导读:本文包含了病毒载体介导论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,载体,干细胞,转染,骨髓,病毒,蛋白。
病毒载体介导论文文献综述
王志红,陈为民,林芸,尚晋,魏天南[1]（2019）在《慢病毒载体介导CC趋化因子受体7基因过表达可促进大鼠骨髓间充质干细胞归巢》一文中研究指出背景:研究发现,骨髓间充质干细胞特异性地表达CC趋化因子受体7(CC chemokine receptor,CCR7),与其配体次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC)相互作用,有助于骨髓间充质干细胞归巢到损伤部位。目的:探讨CCR7基因过表达对大鼠骨髓间充质干细胞体内外归巢特性的影响。方法:利用慢病毒载体介导大鼠骨髓间充质干细胞过表达CCR7基因,建立过表达CCR7的骨髓间充质干细胞。通过Transwell实验体外检测趋化因子SLC对过表达CCR7的骨髓间充质干细胞体外定向迁移的影响。将SD大鼠分为4组,每组动物10只:①对照组:未接受全身照射大鼠作为对照组;②照射组:大鼠接受全身照射(60Co单次全身照射,总剂量为7.5 Gy,照射量率为0.75 Gy/min),输注生理盐水1 mL;③BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注GFP标记的骨髓间充质干细胞悬液1 mL (含细胞5×105个);④CCR7-BMSCs-GFP组:大鼠经全身照射后,输注携带GFP和CCR7基因的骨髓间充质干细胞1 mL (含细胞5×105个)。移植24 h后取大鼠脾脏做冰冻切片,荧光显微镜下观察骨髓间充质干细胞归巢情况,流式细胞技术检测骨髓间充质干细胞在脾脏的归巢率。ELISA方法检测照射后大鼠外周血中SLC水平。结果与结论:①Transwell实验结果表明,过表达CCR7可促进骨髓间充质干细胞向趋化因子SLC迁移募集;②冰冻切片结果显示,过表达CCR7可明显提高骨髓间充质干细胞归巢至损伤脾脏的效率;③流式细胞术测定过表达CCR7的骨髓间充质干细胞归巢至脾脏数量明显高于BMSCs-GFP组(P <0.05);④ELISA结果显示,照射24 h后大鼠外周血中SLC水平明显升高;⑤结果表明,CCR7及其配体SLC对骨髓间充质干细胞的归巢有促进作用。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年25期）
黄辉云,沈二栋,唐四清,粟钰淇[2]（2019）在《腺病毒载体介导的PTEN基因对黑色素瘤SK-MEL-3细胞化疗敏感性的影响》一文中研究指出目的探讨腺病毒载体介导的PTEN基因对黑色素瘤SK-MEL-3细胞化疗敏感性的影响。方法以pcDNA3.0-PTEN重组质粒为模板,加入PTEN引物,构建重组腺病毒载体PTEN(Ad-PTEN),并用其感染QBI-293A细胞,进行病毒扩增和效价测定。将SK-MEL-3细胞分为对照组(PBS组)、空载体腺病毒组(ADDP处理组)、Ad-PTEN基因治疗组(Ad-PTEN处理组)、顺铂对照组(DDP处理组)、Ad-PTEN+DDP联合处理组。采用RT-PCR和Western blot法检测PTEN、Bax、Bcl-2、P21、P53和Caspase-3的表达水平。分别用划痕实验、侵袭实验、MTT法、流式细胞仪检测各组细胞的迁移、侵袭能力及生长、凋亡情况。结果本研究成功构建了Ad-PTEN,且感染QBI-293细胞后可进行增殖,病毒效价为108 pfu·mL~(-1)。与PBS处理组和ADDP处理组比较,Ad-PTEN处理组、DDP处理组、Ad-PTEN+DDP联合处理组细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。Ad-PTEN+DDP联合处理组与Ad-PTEN处理组、DDP处理组比较,细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。结论 Ad-PTEN可抑制SK-MEL-3细胞增殖并诱导其凋亡,呈现明显的抑癌作用;Ad-PTEN与DDP联合使用对SK-MEL-3细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用显着优于单用Ad-PTEN或DDP,具有化疗增敏作用。(本文来源于《肿瘤药学》期刊2019年03期）
任超,周诺[3]（2019）在《非病毒载体介导的基因治疗在骨缺损修复中的研究进展》一文中研究指出近年来,现代分子生物学理论与技术得到了突飞猛进的发展,利用转基因技术增强骨组织工程的方法,通过局部基因治疗促进新骨形成和修复骨缺损是重要的研究方向之一。在基因治疗过程中,选择高效、安全的载体是使外源靶基因顺利进入靶细胞并有效表达的前提。用于基因治疗的载体有病毒载体和非病毒载体两种类型。病毒载体有腺病毒、逆转录病毒、慢病毒等,具有转染效率高的优点,但由于其较高的免疫原性、DNA携带能力有限与致癌性等缺点,限制了其在临床的应用。虽然非病毒载体整体转染效率低,但具有生物安全性高、免疫原性低、价格低廉、制备简单、易于大量生产的优点,使其成为研究的热点。目前,非病毒载体投递系统也一直在不断被优化,本文旨在回顾非病毒载体介导的基因治疗在骨缺损修复中的研究进展。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2019年12期）
朱含章,葛珂,刘凌,沈伟敏,贾长库[4]（2019）在《慢病毒载体CV072介导的Mfn2过表达抑制肝星状细胞活化》一文中研究指出目的:构建携带线粒体融合蛋白2(Mfn2)基因的慢病毒载体,并探讨Mfn2过表达对大鼠肝星状细胞活化的抑制作用及其减少肝纤维化相关因子生成的机制。方法:构建含Mfn2的慢病毒过表达载体CV072-pCMV-Mfn2-EGFP,转染肝星状细胞;荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白的表达及转染效率;RT-qPCR和Western blot法检测转染后细胞中Mfn2的mRNA和蛋白表达水平;Western blot检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、α-SMA、TGF-β1、Smad2和Smad3的水平;ELISA检测Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ型胶原蛋白水平。结果:与各对照组相比,慢病毒过表达载体CV072-pCMV-Mfn2-EGFP转染后,细胞促凋亡蛋白表达增多,TGF-β1/Smad通路蛋白TGF-β1、p-Smad和p-Smad3的蛋白水平均降低,纤维化相关蛋白α-SMA、I型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白和IV型胶原蛋白的水平降低(P<0.01)。结论:转染慢病毒过表达载体CV072-pCMV-Mfn2-EGFP在体外可有效抑制肝星状细胞活化,并可能通过抑制TGF-β1/Smad通路减少肝纤维化相关因子的生成。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2019年06期）
买买提沙吾提阿吉·麦麦提,马原,朱旭[5]（2019）在《慢病毒载体介导miR-146a转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究》一文中研究指出目的探讨微小RNA-146a(miR-146a)体外转染大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)应用于基因治疗的可行性。方法体外分离、培养并鉴定BMSCs,采用具有高效转染非分裂期细胞的慢病毒载系统将miR-146a导入BMSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术、实时荧光定量PCR(qPCR)、Western Blot技术分别检测转染率、miR-146a及白介素-1(IL-1)受体相关激酶1(IRAK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白水平表达情况。结果经流式细胞技术鉴定第叁代BMSCs中表达CD90、CD106,不表达CD45。慢病毒感染MSCs的感染复数为50最佳感染率可达80%。EGFP荧光表达自72 h时开始逐渐增强。转染的BMSCs中miR-146a高表达。结论 (1)通过贴壁筛洗法能够获取纯度较高的BMSCs。(2)通过携带miR-146a的慢病毒载体成功转染BMSCs,并下调靶蛋白IL-1 IRAK1和TRAF6。(本文来源于《新疆医科大学学报》期刊2019年06期）
李晓鹃,胡鹏,李振龙,余强[6]（2019）在《慢病毒载体介导MMP-3 RNAi对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导基质金属蛋白酶-3(MMP-3)RNAi对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响。方法将20只SD大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、空载体病毒组和MMP-3 RNAi组,每组5只。模型组、空载体病毒组和MMP-3 RNAi组建立心肌缺血-再灌注损伤模型,假手术组作为空白对照。采用微量注射器分4点在心肌中模型组注射0.9%氯化钠注射液20μL,空载体病毒组注射空白病毒载体20μL,MMP-3 RNAi病毒组注射MMP-3 RNAi慢病毒载体20μL,假手术组未做任何处理。实时荧光定量RT-PCR检测4组MMP-3 mRNA、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3 mRNA和Caspase-9 mRNA的表达水平,Western blot法检测MMP-3、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达水平,采用TUNEL染色检测4组的心肌细胞凋亡指数(AI)。结果MMP-3 mRNA、Caspase-3 mRNA、Caspase-9 mRNA相对表达水平和MMP-3、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平:模型组、空载体病毒组和MMP-3 RNAi组均低于假手术组,空载体病毒组、MMP-3 RNAi组均低于模型组,MMP-3 RNAi组低于空载体病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。空载体病毒组AI值低于假手术组和模型组,但差异无统计学意义(P>0.05)。MMP-3 RNAi组AI值低于假手术组、模型组、空载体病毒组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MMP-3可能通过调节Caspase-3、Caspase-9的表达参与了心肌缺血-再灌注损伤中细胞凋亡的过程。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2019年02期）
李琦,邹志余,杨瑞泽,邓洪利,张蕊[7]（2019）在《慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白筛选稳定转染的兔骨髓间充质干细胞》一文中研究指出目的分离、培养并鉴定兔骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs),探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, eGFP)感染兔BMSCs的最佳条件,筛选稳定转染的兔BMSCs。方法通过全骨髓贴壁法获得兔BMSCs;茜素红、甲苯胺蓝及油红O染色对BMSCs成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;免疫荧光组化染色检测CD44及CD90的表达;不同浓度嘌呤霉素筛选BMSCs的最小致死浓度;以感染复数(multiplicity of infection, MOI)为50、100、150、200的慢病毒载体介导eGFP转染BMSCs,倒置显微镜下观察荧光表达,并用嘌呤霉素筛出稳定转染系。结果当MOI为150,慢病毒载体介导eGFP感染兔BMSCs效率最高;嘌呤霉素筛选稳定转染兔BMSCs的最适质量浓度是1.0μg/mL。结论成功培养了兔BMSCs,用慢病毒介导的GFP标记了兔BMSCs并筛选出了稳定转染的兔BMSCs,建立了一个简便有效的干细胞标记方法,为BMSCs在动物体内实验标记示踪奠定了基础。(本文来源于《西安交通大学学报(医学版)》期刊2019年04期）
弓贺炜,刘承伟,梁炳生,李刚[8]（2019）在《过表达慢病毒载体介导miR-1转染L6细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶的表达》一文中研究指出背景:有研究认为组蛋白去乙酰化酶能够影响肌肉的分化和增殖,且其与miR-1关联紧密,但其具体调控机制尚不明确。目的:分析mi R-1过表达对L6成肌细胞增殖分化及组蛋白去乙酰化酶表达水平的影响。方法:构建表达含miR-1的重组慢病毒载体,进行测序和酶切鉴定,稳定转染L6成肌细胞,采用RT-PCR检测miR-1的表达水平。取稳定转染miR-1重组慢病毒载体的L6成肌细胞(miR-1组)、转染空质粒重组慢病毒载体的L6成肌细胞(空载组)及未转染的L6成肌细胞(空白组),培养24,48,72,96 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖,荧光显微镜下观察细胞形态变化,Western blot检测培养72 h后的α肌动蛋白表达;培养24,72,120 h后,Western blot与RT-PCR检测mi R-1组、空载组组蛋白去乙酰化酶蛋白及基因的表达。结果与结论:①miR-1慢病毒载体经酶切和测序鉴定正确,转染48 h后,mi R-1组L6成肌细胞miR-1基因表达显着高于空载组、空白组(P <0.01),实现了miR-1在L6成肌细胞中过表达;②培养24,48,72,96 h后,3组细胞增殖能力比较差异无显着性意义(P> 0.05);③培养24,48 h时,miR-1组与空白组、空载组细胞形态无明显差异;72 h以后,miR-1组呈梭形的成熟肌细胞显着增多,且细胞α肌动蛋白表达明显高于空载组、空白组,证实miR-1过表达促进了L6成肌细胞的分化;④随着时间推移,miR-1组的组蛋白去乙酰化酶蛋白条带较空载组明显变淡、变细;miR-1组培养不同时间点的组蛋白去乙酰化酶基因表达均低于空载组(P <0.01);⑤结果表明,miR-1过表达可促进L6成肌细胞的分化能力,其机制与抑制组蛋白去乙酰化酶4的表达相关。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年13期）
王丹丹,陶贵周,黄建华,刘华[9]（2019）在《腺病毒载体介导C/ebp delta改善小鼠心脏缺血性损伤》一文中研究指出目的探讨腺病毒载体介导C/ebp delta对缺血性心脏病的治疗作用。方法构建腺病毒C/ebp delta增强型绿色荧光蛋白(Ad C/ebp delta-EGFP)载体,局部注射小鼠心脏左心室前壁,观察其对心肌细胞的转染效率。取C57BL/6小鼠,以腺病毒空载体局部注射心肌为对照组,Ad C/ebp delta-EGFP载体局部注射心肌为实验组。2组小鼠心肌局部注射腺病毒载体后行冠状动脉左前降支结扎,用心脏超声检测C/ebp delta对心脏功能的影响。无痛苦处死小鼠,收获心脏,TUNEL染色观察C/ebp delta对心肌细胞凋亡的影响;CD31免疫组化观察C/ebp delta对心肌梗死后梗死交界区毛细血管密度的影响;蛋白免疫印迹检测C/ebp delta对心肌梗死后心脏低氧诱导因子-1(HIF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果成功构建Ad C/ebp delta-EGFP载体。超声显示实验组小鼠心肌梗死后心脏左室短轴缩短分数(LVFS,0.323±0.031)和心脏左室射血分数(LVEF,0.605±0.085)较对照组(0.221±0.031和0.464±0.071)显着改善(P<0.05);心肌细胞凋亡率较对照组明显减少(20.36%±3.07%vs. 44.26%±6.25%,P<0.01);心肌梗死交界区毛细血管密度(毛细血管数目/每个视野)较对照组显着增加(145.41±15.52 vs. 77.60±5.19,P<0.01);HIF-1、HO-1和VEGF蛋白的表达较对照组均显着增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的C/ebp delta可能通过激活HIF-1信号通路增加HO-1和VEGF表达,进而通过保护心肌细胞及促进心脏血管新生治疗缺血性心脏病。(本文来源于《天津医药》期刊2019年02期）
苗素云[10]（2019）在《慢病毒载体介导siRNA沉默海马Orexin受体基因对睡眠剥夺大鼠齿状回细胞增殖的影响》一文中研究指出研究背景睡眠剥夺(sleep deprivation,SD)是指个体由于自身或环境原因无法满足正常睡眠的情况,其睡眠时间未能满足机体为了保持清醒和警觉所需的睡眠时间,表现为睡眠减少或睡眠中断。睡眠剥夺分为选择性睡眠剥夺(selective sleep deprivation,SSD)和完全性睡眠剥夺(total sleep deprivation,TSD),其中前者又分为快速眼球运动(rapid eye movement,REM)期睡眠剥夺和非快速眼球运动(non-rapid eye movement,NREM)期睡眠剥夺。海马结构是边缘-认知系统的一个重要部分,包括海马、齿状回(dentate gyrus,DG)、内嗅皮层、下托和前下托,其基本作用是接受各个皮层来源的感觉信息,并将获得的信息进行编码、短时储存,在认知功能中起重要作用。睡眠对海马依赖性记忆(hippocampus-dependent memory)的形成至关重要,睡眠时短时记忆碎片被再次激活,经分析、组合后,形成长时记忆,但睡眠剥夺可引起人或动物思维紊乱、学习记忆受损。主要机制如下:(1)睡眠剥夺干扰了齿状回长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导,降低磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)基础水平及其上游调节因子钙/钙调蛋白激酶Ⅳ(calmodulin kinase Ⅳ,CaMK Ⅳ)和脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在海马齿状回的表达,进而破坏海马突触的可塑性[1-2]。(2)长期睡眠剥夺能引起谷氨酸受体在海马表达减少及功能降低,海马区NMDA/AMPA受体比例下降,还能引起NMDA受体体系结构变化,损害LTP形成[3-4]。(3)睡眠剥夺后腺苷水平升高,激活腺苷A1受体,可逆性抑制刺激海马CA1区的锥体细胞层产生的动作电位,降低兴奋性突触后电流(excitatory postsynaptic currents,EPSCs)的频率[5],引起海马功能减退和学习记忆损害。另有研究证实,长期睡眠剥夺或睡眠中断能降低海马活性,抑制海马神经元再生,最终损害海马可塑性和功能,出现认知障碍[6]。目前有关睡眠剥夺和由此引起的学习记忆损害有效的解决办法极为有限。有研究报道,咖啡因能预防睡眠剥夺引起的学习记忆损害[71,但该药物干预睡眠剥夺引起记忆损害的作用靶点不明确,而且能引起REM和NREM期睡眠结构变化,长期应用可导致睡眠紊乱,反而加重记忆损害。因此进一步探讨睡眠剥夺与学习记忆损害的分子与细胞机制和特异性靶点,对开发有效药物治疗睡眠剥夺伴随的学习记忆损害具有重要的临床意义。食欲素Orexin又称为下视丘生成素(Hypocretin,Hcrt),在1998年由两个实验室独立发现[8-9],是兴奋性的下丘脑神经肽,有Orexin-A(也称为Hcrt-1)和Orexin-B(也称为Hcrt-2)两种亚型。早期的研究将Orexin系统的作用放在摄食和能量平衡上,随着对其研究的深入,发现Orexin也参与了睡眠-觉醒、体温调节、血压及神经内分泌调节等许多生理功能,后续对睡眠-觉醒、学习记忆方面的研究较多。Orexin通过激活两种G蛋白偶联细胞表面Orexin受体(Orexin receptor,OXR)(又称Hypocretin受体(Hypocretin receptor,Hcrtr))发挥作用,这两种受体为OX1R(Hcrtr 1)和OX2R(Hcrtr 2)。Orexin神经元主要起源于外侧下丘脑,发出兴奋性广泛投射到除小脑之外的中枢神经系统,其中主要投射到促觉醒的细胞群,如结节乳头体核的组织胺能细胞、腹侧被盖区的多巴胺和非多巴胺能细胞、中缝背核的5-羟色胺能细胞、蓝斑的去甲肾上腺素能细胞以及背外侧被盖核/脑桥脚被盖核和基底前脑的胆碱能细胞。在脑内Orexin受体的表达和这些投射脑区一致,但是OX1R和OX2R在脑内的分布不同。OX1R主要分布在蓝斑,而OX2R主要分布在结节乳头体核,此外OX1R和OX2R共同分布在背外侧被盖核/脑桥脚被盖核、中缝背核和腹侧被盖区。近年来研究发现,Orexin-A通过调节乙酰胆碱能、谷氨酸能、肾上腺素能和丫-氨基丁酸(GABA)能系统诱导海马突触可塑性形成,参与海马的学习记忆过程[10--11]。有研究进一步证实,Orexin-A可通过调控细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases1/2,ERK1/2)激活,促进大鼠海马齿状回颗粒细胞的发生和迁移,调节学习记忆[12]。但Orexin神经元对睡眠剥夺非常敏感,睡眠剥夺后Orexin-A的合成、分泌和受体表达增加[13],而且REM期睡眠剥夺引起的Orexin-A表达增多可导致大鼠双侧海马神经元损害[14]。这些研究提示可以从Orexin-A相关信号通路探讨睡眠剥夺损害学习记忆的分子与细胞机制。若能特异性阻断这一信号通路上的某一靶点,既可调整睡眠,又可改善睡眠剥夺所致的学习记忆损害,因此对这一靶点的探讨具有重要的应用价值。大多数对细胞增殖的研究建立在5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2'-deoxyuridine,BrdU)的应用上,BrdU是一种合成的胸苷尿嘧啶类似物,被分裂细胞摄取,能够在DNA合成的S期代替胸腺嘧啶(T)掺入正在复制的DNA分子中。BrdU作为分裂细胞的标志物,被认为是判断细胞增殖的重要指标。BrdU、微管相关蛋白(doublecortin,DCX)和神经元核抗原(neuronal nuclear antigen,NeuN)等标志能很好地观察到海马齿状回神经干细胞在睡眠剥夺后的动态发育过程,其中,BrdU+细胞被认为是新生细胞,而BrdU+/DCX+双标细胞被认为是新生的正在迁移的不成熟神经元,而BrdU+/NeuN+双标细胞则是新生的成熟神经元。在成年神经再生过程中,DCX表达开始于神经干细胞生成时,在第二周达到高峰,随着成熟神经元标志NeuN的出现开始下调[15-16]。通常选择BrdU注射后的第14天和第28天两个时间点来标记新生细胞的分化和成熟。目的本研究目的在于观察睡眠剥夺后大鼠下丘脑Orexin-A神经元及海马齿状回细胞增殖的变化,以及慢病毒(Lentivirus,LV)载体介导的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默海马Orexin受体基因对睡眠剥夺大鼠海马齿状回细胞增殖的影响,探讨经Orexin-A相关信号通路睡眠剥夺损害学习记忆的分子与细胞机制。方法实验分为两部分:免疫组化部分和免疫荧光部分。免疫组化部分利用免疫组织化学技术观察睡眠剥夺后大鼠下丘脑Orexin-A神经元的变化。免疫荧光部分利用慢病毒载体转染、siRNA基因沉默、免疫荧光双标及共聚焦等技术方法,研究睡眠剥夺对大鼠海马齿状回细胞增殖、分化和成熟的影响。1.免疫组化部分经过筛选后的24只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为①空白对照组(cage control group,CC)、②环境对照组(treadmill control group,TC)和③睡眠剥夺组(sleep deprivation group,SD)3个亚组,每个亚组8只。A.采用间歇性跑步机对SD组大鼠进行72 h全睡眠剥夺。跑步机速度设定为10cm/s,运行3 s,停止12 5;TC组运行15min,停止600min,运行和停止循环进行。该设置不限制TC组睡眠,在75min的周期内能有60 min的休息时间,但达到和SD组同等距离的运动量。CC组大鼠放鼠笼正常饲养。B.72 h睡眠剥夺后即刻提取标本,通过免疫组化检测大鼠下丘脑Orexin-A阳性神经元的数量。2.免疫荧光部分经过筛选后的60只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为①空白对照组(CC)、②环境对照组(TC)、③睡眠剥夺组(SD)、④空病毒组(Lentivirus group,LV)和⑤慢病毒介导siRNA组(Lentivirus mediated siRNA group,LM)5个亚组,每个亚组12只。A.对LV和LM组大鼠行海马立体定位注射手术。海马坐标为前囟后3.6 mm,中线左右2.0 mm,颅骨表面下3.0 mm。LV组注射1.6 uL空病毒,LM组注射1.6 uL Hcrtr-siRNA(Hcrtr 1-siRNA:Hcrtr 2-siRNA为0.6:1)B.采用间歇性跑步机对SD、LV和LM组大鼠进行72 h全睡眠剥夺,跑步机速度设定为10cm/s,运行3 s,停止12 s;TC组运行15 min,停止60 min,运行和停止循环进行。该设置不限制TC组睡眠,在75min的周期内能有60 min的休息时间,但达到和SD、LV及LM组同等距离的运动量。CC组大鼠放鼠笼正常饲养。C.睡眠剥夺期间各组大鼠给予BrdU 50 mg/kg腹腔注射,每天注射2次,共注射3天。D.在睡眠剥夺结束后第5天、14天和28天提取标本,每个时间点4只,通过免疫荧光技术在3个时间点分别检测海马齿状回区BrdU+、BrdU+/DCX+和BrdU+/NeuN+细胞表达。结果1.免疫组化结果显示:SD组大鼠下丘脑Orexin-A阳性细胞数表达较TC组增多(P<0.05),但CC组和TC组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。2.免疫荧光结果显示·:与TC组相比,SD组大鼠海马齿状回区BrdU+、BrdU+/DCX+及BrdU+/NeuN+细胞表达减少(P<0.05),但CC组和TC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);与LV组相比,LM组大鼠海马齿状回区BrdU+、BrdU+/DCX+及BrdU+/NeuN+细胞表达增多(P<0.05);但LV组和SD组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.睡眠剥夺可导致大鼠下丘脑Orexin-A神经元表达增多。2.睡眠剥夺能抑制大鼠海马齿状回细胞增殖、分化和成熟。3.慢病毒载体介导siRNA沉默海马Orexin受体基因,可促进睡眠剥夺大鼠海马齿状回的细胞增殖、分化和成熟。4.睡眠剥夺诱导的Orexin-A过度表达可抑制海马齿状回细胞再生,而阻断Orexin受体基因能减弱睡眠剥夺大鼠的海马齿状回细胞增殖抑制,睡眠剥夺可能通过Orexin信号通路影响海马齿状回的神经细胞增殖和学习记忆。(本文来源于《山东大学》期刊2019-02-06）
病毒载体介导论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨腺病毒载体介导的PTEN基因对黑色素瘤SK-MEL-3细胞化疗敏感性的影响。方法以pcDNA3.0-PTEN重组质粒为模板,加入PTEN引物,构建重组腺病毒载体PTEN(Ad-PTEN),并用其感染QBI-293A细胞,进行病毒扩增和效价测定。将SK-MEL-3细胞分为对照组(PBS组)、空载体腺病毒组(ADDP处理组)、Ad-PTEN基因治疗组(Ad-PTEN处理组)、顺铂对照组(DDP处理组)、Ad-PTEN+DDP联合处理组。采用RT-PCR和Western blot法检测PTEN、Bax、Bcl-2、P21、P53和Caspase-3的表达水平。分别用划痕实验、侵袭实验、MTT法、流式细胞仪检测各组细胞的迁移、侵袭能力及生长、凋亡情况。结果本研究成功构建了Ad-PTEN,且感染QBI-293细胞后可进行增殖,病毒效价为108 pfu·mL~(-1)。与PBS处理组和ADDP处理组比较,Ad-PTEN处理组、DDP处理组、Ad-PTEN+DDP联合处理组细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。Ad-PTEN+DDP联合处理组与Ad-PTEN处理组、DDP处理组比较,细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。结论 Ad-PTEN可抑制SK-MEL-3细胞增殖并诱导其凋亡,呈现明显的抑癌作用;Ad-PTEN与DDP联合使用对SK-MEL-3细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用显着优于单用Ad-PTEN或DDP,具有化疗增敏作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒载体介导论文参考文献
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