基于CRISPR/Cas9加工番茄α-Man突变体的构建

论文摘要

为培育成熟果实软化程度低,货架期长的番茄植株,以加工番茄甘露糖苷酶基因（α-Man）为编辑对象,设计由番茄U6启动子驱动、长21 bp的guide RNA（gRNA）指导hCas9核酸酶,靶向编辑α-Man的第1个外显子。首先构建基于CRISPR/Cas9系统的植物表达载体,并通过农杆菌介导的遗传转化获得加工番茄转基因株系,然后取转基因番茄叶片基因组DNA,利用限制性内切酶法结合PCR扩增对α-Man编辑位点附近的DNA片段进行检测及测序分析。结果表明,14株转基因番茄植株有2株检测到突变现象。α-Man突变体TA克隆测序结果显示有2种编辑类型,一种表现为52 bp的缺失突变;另一种表现为单碱基突变。实现了对番茄α-Man的编辑。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 植物表达载体构建
•     1.2.2 加工番茄遗传转化
•     1.2.3 转基因植株分子鉴定
• 2 结果
•   2.1 CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建
•   2.2 加工番茄转基因阳性植株的获得
•   2.3 α-Man突变体检测
•   2.4 转基因植株的表型观察
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张圆圆,邵冬南,崔百明

关键词: 加工番茄,果实成熟软化

来源: 生物技术通报 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,园艺

单位: 石河子大学生命科学学院石河子大学农业生物技术重点实验室

基金: 石河子大学科学技术研究发展计划

分类号: S641.2;Q943.2

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0134

页码: 9-15

总页数: 7

文件大小: 2927K

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