织中的表达情况。两组患者从年龄、性别的方面进行比较皆无统计学差异（P＞0.05），有可比性。
1.2方法
1.2.1标本处理所有采取的样本皆放置在3.33mol/L的甲醛溶液中进行石蜡包埋并固定，然后进行4～5μm的连续切片。
1.2.2检测方法使用的是免疫组化SP法进行检测，具体为：先对切片进行常规脱蜡至水，以3%H2O2溶液处理10min对内源性的过氧化物酶进行阻断，加入抗原修复液，置入微波炉中进行加热到2次沸腾，再使用5%的BSA封闭液处理，放置在室温下20min，随之将其加入到一抗的4°C湿盒中进行孵育过夜，使用作了生物素标记的二抗37°C中进行20min孵育，经SABC37°C下进行20min孵育，致使DAB显色后，采用苏木精进行脱水、复染、透明及封片。阴性对照为PBS代替一抗，阳性对照为已知的阳性片，对细胞质的bFGF、VEGF阳性染色定位；分别参考《血液病诊断及疗效标准》进行判断，分别对黄色、棕黄色、棕褐色界定成弱、中、强三种阳性的表达强度，依次为1、2、3分，然后依据阳性细胞的百分比将分值界定为：0分：<1%，1分：1～25%，2分：26～50，3分：51～75%，4分：>76%。将两项测定结果的得分进行相乘，计算出总分。
1.3统计学方法本研究中bFGF、VEGF表达水平的数据采用的是SPSS13.0统计学系统进行计算，数据间的比较应用均数t检验，X±S为计量单位，P＜0.05认为存在差异，有统计学意义。
2、结果
观察组骨髓组织中bFGF、VEGF表达水平均显著低于对照组（P＜0.05），具有统计学意义；观察组治疗后骨髓组织中bFGF、VEGF表达水平均显著对比治疗前提高（P＜0.05），具有统计学意义。见表1
表1两组骨髓组织中bFGF、VEGF表达水平比较[X±S，分]
组别bFGFVEGF
观察组（n=24）治疗前1.79±0.42*2.0±0.47*
治疗后8.66±0.54#7.9±0.53#
对照组（n=30）8.56±0.647.8±0.59
*为观察组与对照组比较差异明显（P＜0.05），#为观察组组内比较差异明显（P＜0.05）
3、讨论
AA通常是因多种因素影响下，引起机体免疫调节、造血微环境、骨髓造血干细胞的改变，进而导致造血功能衰竭和骨髓造血干细胞显著减少，继发的一系列综合征，以反复感染、出血、进行性贫血、全血细胞减少为主要的临床表现，病理机制表现为血管密度明显减低，提示着骨髓的造血功能发生衰竭或者减退。其中造血微环境包括有非细胞纤维成分、基质细胞、细胞因子、神经体液因子、骨髓微血管、细胞外基质、黏附因子等，其中的VEGF属于血管内皮细胞的一种特异性促肝素结合生长的因子，能够诱导体内血管新生，在维持正常血管密度的方面有重要的推动作用，因此AA患者VEGF表达与正常人比较往往处于低水平。而bFGF则属于一种同时具备促血管生成和促细胞增殖作用的细胞因子，经旁分泌的作用方式与具有高亲和力的在细胞膜上的FGF-R受体发挥其生物学的作用来实行其生理功能，以促进内皮细胞的生长及分裂，使内皮细胞的寿命得到延长，因此AA患者bFGF表达与正常人比较也处于低水平[2]。从本文中统计可见，再生障碍性贫血患者骨髓组织中bFGF、VEGF表达处于低水平，其提示的是此类患者发病后会损伤骨髓基质，经治疗后骨髓组织中bFGF、VEGF表达处于高水平，其提示的是随着骨髓造血功能逐渐恢复，受损的骨髓基质也得到逐步恢复
综上所述，bFGF、VEGF表达水平可以为临床监测骨髓基质的改善情况，评价疗效提供可靠、客观的临床参考依据。
参考文献
[1]张之南，沈悌.血液病诊断及疗效标准[M]，2版，北京：科学出版社，2006：19-23.
[2]刘双，滕清良.VEGF、bFGF在再生障碍性贫血患者骨髓中的表达及意义[J]，山东医药，2009，49（11）：44-46.