导读:本文包含了氯离子通道阻断剂论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:容积敏感性氯离子通道,Tunicamycin,内质网应激,心肌细胞
氯离子通道阻断剂论文文献综述
王琳[1]（2015）在《氯离子通道阻断剂对内质网应激诱导心肌细胞凋亡的保护作用及分子机制》一文中研究指出心肌细胞凋亡是导致多种心血管疾病发生、发展的重要细胞学基础,心力衰竭、病毒性心肌炎、心肌衰老等疾病均伴有广泛的心肌细胞凋亡发生。近年来研究发现,细胞膜内外离子通道的调控与细胞凋亡密切相关,在心肌细胞凋亡模型的研究中,应用全细胞膜片钳技术直接记录到类似于容积敏感性外向整流Cl-电流(volumesensitive outwardly rectifying chloride channel,VSOR),结合相关的生化指标,证明了阻断VSOR氯通道能有效的减轻心肌细胞损伤。目前已有VSOR氯离子通道与死亡受体(TNFR或Fas)或经线粒体介导细胞凋亡的研究报道。然而,有关VSOR氯离子通道与细胞凋亡的机制并未阐明。内质网(Endoplasmic reticulum,ER)是真核细胞内蛋白质合成、脂质生成和钙离子贮存的主要场所。内环境的稳态以及高效运转,对于维持细胞的正常功能和存活非常重要。细胞内大约1/3功能蛋白的合成、正确折迭及结构成熟在ER内发生,在合成、折迭的同时伴随大量细胞膜内外离子通道的开放或关闭,其中最重要的阴离子通道氯离子通道和内质网胞浆内钙池中Ca2+离子内外交换,掌控着内质网的物质交换平衡,维持胞质内自稳态。一旦细胞内环境稳态遭到破坏,例如缺乏分子伴侣或细胞能量,Ca2+缺乏,氧化还原环境破坏,蛋白质变异和二硫键减少,导致蛋白质无法正确折迭。真核生物细胞通过一系列适应途径对内质网功能紊乱作出快速反应,称之为内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)。研究发现内质网应激状态对于细胞存活具有双重作用。早期内质网应激分子伴侣GRP78与内质网应激跨膜感受性蛋白PERK、ATF6和IRE1α受体蛋白解离,继而激活叁个未折迭蛋白反应(unfolded protein response,UPR)的效应器,发挥UPR的促细胞存活功能;过度的ERS经独立的信号途径致细胞发生凋亡。近年来,大量的研究证实ERS参与了多种心血管疾病的发生与发展,成为心血管疾病研究的新热点。那么,ERS作为新的凋亡途径,它是否也与VSOR氯离子通道共同参与细胞凋亡的发生呢?如果参与,二者在细胞凋亡过程中是否有相互调控作用?具体机制如何呢?目前国内外尚未有报道。本研究基于我们前期发现VSOR氯通道参与了心肌细胞凋亡的过程,阻断VSOR氯通道能有效的挽救心肌细胞凋亡性死亡的基础上,拟应用衣霉素(tunicamycin,Tm)在体内和体外两个水平构建内质网应激诱导的小鼠动物心力衰竭模型和心肌细胞凋亡模型,并进一步探讨:①氯离子通道是否参与了内质网应激诱导的细胞凋亡?在内质网应激水平持续加重时,阻断VSOR氯离子通道能否有效挽救细胞凋亡的发生?②VSOR氯离子通道与内质网应激相互之间如何调控?其分子机制?为治疗心血管凋亡相关性疾病提供全新的依据和策略。研究目的:1.构建衣霉素诱导内质网应激致小鼠心力衰竭与心肌细胞凋亡模型,探讨衣霉素造模最佳的量效、时效条件;2.探讨VSOR氯通道功能变化对衣霉素诱导内质网应激及细胞凋亡的影响;3.探讨在ERS过程中VSOR氯通道对心肌细胞内质网应激的信号通路调控与分子机制。研究方法:1.实验动物及工具药物:应用8周龄C57 BL/6雄性小鼠为实验对象。应用衣霉素构建经典的内质网应激模型;氯离子通道包括非特异阻断剂DIDS和VSOR氯离子通道特异性阻断剂DCPIB。2.实验分组:①原代心肌细胞模型分组:正常对照组、Tm组(100ng/ml)、Tm(100ng/ml)+DIDS(75 μM)组、DIDS(75 μM)组、Tm(100ng/ml)+DCPIB(2 μM)组、DCPIB(2 μM)组;②在体小鼠模型分组:假手术(Sham)组、Tm组、Tm+DIDS组、DIDS组、Tm+DCPIB、DCPIB 组。3.小鼠心力衰竭模型构建:衣霉素小剂量腹腔内注射,Tm浓度为3 mg/kg,DIDS浓度为14 mg/kg,DCPIB注射浓度为5 mg/kg,造模48小时后检测心肌细胞凋亡及小鼠心脏心功能变化。4.采用MTT法检测Tm对心肌细胞存活率的影响。5.应用TUNEL法、流式细胞仪及激光共聚焦显微镜技术观察心肌细胞凋亡情况。6.应用免疫印迹法检测内质网应激分子伴侣GRP78和CHOP表达;ERS信号通路相关蛋白ATF4、p-e IF2α、e IF2α表达水平,下游信号cleaved caspase-12、p-JNK、JNK、Bcl-2、Bax、Bax线粒体转位水平以及TRB3、p-Akt、Akt的表达水平。7.应用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性。8.MQAE检测Tm对心肌细胞内氯离子浓度的影响。9.免疫荧光法检测心肌细胞GRP78/CHOP表达水平。10.实时定量PCR检测XBP 1S m RNA水平。11.应用CHOP基因沉默技术对H9C2细胞系进行转染,检测H9C2细胞总蛋白、胞浆、胞核β-catenin蛋白表达水平。采用双荧光报告系统检测β-catenin活性。研究结果:1.构建了理想的Tm诱导心肌细胞凋亡模型。衣霉素对心肌细胞存活率呈剂量及时间依赖性降低,流式结果显示Tm处理72 h细胞凋亡率最明显,达到32.4±4.1%(P<0.05,n=12),Tm100 ng/ml、作用72 h为造模最佳实验条件。衣霉素处理心肌细胞后内质网应激分子伴侣GRP78、CHOP的转录水平显着增加,24 h GRP78、CHOP m RNA表达至峰值,提示衣霉素是通过诱导内质网应激途径导致心肌细胞凋亡的发生。2.小鼠腹腔内注射衣霉素,48 h后小鼠心脏收缩功能显着降低。与假手术组Sham相比,衣霉素组左室射血分数由66.5±3.6%降至32.7±1.3%,差异有统计学意义(P<0.05,n=5)。构建了理想的衣霉素诱导心脏心力衰竭模型。3.心肌细胞存活率在衣霉素组、DIDS和DCPIB组分别是57.4±3.18%、80.4±1.2%和78.4±0.8%;心肌细胞内caspase-3活性在衣霉素组、DIDS和DCPIB组分别是88.4±3.4%、45.6±1.2%和42.1±2.6%;与衣霉素组相比,DIDS和DCPIB组在细胞存活率及caspase-3活性组间差异具有统计学意义(P<0.05,n=5),提示DIDS和DCPIB组能够显着抑制caspase-3活性及细胞凋亡的发生。4.反映细胞内氯离子浓度的MQAE荧光强度在正常对照组、衣霉素组及DIDS组分别是0.9±0.18、11.3±0.7和3.6±0.4;与正常对照组相比,衣霉素组MQAE荧光强度显着升高,两组差异具有统计学意义(P<0.05,n=5);与衣霉素组相比,DIDS组MQAE荧光强度显着下降,二组差异具有统计学意义(P<0.05,n=5)。结果提示MQAE荧光强度能够反映细胞内氯离子浓度水平,其强度与氯离子浓度呈负相关,DIDS能够显着抑制氯离子外流。5.信号分子ATF4、CHOP和p-e IF2α/e IF2α在正常对照组、衣霉素组、DIDS组和DCPIB组中的表达分别约是1、2.5、1.5和1.25倍,与正常对照组相比,衣霉素组中各指标显着增加,有统计学差异(P<0.05,n=5);而与衣霉素组相比,DIDS和DCPIB组上述指标显着降低,有统计学差异(P<0.05,n=5);提示DIDS和DCPIB组能够显着抑制ATF4、CHOP和p-e IF2α/e IF2α蛋白表达(P<0.05,n=5)。6.信号分子p-JNK、JNK通路蛋白在正常对照组、衣霉素组、DIDS组中表达,各组间相比,均无显着性差异(P>0.05,n=5),表明内质网应激信号通路相关蛋白JNK的活化不受DIDS的影响。7.XBP 1S m RNA转录水平在正常对照组、衣霉素组、DIDS组和DCPIB组中分别为1、0.5、0.85和0.88倍;与正常对照组相比,衣霉素组XBP 1S m RNA显着下降,有统计学差异(P<0.05,n=5);而与衣霉素组相比,DIDS和DCPIB组XBP1S m RNA显着增加,有统计学差异(P<0.05,n=5);提示DIDS和DCPIB能够显着增加心肌细胞内XBP 1S m RNA转录水平。8.凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值在正常对照组,衣霉素组、DIDS组中分别是1、0.6,1.25倍,与正常对照组相比,衣霉素组Bcl-2/Bax蛋白比值明显下降,有统计学差异(P<0.05,n=5);而与衣霉素组相比,DIDS组Bcl-2/Bax蛋白比值上升,二者相比差异具有统计学意义(P<0.05,n=5)。与衣霉素组相比,DIDS组cleaved caspase-12蛋白表达下降近1倍,具有统计学意义(P<0.05,n=5)。提示DIDS能够显着增加心肌细胞内Bcl-2/Bax蛋白表达水平,并可以减少内质网应激促凋亡蛋白cleaved caspase-12表达。9.Wnt相关蛋白β-catenin在正常情况下细胞核内呈现一定表达水平而发挥功能,而衣霉素处理24 h后,细胞核内β-catenin水平显着下降,差异具有统计学意义(P<0.05,n=5),提示衣霉素导致β-catenin核转位明显减少;si CHOP时Topflash荧光读数是阴性组及正常对照组的3倍,差异具有统计学意义(P<0.05,n=5)。提示干涉CHOP基因时β-catenin活性显着升高,表明CHOP对Wnt蛋白具有调控作用。10.Topflash荧光素酶报告系统观察β-catenin活性水平,荧光读数在对照组、衣霉素组、si CHOP、DIDS和DCPIB分别是1、0.5、0.8,0.9和0.85。与正常对照组相比,衣霉素组β-catenin活性显着降低,具有统计学意义(P<0.05,n=5);而与衣霉素组相比,si CHOP、DIDS、DCPIB组β-catenin活性显着升高,差异具有统计学意义(P<0.05,n=5),提示DIDS和DCPIB能够抑制衣霉素诱导的Wnt活性下调。11.通过si CHOP转染预处理并衣霉素干预,分别检测β-catenin活性在阴性对照组、衣霉素组、DIDS组和DCPIB组的变化,结果显示DIDS或DCPIB处理后,对衣霉素诱导的β-catenin活性降低无明显改善(P>0.05,n=5),从另一方面提示阻断CHOP后,DIDS或DCPIB丧失了对β-catenin活性的调控作用,进一步反映Wnt是CHOP下游分子。特别是使用Wnt信号通路抑制剂s FRP后,DIDS或DCPIB同样失去了对β-catenin活性的调节,差异有统计学意义(P<0.05,n=5)。提示沉默CHOP信号通路后或Wnt信号通路直接阻断后,氯离子通道阻断剂不能调控β-catenin活性的表达。12.心肌细胞存活率在衣霉素组、si CHOP、DIDS和DCPIB组分别是56.8±7.23%、74.4±5.2%、76.6±3.1%和77.8±5.8%;与衣霉素组相比,si CHOP、DIDS和DCPIB组在细胞存活率显着增加,组间差异具有统计学意义(P<0.05,n=12)。而s FRP抑制Wnt通路后,导致si CHOP、DIDS或DCPIB丧失了细胞保护作用。提示si CHOP、DIDS和DCPIB组能够显着抑制衣霉素导致的细胞凋亡,其保护作用可被s FRP阻断,说明Wnt信号通路是CHOP下游的调控分子。结论:1.衣霉素可通过诱导内质网应激导致心肌细胞凋亡的发生,进一步在小鼠体内证实衣霉素诱导内质网应激可明显损伤心肌收缩功能;氯通道阻断剂DIDS、DCPIB能够有效地减轻衣霉素诱导内质网应激性心肌细胞凋亡及改善在体心脏受损的心功能。2.衣霉素是通过调控p-e IF2α/ATF4和XBP1蛋白通路,增加了促凋亡基因CHOP的生成而非JNK通路诱导内质网应激反应。DIDS、DCPIB能够通过抑制该途径减少了促凋亡基因CHOP的生成;同时DIDS也能够显着增加心肌细胞内Bcl-2/Bax蛋白表达水平,并可以减少内质网应激促凋亡蛋白caspase-12表达,达到保护心肌细胞的作用。3.CHOP信号通路对Wnt信号通路有明显的调控作用,Wnt通路是其下游分子,DIDS或DCPIB组能够显着抑制衣霉素对Wnt相关蛋白β-catenin的下调作用,该作用可被s FRP所阻断。氯离子通道阻断剂发挥抗凋亡的保护效应是通过CHOP/Wnt信号通路介导的。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
夏跃胜,王琳,夏桐,许荣,肖远[2]（2015）在《氯离子通道阻断剂DCPIB抑制自噬减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤》一文中研究指出目的观察氯离子通道阻断剂茚满酮复合物(DCPIB)对在体大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌损伤的机制及心脏功能的影响。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只随机分为6组:假手术组、I/R组、I/R+雷帕霉素(RAPA,4 mg/kg)组、I/R+DCPIB(10 mg/kg)组、I/R+3-甲基腺嘌呤(3MA,1 mg/kg)组和I/R+RAPA+DCPIB组。建立缺血30 min/再灌注24 h的大鼠I/R模型,于再灌注前10 min,经腹腔分别注射DCPIB、RAPA和3MA。检测再灌注前后血清肌酸激酶(CK)和肌酸激酶-同功酶(CK-MB)、核因子(NF)-κB和肿瘤坏死因子(TNF)-α活性,免疫组织化学检测自噬基因微管相关蛋白1的轻链3(LC3)表达,并记录心脏血流动力学指标。结果 1与假手术组比较,I/R组自噬、炎症强度明显增加,心脏功能下降(P<0.05),RAPA组自噬进一步增加,心肌损害加重,而自噬抑制剂3MA可明显的抑制I/R和RAPA组心肌组织的自噬水平,减轻心肌损伤(P<0.05);2与I/R组相比,DCPIB可明显抑制心肌损伤指标CK、CK-MB水平(P<0.05),抑制受损心肌组织中TNF-α、NF-κB活性、炎性细胞的浸润及LC3的表达(P<0.05);DCPIB可明显改善心脏的血流动力学指标:左心室舒张末期压(LVEDP)下降,左室收缩压(LVSP)、左室内压上升的最大速率(+dp/dtmax)和左室内压下降的最大速率(-dp/dtmax)增加(P<0.05);3与I/R+RAPA组相比,DCPIB同样抑制RAPA诱发心肌炎症和自噬水平增加,改善心脏功能。结论 DCPIB可通过抑制心肌组织的自噬和炎性反应,减轻心脏I/R损伤。(本文来源于《心脏杂志》期刊2015年05期）
郭筱王[3]（2014）在《氯离子通道阻断剂DIDS对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响》一文中研究指出随着我国人口的老龄化及人群生活方式的改变，糖尿病在我国的发病率逐年升高，2010年流行病学研究显示：糖尿病患病人数高达9240万，成为我国重大的公共健康问题。调查显示，糖尿病患者70％以上死于心血管系统疾病，是非糖尿病人群心血管疾病病死率的2～4倍。因此，糖尿病相关的心血管并发症已成为糖尿病患者死亡的主要原因。目前，国内外学者认为糖尿病是心血管疾病的独立危险因素。其中高血糖毒性是损害心脏及血管的主要因素，其造成损伤的程度与高血糖持续时间及血糖的水平密切相关。研究显示，高血糖是导致糖尿病患者心血管损伤最重要的启动因素，长期高糖刺激不仅可导致机体肾素-血管紧张素-醛固酮系统（renin-angiotensin-aldosterone system, RAAS）的激活，活性氧簇（reactive oxygenspecies, ROS）的产生，晚期糖基化终产物（advanced glycation end products, AGEs）及其受体（receptor for advanced glycation end products, RAGE）的增加，还可以激活炎性反应以及内质网应激反应，从而依赖多种途径加速心肌细胞及血管内皮细胞的损伤和死亡。因此，探索高糖损害心肌细胞及血管的新机制，为糖尿病相关心血管并发症的预防和治疗提供新的靶点及措施是目前研究的热点。氯离子通道在全身各脏器及细胞广泛表达。研究显示氯离子通道不仅具有调节心肌细胞容积，维持细胞静息膜电位，调节细胞内pH值，影响细胞增殖与分化等多种生物学功能，还参与了RAAS系统激活和氧化应激、内质网应激、细胞凋亡、炎性反应等重要的细胞病理生理过程。其中氯离子通道与细胞凋亡的关系研究是该领域的热点问题。相关的实验结果发现：在细胞凋亡过程中必然出现细胞的皱缩，这一现象被称之为凋亡性容积减少（apoptotic volume decrease,AVD）。电生理数据显示该过程伴随着钾、氯通道负载的离子外流，氯通道阻断剂能够有效抑制受损细胞凋亡的发生。我们前期的研究发现在通过死亡受体途径、线粒体途径及内质网途径诱导的心肌细胞凋亡模型中，容积敏感外向整流（volume-sensitive outwardly rectifying, VSOR）氯离子通道参与了心肌细胞的损伤过程，阻断其通道可达到保护心肌细胞的作用。那么，在糖尿病中高糖诱发的心肌损伤性机制中是否也有氯离子通道的参与？氯离子通道阻断剂对其影响如何？基于此假设，本实验拟在建立高糖诱导心肌细胞凋亡模型的基础上，通过检测细胞内氯离子浓度、细胞存活率、ROS水平及凋亡相关指标变化探讨氯离子通道对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响及ROS对其调控机制。目的：（1）原代培养乳鼠心肌细胞，构建高糖诱导的凋亡性损伤模型，确定实验高糖的最佳作用浓度及时间。（2）检测细胞内氯离子浓度变化，观察高糖对细胞氯离子通道的影响，探讨氯离子通道阻断剂DIDS对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响。（3）检测高糖对ROS的影响，探讨ROS与氯通道的关系，同时检测氯离子通道阻断剂DIDS对高糖诱导的心肌细胞中ROS水平的影响。方法：（1）原代培养乳鼠心肌细胞及构建高糖损伤模型：常规获取SD大鼠新生乳鼠（0-3d）心肌细胞，应用差速贴壁法纯化心肌细胞，培养48h后进行实验。配制葡萄糖浓度为5.5、11、22、33、44mmol/L的DMEM培养基，分别处理0、24、48、72和96h，摸索高糖损伤的最佳实验条件。（2）实验分组A及检测：分正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖+DIDS组及DIDS组。氯离子荧光探针（MQAE）检测细胞内氯离子浓度的变化，MTT法检测细胞存活率。（3）实验分组B及检测：分正常对照组、高糖组、高糖+DIDS组及DIDS组。流式细胞术及TUNEL凋亡检测试剂盒检测各组心肌细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法Western-blot检测凋亡中pro-caspase-3蛋白的表达，Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性，荧光探针（DHE）检测超氧化物阴离子水平。（4）实验分组C及检测：分正常对照组、外源性加入ROS（H2O2）组、高糖组及高糖+N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine, NAC)（ROS清除剂）组，利用氯离子荧光探针MQAE检测各组心肌细胞内氯离子浓度变化。结果：（1）心肌细胞凋亡模型条件：按葡萄糖浓度为5.5、11、22、33、44mmol/L的DMEM培养基分别处理0、24、48、72和96h后，心肌细胞存活率呈浓度及时间依赖性降低，差异有统计学意义（P＜0.05, n=6）。流式细胞术证实高糖诱导的心肌细胞损伤以凋亡形式为主。提示：33mmol/L葡萄糖作用72h，心肌细胞存活率为73.2%±4.1%，以此浓度和时间作为最佳的实验条件。（2）高糖对心肌细胞内氯离子浓度的影响：MQAE检测显示，正常对照组与甘露醇组细胞内氯离子浓度无统计学差异（P＞0.05, n=5）；高糖组与正常对照组比较，细胞内氯离子浓度显着下降（P＜0.05, n=5）；高糖+DIDS组与高糖组比较，细胞内氯离子浓度明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）。（3）高糖对心肌细胞存活率的影响：MTT检测显示，正常对照组与甘露醇组心肌细胞存活率无统计学差异（P＞0.05, n=6）；高糖组与正常对照组比较，心肌细胞存活率皆显着下降，差异有统计学意义（P＜0.05, n=6）；高糖+DIDS组与高糖组相比心肌细胞存活率显着升高，差异有统计学意义（P＜0.05, n=6）。（4） DIDS对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响：流式细胞计数及TUNEL染色检测显示，高糖组与正常对照组相比，细胞凋亡率明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）；高糖+DIDS组与高糖组相比，细胞凋亡率明显减少，具有统计学差异（P＜0.05, n=5）。高糖组与正常对照组相比pro-caspase-3蛋白表达明显减少，具有统计学差异（P＜0.05, n=5）；高糖+DIDS组与高糖组相比pro-caspase-3蛋白表达明显增多，差异具有统计学意义（P＜0.05, n=5）。高糖组与正常对照组相比Caspase-3活性明显升高，具有统计学差异（P＜0.05,n=5）；高糖+DIDS组与高糖组相比Caspase-3活性明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05, n=5）。（5） ROS对心肌细胞内氯离子浓度的影响：MQAE检测显示，H2O2组和高糖组与正常对照组相比，心肌细胞内氯离子浓度均显着下降，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）。高糖+NAC组中细胞内氯离子浓度相对于高糖组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）。（6） DIDS对高糖诱导的心肌细胞内ROS水平的影响：超氧化物荧光探针（DHE）检测显示，高糖组与正常对照组相比，心肌细胞内ROS生成显着增加，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）；而高糖+DIDS组与高糖组相比，心肌细胞内ROS生成显着减少，差异有统计学意义（P＜0.05, n=5）。结论：（1）高糖诱导的心肌细胞凋亡过程中伴有细胞内氯离子的外流，氯离子通道阻断剂DIDS可抑制受损心肌细胞内氯离子的外流，维持了细胞内环境的稳态。（2）氯离子通道阻断剂DIDS能明显抑制高糖诱导的心肌细胞凋亡性死亡，达到保护心肌的作用。（3）高糖刺激产生大量ROS，ROS介导了心肌细胞内氯离子外流；DIDS阻断氯离子通道后，心肌细胞内ROS生成减少，提示ROS与氯离子通道之间可能存在交互调控的作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2014-05-01）
沈明志[4]（2011）在《氯离子通道阻断剂对Tunicamycin诱导心肌细胞凋亡的影响》一文中研究指出凋亡(apoptosis),也可以称为细胞程序性死亡(programmed cell death, PCD)。诱导凋亡的途径包括死亡受体和线粒体途径;而内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导的细胞凋亡逐渐被认识,其在多种心血管疾病的发生和发展过程中发挥着重要作用。因此抑制ERS,减轻凋亡可能是治疗心血管疾病的新策略。凋亡的早期阶段伴随着细胞持续性的皱缩,即凋亡性容积减小(apoptotic volume decrease,AVD)。大量的研究表明,Cl-外流以及伴随的水外流导致的AVD是细胞凋亡的重要前提,并且早于caspases的激活;而阻断氯离子通道减轻了AVD,并且可以抑制细胞凋亡。本实验拟在衣霉素通过ERS途径诱导心肌细胞凋亡的模型上,观察氯通道阻断剂DIDS对心肌细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。研究目的1.原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,应用经典的内质网应激凋亡诱导剂Tunicamycin(Tm)构建心肌细胞凋亡模型。2.Tm诱导心肌细胞凋亡过程中,观察氯离子通道阻断剂DIDS对心肌细胞存活及凋亡的影响。3.初步探讨氯离子通道阻断剂DIDS对Tm诱导的心肌细胞凋亡的影响机制。实验方法1.实验分为阴性对照组,阳性对照组(Tm组)及实验组(Tm+DIDS),以及单独应用DIDS组。2.四唑盐(MTT)比色法观察心肌细胞的存活率;流式细胞术(Anexin v/PI)反映心肌细胞凋亡程度。3.免疫印迹方法测定Tm诱导心肌凋亡过程中靶分子GRP78、CHOP蛋白水平的变化。4.氯离子通道阻断剂DIDS干预对Tm处理的心肌细胞存活率、细胞凋亡率及伴侣分子GRP78、信号分子CHOP水平的变化。实验结果1.与阴性对照组相比,衣霉素(Tm)组心肌细胞存活率显着下降,并呈现与Tm的剂量与作用时间正相关(P<0.05,n=12);Tm的最佳诱导浓度为100ng/ml,作用时间为72h。2.通过MTT比色法和流式细胞术来判断心肌细胞死亡的性质。当Tm浓度为100ng/ml,作用72h时,心肌细胞存活率和凋亡率分别为57.4±3.2%(n=12),25.9±5.8%(n=6)。提示Tm导致心肌细胞死亡的主要方式是凋亡性死亡。3.Tm作用于心肌细胞后,内质网应激蛋白GRP78和CHOP表达于6h开始增加,24h达到峰值,随后呈下降趋势。4.与Tm组相比,Tm加DIDS组的细胞存活率较Tm组显着增加,二者分别是57.4±3.2%和80.4%±4.2%(P<0.05,n=12)。5.与Tm组相比,Tm加DIDS组的细胞凋亡率较Tm组显着降低,二者分别是25.9±5.8%和14.3%±2.9%(P<0.05,n=6)。6.Tm处理心肌细胞24h后,细胞内的GRP78、CHOP水平分别为阴性对照组的3倍和6.5倍,有显着的统计学差异(P<0.05,n=6)。而Tm加DIDS共同处理心肌细胞时,细胞内的GRP78、CHOP表达水平显着降低(P<0.05,n=6)。结论1.成功构建Tm诱导心肌细胞内质网应激凋亡模型,Tm的最佳诱导浓度为100ng/ml,作用时间为72h。2.氯离子通道阻断剂DIDS能够显着抑制Tm诱导的心肌细胞凋亡的发生,具有明显的减轻内质网应激性心肌细胞的损伤。3.氯离子通道阻断剂DIDS明显抑制Tm诱导心肌细胞凋亡的主要机制可能与抑制GRP78、CHOP水平的表达,减轻了内质网应激发生有关。(本文来源于《第四军医大学》期刊2011-04-01）
常全忠,张淑玲,蔡仕宁,尹金宝[5]（2010）在《氯离子通道阻断剂对大鼠离体海马神经元凋亡的影响》一文中研究指出目的通过观察氯离子(Cl-)通道阻断剂对一氧化氮(NO)供体3-吗啉斯德酮胺(SIN-1)诱导的大鼠离体海马神经元凋亡的效应,探讨Cl-通道在缺血性脑损伤中的作用。方法离体培养12d的SD大鼠海马神经元,随机分为正常对照组、SIN-1处理组、SIN-1处理后和Cl-通道阻断剂组,对各组神经元分别在相应的时间点进行Hoechst荧光染色观察凋亡细胞数和MTT实验定量检测神经元的存活率。结果SIN-1能明显诱导神经元凋亡(P<0.05),SITS和DIDS呈剂量依赖性地抑制NO诱导的神经元损伤,提高神经元的存活率,与SIN-1组相比差异显着(P<0.05)。结论Cl-通道阻断剂对NO诱导的大鼠海马神经元凋亡有一定的保护作用。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2010年09期）
康劲松,郑花,陈野,孙连坤[6]（2008）在《氯离子通道阻断剂影响顺铂对人红白血病耐药细胞作用机制的实验研究》一文中研究指出目的:耐药性的产生是影响化疗药物疗效的最重要的因素之一。目前研究表明多药耐药的机制除与ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transponer)超家族的成员如P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related proteins,MRP)等促进药物外排有关,还与细胞凋亡不足密切相关。因此本研究的目的在于探讨氯离子通道阻断剂NPPB(5-硝基-2,3-苯丙胺基苯甲酸盐)对顺铂(DDP)诱导的人红白血病耐阿霉素耐药细胞株RK562细胞损伤中的作用。方法:应用MTT法检测RK562细胞的生存率;RT-PCR检测BAX、MDR、MRP、及CIC-3的mRNA表达;Western blotting方法检测Bcl-2、P65、MDR的蛋白水平。结果:50μmol/L NPPB对RK562细胞无明显损伤。而顺铂组与对照组相比,存活率明显降低,MDR、MRP、ClC-3 mRNA及MDR、Bcl-2蛋白表达降低,Bax mRNA表达升高。顺铂与NPPB合加组与顺铂组相比,存活率明显升高,MDR、MRP、ClC-3 mRNA及MDR、Bcl-2蛋白表达升高,Bax mRNA表达降低。结论:NPPB对顺铂(DDP)诱导的人红白血病耐阿霉素耐药细胞株RK562细胞损伤具有拮抗作用,其机制可能与其上调RK562细胞MDR及MRP的表达,促进顺铂的外排,增强RK562多药耐药性有关;此外,可能还与其抗凋亡的作用密切相关。(本文来源于《中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议论文汇编》期刊2008-11-01）
刘安恒[7]（2008）在《氯离子通道阻断剂对STS诱导的心肌细胞凋亡的影响及信号转导》一文中研究指出细胞凋亡(apoptosis)参与了多种心血管疾病的发生及发展,如心肌梗死、心力衰竭及心律失常。心肌细胞为终末分化细胞,不具有分化潜能,因此抑制心肌细胞凋亡,保护心肌细胞正常功能对治疗多种心血管疾病有重要意义。凋亡又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD),是由基因控制的细胞主动死亡形式,伴有一系列的生化及形态学改变。细胞凋亡早期细胞体积减小即凋亡性容积减小(apoptotic volume decrease,AVD),是凋亡的一个重要的形态学特征。近年来,大量证据提示AVD及激活的离子通道在细胞凋亡过程中起着重要的作用,是细胞凋亡的重要前提;在多种细胞,通过阻断激活的离子通道及细胞体积减小可以抑制细胞凋亡。氯离子是机体内最重要,最丰富的阴离子,膜片钳证实细胞凋亡伴有氯离子电流激活,阻断激活的氯离子电流能抑制减轻细胞凋亡,但是其内在的信号机制尚不清楚。因此本实验的目的是在建立心肌细胞凋亡模型的基础上,观察氯离子通道阻断剂对细胞存活及凋亡的影响,并首次探讨了非特异性氯离子通道阻断剂DIDS对细胞内促存活信号通路PI3K/Akt及下游分子eNOS/NO(nitric oxide,NO),Bcl-2/Bax的影响。研究目的1.原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,经典的线粒体途径凋亡诱导剂staurosporine(STS)建立心肌细胞凋亡模型,观察氯离子通道阻断剂对心肌细胞存活及凋亡的影响。2. STS诱导心肌细胞凋亡过程中,氯离子通道阻断剂DIDS对细胞存活信号通路PI3K/Akt及其下游分子eNOS/NO的影响。3.氯离子通道阻断剂DIDS对STS诱导心肌细胞凋亡的Bcl-2家族Bcl-2/Bax的影响。实验方法1.实验设立阴性对照组(正常对照组),阳性对照组(诱导凋亡组)及实验组(给予不同的氯离子通道阻断剂)。2. STS诱导心肌细胞凋亡,相差显微镜观察细胞形态学变化,Hoechst-33258染色观察细胞核的形态学变化。3.四唑盐(MTT)比色法观察心肌细胞的存活率;底物酶解荧光法检测caspase-3活性,反映心肌细胞的凋亡程度;DNA“梯”状条带(DNA ladder)检测心肌细胞凋亡的发生。4.氯离子通道阻断剂DIDS,NPPB及phloretin对STS处理心肌细胞存活率与凋亡的影响。5.免疫印迹方法观察氯离子通道阻断剂DIDS对细胞促存活信号通路PI3K/Akt及其下游分子eNOS/NO的影响;硝酸还原酶法测定细胞无酚红培养上清NO水平。6.免疫印迹方法观察DIDS对Bcl-2/Bax表达的影响;免疫荧光双染色观察DIDS对STS处理的心肌细胞Bax分布的影响,免疫印迹法半定量DIDS对细胞线粒体及胞质片断Bax水平的影响。实验结果1. STS浓度依赖性,时间依赖性的降低了原代培养心肌细胞的存活率,升高了caspase-3活性;4μmol/L STS处理8 h细胞存活率为42.9%,caspase-3活性为4.52,与正常对照组比较有显着性差异(P<0.01 vs. control),DNA琼脂糖凝胶电泳有明显的DNA-ladder形成。正常心肌细胞,形态规则,搏动规律,而STS诱导的凋亡细胞,明显皱缩变圆,细胞触角减少,细胞间距增加,大多数细胞停止搏动。Hoechst-33258染色对照组心肌细胞核呈圆形或者椭圆形,染色均匀;STS处理细胞,大多数细胞核不规则,固缩,有明显的核分叶和碎裂等典型的凋亡特征。说明4μmol/L STS诱导8 h可以成功建立心肌细胞凋亡模型。2. STS诱导凋亡的同时应用氯离子通道阻断剂250μmol/L DIDS,100μmol/L NPPB,及30μmol/L phloretin,细胞存活率分别为77.4%,70.1%及74.4%,与阳性对照组比较有显着性差异(P<0.01 vs. control);caspase-3活性较STS组明显降低,且无明显的DNA“梯”状条带形成;细胞形态较阳性对照组规则,Hoechst-33258染色阳性细胞明显减少。说明氯离子通道阻断剂可以明显抑制细胞凋亡,促进细胞存活。3.氯离子通道阻断剂可以明显抑制STS诱导的心肌细胞凋亡,我们首次探讨了非特异性的氯离子通道阻断剂DIDS抑制细胞凋亡的分子学机制。蛋白免疫印迹发现在正常对照组,STS诱导凋亡组及DIDS与STS同时处理组,Akt的表达无明显变化;但是与STS阳性对照组比较,同时应用DIDS明显升高了p-Akt水平(P<0.01 vs. STS),LY294002预处理可以完全抑制p-Akt的升高,而且可以阻断DIDS提高细胞存活率、降低caspase-3活性的作用;但是单独应用DIDS在1,2,4及8 h四个时间点,p-Akt与对照组无明显变化,说明DIDS并不能直接激活细胞内PI3K/Akt信号。提示在STS诱导的心肌细胞,DIDS发挥抗凋亡作用可能与PI3K/Akt信号通路激活有关。4. STS诱导细胞凋亡明显降低了细胞内eNOS及p-eNOS的水平,同时加入DIDS提高了eNOS,p-eNOS的水平(P<0.01 vs. STS),LY294002预处理可以完全抑制DIDS的上述作用;eNOS通过促进NO生成对细胞起重要保护作用,为进一步证明eNOS在DIDS促细胞存活中的作用,硝酸还原酶法检测了细胞培养上清NO水平,结果与p-eNOS一致,STS诱导细胞凋亡,NO水平较正常对照组明显降低,当同时应用DIDS则明显升高了细胞上清NO水平(P<0.01 vs. STS),应用LY294002预处理可以完全阻断升高的NO,非特异性NOS阻断剂L-NAME预处理也可以清除DIDS升高的NO水平,但仅部分阻断了DIDS的细胞保护作用(细胞存活率,caspase-3活性及DNA-ladder形成)。提示PI3K/Akt信号下游分子eNOS/NO升高部分参与了DIDS的抗凋亡作用。5. DIDS对STS诱导心肌凋亡的Bcl-2,Bax表达无明显影响。提示DIDS并非通过调节Bcl-2/Bax表达发挥其抗凋亡作用。6.应用免疫荧光双染方法,激光共聚焦显微镜显示,正常细胞促凋亡蛋白Bax主要分布在细胞质,STS诱导心肌细胞凋亡过程中伴有明显的Bax蛋白线粒体转位;DIDS可以抑制STS诱导的Bax线粒体转位,而且可能与激活的PI3K/Akt信号通路存在内在的联系,PI3K的特异性阻断剂LY294002预处理,细胞重新呈现Bax线粒体转位。进一步通过分析细胞线粒体及胞质片段Bax蛋白的水平,结果显示正常细胞线粒体Bax处于较低水平;STS诱导细胞凋亡线粒体Bax的水平明显升高,说明细胞凋亡过程中伴有明显的Bax线粒体转位;STS诱导细胞同时应用DIDS可以明显抑制线粒体Bax水平的升高,且PI3K的特异性阻断剂LY294002预处理可以清除DIDS抑制Bax转位的作用。进一步提示DIDS可能通过激活PI3K/Akt信号通路明显抑制STS诱导的Bax蛋白线粒体转位,也参与了DIDS的抗凋亡效应。结论1.氯离子通道阻断剂DIDS,NPPB及phloretin,能够抑制STS诱导的心肌细胞凋亡,提高细胞存活率。2. DIDS通过激活PI3K/Akt信号通路发挥其抑制STS诱导的心肌细胞凋亡的作用;并首次证实激活的PI3K/Akt信号通路下游分子eNOS/NO部分参与了DIDS的抗凋亡、保护细胞的效应。3.首次证明DIDS明显抑制了STS诱导心肌细胞凋亡过程中促凋亡蛋白Bax由胞质向线粒体的转位,且可以被特异性PI3K阻断剂LY294002预处理完全阻断。提示DIDS抑制Bax蛋白线粒体转位与激活的PI3K/Akt信号通路有关,也参与了DIDS的细胞保护作用。(本文来源于《第四军医大学》期刊2008-04-01）
石璐,苏静,康劲松,张宏宇,孔晓霞[8]（2007）在《氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂诱导C6细胞损伤的作用》一文中研究指出目的探讨氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂(DDP)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤中的作用。方法应用MTT法检测C6细胞的生存率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax及ClC-3的mRNA表达;Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、Cyt-C的蛋白水平。结果与对照组相比,NPPB组C6细胞生存率、Bax/Bcl-2比值、ClC-3 mRNA及Cyt-C蛋白表达无明显变化;DDP组C6细胞生存率明显下降(P<0.05),ClC-3 mRNA表达降低,Bax/Bcl-2比值及Cyt-C蛋白表达明显增高。而DDP与NPPB联合组C6细胞生存率与DDP组相比明显增高,ClC-3 mRNA表达增高,Bax/Bcl-2比值呈下降趋势,Cyt-C蛋白表达明显降低。结论氯离子通道阻断剂NPPB可能通过降低Bax/Bcl-2比值,抑制Cyt-C的释放而拮抗DDP对肿瘤细胞增殖的抑制作用。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2007年10期）
王英姿,刘政江,李丽,范平,司军强[9]（2006）在《氯离子通道阻断剂对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞兴奋性接头电位的影响》一文中研究指出血管平滑肌细胞膜上存在氯离子通道,不仅参与调节平滑肌细胞的肌原性紧张,而且参与多种血管床的神经平滑肌细胞之间的信息传递,但氯离子通道及其阻断剂对耳蜗螺旋动脉(spiralmodiolarartery,SMA)平滑肌细胞兴奋性接头电位(excitatoryjunctionpotential,EJP)是否有影响,尚不清楚。本实验运用细胞内微电极记录技术,在豚鼠耳蜗SMA离体标本上,研究氯通道阻断剂(niflumicacid,NFA;indanyloxyaceticacid94,IAA-94;disodium4,4’-diisothiocyanatostilbene-2,2’-disulfonate,DIDS)对去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)引起SMA平滑肌细胞去极化反应和平滑肌细胞EJP的影响。结果显示,多数SMA平滑肌细胞在适宜的刺激下,通过神经兴奋传递产生EJP(75%,n=49)。在联合使用a1(prazosin,0.1~1μmol/L),a2(idazoxan,0.3~1μmol/L)和P2x(PPADS,10~100μmol/L)受体拮抗剂时,所产生的EJP幅值仅有30%~80%被抑制。在使用上述拮抗剂的基础上,NFA(10~1000μmol/L)能进一步抑制EJP,而且缩短EJP的时程。减少细胞外氯离子浓度(由135.6mmol/L减少到60mmol/L),在同样刺激强度下激起的EJP的幅度和时程均增加,低氯的这一作用可被IAA-94和DIDS所反转。NFA和IAA-94也可进一步抑制a1、a2和b受体拮抗剂联合使用不能消除的NE(1~50μmol/L)引起的去极化反应。结果提示:NE可能通过激活一类非a、非b肾上腺能受体(可能属于g肾上腺能受体)引起氯离子通道开放,增加氯离子电导,调节耳蜗SMA平滑肌细胞的生理活动。(本文来源于《生理学报》期刊2006年05期）
莫碧文,曾锦荣,李国坚,黄文新,于方[10]（2006）在《氯离子通道阻断剂对大鼠低氧性肺动脉高压的影响》一文中研究指出目的:探讨氯离子通道阻断剂叁苯氧胺(tamoxifen,TAM)对大鼠低氧性肺动脉高压的治疗效果。方法:雄性Wistar大鼠96只,随机分为:(1)治疗组(缺氧+叁苯氧胺,H/Q):大鼠在常压缺氧(10%,每日8 h)箱内饲养,缺氧前3 d开始灌胃叁苯氧胺0.4 mg.kg-1.d-1,每日1次;(2)缺氧组(H组):每日给予相等量的生理盐水,余同治疗组;(3)正常对照组(C组)。测定各组大鼠d 4、7、14、21右心室/(左心室+室间隔)厚度,多导生理记录仪记录肺动脉平均压(mPAP),图像分析仪测定血管管壁面积占管总面积的百分比(WA/TA)和血管管腔面积占管总面积的百分比(VA/TA)。结果:缺氧组d 7mPAP开始升高,d 21达高峰,治疗组同时间点明显低于缺氧组;缺氧组RV/(LV+S)d 14开始上升,d 21达高峰,治疗组同时间点明显低于缺氧组;缺氧组d 21的血管管壁面积占管总面积的百分比(WA/TA)显着高于d 21治疗组(P<0.05)。而缺氧组d 21的血管管腔面积占管总面积的百分比(VA/TA)显着低于d 21治疗组(P<0.05)。结论:氯离子通道阻断剂叁苯氧胺可降低缺氧所致大鼠肺动脉压升高、改善右心室肥厚及肺小动脉增厚,对低氧性肺动脉高压有一定的治疗作用。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2006年06期）
氯离子通道阻断剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察氯离子通道阻断剂茚满酮复合物(DCPIB)对在体大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)心肌损伤的机制及心脏功能的影响。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠36只随机分为6组:假手术组、I/R组、I/R+雷帕霉素(RAPA,4 mg/kg)组、I/R+DCPIB(10 mg/kg)组、I/R+3-甲基腺嘌呤(3MA,1 mg/kg)组和I/R+RAPA+DCPIB组。建立缺血30 min/再灌注24 h的大鼠I/R模型,于再灌注前10 min,经腹腔分别注射DCPIB、RAPA和3MA。检测再灌注前后血清肌酸激酶(CK)和肌酸激酶-同功酶(CK-MB)、核因子(NF)-κB和肿瘤坏死因子(TNF)-α活性,免疫组织化学检测自噬基因微管相关蛋白1的轻链3(LC3)表达,并记录心脏血流动力学指标。结果 1与假手术组比较,I/R组自噬、炎症强度明显增加,心脏功能下降(P<0.05),RAPA组自噬进一步增加,心肌损害加重,而自噬抑制剂3MA可明显的抑制I/R和RAPA组心肌组织的自噬水平,减轻心肌损伤(P<0.05);2与I/R组相比,DCPIB可明显抑制心肌损伤指标CK、CK-MB水平(P<0.05),抑制受损心肌组织中TNF-α、NF-κB活性、炎性细胞的浸润及LC3的表达(P<0.05);DCPIB可明显改善心脏的血流动力学指标:左心室舒张末期压(LVEDP)下降,左室收缩压(LVSP)、左室内压上升的最大速率(+dp/dtmax)和左室内压下降的最大速率(-dp/dtmax)增加(P<0.05);3与I/R+RAPA组相比,DCPIB同样抑制RAPA诱发心肌炎症和自噬水平增加,改善心脏功能。结论 DCPIB可通过抑制心肌组织的自噬和炎性反应,减轻心脏I/R损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
氯离子通道阻断剂论文参考文献
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[2].夏跃胜,王琳,夏桐,许荣,肖远.氯离子通道阻断剂DCPIB抑制自噬减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤[J].心脏杂志.2015
[3].郭筱王.氯离子通道阻断剂DIDS对高糖诱导的心肌细胞凋亡的影响[D].第四军医大学.2014
[4].沈明志.氯离子通道阻断剂对Tunicamycin诱导心肌细胞凋亡的影响[D].第四军医大学.2011
[5].常全忠,张淑玲,蔡仕宁,尹金宝.氯离子通道阻断剂对大鼠离体海马神经元凋亡的影响[J].中国老年学杂志.2010
[6].康劲松,郑花,陈野,孙连坤.氯离子通道阻断剂影响顺铂对人红白血病耐药细胞作用机制的实验研究[C].中国病理生理学会受体和信号转导专业委员会暨消化专业委员会联合学术会议论文汇编.2008
[7].刘安恒.氯离子通道阻断剂对STS诱导的心肌细胞凋亡的影响及信号转导[D].第四军医大学.2008
[8].石璐,苏静,康劲松,张宏宇,孔晓霞.氯离子通道阻断剂NPPB对顺铂诱导C6细胞损伤的作用[J].中国实验诊断学.2007
[9].王英姿,刘政江,李丽,范平,司军强.氯离子通道阻断剂对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞兴奋性接头电位的影响[J].生理学报.2006
[10].莫碧文,曾锦荣,李国坚,黄文新,于方.氯离子通道阻断剂对大鼠低氧性肺动脉高压的影响[J].中国临床药理学与治疗学.2006
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