绿色魏斯氏菌的分离鉴定及特性研究

论文摘要

绿色魏斯氏菌（Weissella viridescens）是肉类加工工业中最重要的魏斯氏菌（Weissella）种类。它可以引起肉制品的腐败变质,严重威胁肉制品的质量安全,给肉类加工行业造成巨大的经济损失。目前,国内外对W.viridescens的研究较少,对该菌的生长特性、抑菌特性等方面尚不清楚。本文从W.viridescens的分离鉴定、在环境刺激下的生长特性、快速检测方法的建立、抑菌与益生等方面对W.viridescens进行了深入、全面而系统性的研究。主要实验结果如下:（1）本研究以腐败变质的真空包装低温熟牛肉为研究对象,对其进行腐败菌的分离,并结合表型分析、生理生化鉴定和16S rDNA序列比对分析确定12株分离株的种属,其中3株为W.viridescens。（2）调查W.viridescens在酸、盐、高温和胆盐刺激下的生长情况以及菌株对常用消毒剂的敏感性。结果发现,W.viridescens在pH低至4.0或NaCl浓度为8%或43℃高温的条件下仍能生长繁殖;当培养基中的胆盐浓度为0.3%时,W.viridescens的生长仍然没有受到明显抑制。在常规使用浓度下,选取的5种常用消毒剂中只有碘伏对W.viridescens表现出良好的抑菌作用。（3）本研究选取rpoA基因作为靶基因并设计引物,建立W.viridescens的常规PCR和实时荧光定量PCR（qPCR）检测体系。结果显示两种检测方法均表现出高度特异性。在灵敏度方面,qPCR方法的灵敏度比常规PCR方法高100倍。qPCR对基因组DNA的检测限达到2.667×10-33 pg/μL,直接检测纯培养物和模拟污染牛肉样品的检测限分别为30 CFU/mL和0.8 CFU/g。qPCR方法的变异系数为0.02%1.28%,表明实验重复性好,可以对样品进行稳定可靠的检测。（4）W.viridescens上清对实验所用的8株指示菌均无抑菌效果,表明本实验所分离的W.viridescens没有产生细菌素或是由于细菌素的浓度过低无法有效抑制指示菌的生长。W.viridescens上清对食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）生物被膜的形成及其生运动性具有抑制作用。W.viridescens体外清除胆固醇试验结果表明,W.viridescens具有清除培养基中胆固醇的能力,且随着培养时间的延长该菌对胆固醇的清除能力增强。当培养基中胆固醇添加量为15μg/mL、培养时间达到72 h时,W.viridescens对胆固醇的清除率最高,可达82.4%。综上所述,W.viridescens对酸、盐、高温、胆盐环境刺激都具有耐受性,;本研究建立的W.viridescens qPCR方法能够实现对W.viridescens的快速准确检测;W.viridescens上清对L.monocytogenes生物膜的形成及运动性有抑制作用;W.viridescens能够清除培养基中的胆固醇。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
•   1.1 Weissella viridescens概述
•     1.1.1 W.viridescens是真空包装低温肉制品中的特定腐败菌
•     1.1.2 W.viridescens的生长特性
•     1.1.3 W.viridescens的检测方法
•   1.2 乳酸菌对消毒剂的敏感性
•   1.3 乳酸菌的抑菌作用
•     1.3.1 细菌素的抑菌作用
•     1.3.2 乳酸菌对细菌生物被膜形成的影响
•   1.4 乳酸菌对胆固醇的清除作用
•   1.5 本文的研究背景及意义
•   1.6 本文的研究内容
• 第二章 真空包装低温熟牛肉中腐败菌的分离与鉴定
•   2.1 引言
•   2.2 实验材料
•     2.2.1 实验样品
•     2.2.2 实验仪器
•     2.2.3 主要试剂
•     2.2.4 培养基和常用试剂配制
•   2.3 实验方法
•     2.3.1 菌株的分离与纯化
•     2.3.2 菌株的初步鉴定
•     2.3.3 菌株的16S rDNA鉴定
•   2.4 结果与分析
•     2.4.1 菌株的初步鉴定
•     2.4.2 菌株PCR扩增结果
•     2.4.3 测序结果分析
•     2.4.4 确定菌株的种属
•   2.5 本章讨论
• 第三章 W.viridescens在不同环境刺激下的生长特性
•   3.1 引言
•   3.2 实验材料
•     3.2.1 实验菌株
•     3.2.2 实验仪器
•     3.2.3 主要试剂
•     3.2.4 培养基与常用试剂配制
•   3.3 实验方法
•     3.3.1 酸刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.3.2 盐刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.3.3 高温刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.3.4 W.viridescens对胆盐的耐受性
•     3.3.5 W.viridescens对消毒剂的敏感性
•   3.4 结果与分析
•     3.4.1 酸刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.4.2 盐刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.4.3 高温刺激对W.viridescens生长的影响
•     3.4.4 W.viridescens对胆盐的耐受性
•     3.4.5 W.viridescens对消毒剂的敏感性
•   3.5 本章讨论
• 第四章 W.viridescens q PCR反应检测方法的建立
•   4.1 引言
•   4.2 实验材料
•     4.2.1 实验菌株
•     4.2.2 实验仪器
•     4.2.3 主要试剂
•     4.2.4 引物
•   4.3 实验方法
•     4.3.1 细菌基因组DNA的提取
•     4.3.2 W.viridescens特异性引物的筛选
•     4.3.3 PCR扩增
•     4.3.4 特异性评价
•     4.3.5 灵敏度评价
•     4.3.6 qPCR检测结果准确性评价
•     4.3.7 人工污染食品样品检测
•   4.4 结果与分析
•     4.4.1 特异性引物筛选
•     4.4.2 常规PCR及 qPCR方法的特异性
•     4.4.3 灵敏度
•     4.4.4 准确性
•     4.4.5 人工污染食品样品检测
•   4.5 本章讨论
• 第五章 W.viridescens的抑菌与清除胆固醇作用
•   5.1 引言
•   5.2 实验材料
•     5.2.1 实验菌株
•     5.2.2 实验仪器
•     5.2.3 主要试剂
•     5.2.4 培养基与常用试剂配制
•   5.3 实验方法
•     5.3.1 W.viridescens上清的抑菌作用
•     5.3.2 W.viridescens上清对L.monocytogenes生物被膜形成的影响
•     5.3.3 W.viridescens体外降胆固醇试验
•   5.4 结果与分析
•     5.4.1 W.viridescens上清的抑菌作用
•     5.4.2 W.viridescens上清对L.monocytogenes生物被膜形成的影响
•     5.4.3 W.viridescens体外降胆固醇试验
•   5.5 本章讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术研究成果

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 张艺鸽

导师: 姜晓冰

关键词: 绿色魏斯氏菌,实时荧光定量,抑菌,生物被膜,清除胆固醇作用

来源: 河南师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 河南师范大学

分类号: TS201.3

DOI: 10.27118/d.cnki.ghesu.2019.000082

总页数: 83

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