一、银环蛇(Bungarus multicinctus)毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化（论文文献综述）
刘刚[1]（2015）在《尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）蛇毒中抑制回肠平滑肌收缩的蛋白组分（DA-1）的分离纯化及其生化与药理研究》文中进行了进一步梳理尖吻蝮蛇（Deinagkistrodon acutus）又称五步蛇,为蝰蛇科蝮亚科毒蛇,是我国十大毒蛇之一,主要分布于我国南方地区。被该蛇咬伤的患者,常出现疼痛、出血、肿胀、肌肉坏死等血循毒症状,也有少数患者出现眼睑下垂、呼吸困难等神经毒症状,这暗示着尖吻蝮蛇毒中可能含有神经毒素,但是,有关该蛇的这类神经毒性的毒理学活性、结构与功能的关系以及作用机理等尚不清楚。到目前为止,只见锯鳞蝰（Echis carinatus）蛇毒能抑制回肠平滑肌收缩的报道。本研究首先确定尖吻蝮蛇毒是否具有抑制回肠收缩的活性,再从粗毒中分离纯化出具有该活性的目标蛋白组分,最后鉴定该蛋白的理化性质、生物学活性及药理活性等。通过三步柱层析法（Sephadex G-50凝胶过滤层析,DEAESepharose Fast Flow离子交换层析和Hitrap Capto DEAE离子交换层析）,从尖吻蝮蛇毒中分离纯化出一种能抑制回肠平滑肌收缩的类神经毒性蛋白。还原性和非还原性SDS-PAGE均检测为单一泳带,显示该蛋白是由单一肽链组成,命名为DA-1。MALDI-TOF-TOF质谱测得其相对分子量为22,947.9 Da。肽质量指纹图谱数据表明与其匹配度最高的蛋白为蛇毒金属蛋白酶。生化实验表明,DA-1可明显水解牛纤维蛋白原的Aα-和Bβ-链,但对γ-链无作用,且DA-1也可水解纤维蛋白单体。其纤维蛋白原水解活性可被金属螯合剂EGTA或EDTA完全抑制、β-巯基乙醇部分抑制,而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对水解活性无影响。小鼠背部皮下注射DA-1发现该蛋白具有明显的出血活性。以上这些实验结果提示DA-1为一种出血性的金属蛋白酶。其他生化实验结果表明,该酶具有促水肿活性和磷脂酶A2（PLA2）活性,而无溶血活性。DA-1能抑制小鼠回肠平滑肌自发性收缩,并呈一定的量效和时效关系。在高剂量（12μg/ml）下,肌肉收缩幅度在22分钟时达到90%抑制率;同时,随着DA-1的剂量降低,肌肉收缩的抑制率也随着降低;实验证明即使是在高剂量（12μg/ml）下与回肠标本孵育60分钟,DA-1对小鼠回肠平滑肌的收缩频率亦没有影响。但是,在60分钟后对各个浓度作用的肌肉标本进行清洗,收缩幅度都无法得到恢复,说明DA-1的作用方式是不可逆的。DA-1可以抑制由外源性激动剂Ach和KCl引起的痉挛性收缩,且有剂量依赖性。PLA2抑制剂4-BPB与DA-1在30℃孵育24小时,其孵育混合物同样能使回肠平滑肌收缩抑制,说明DA-1的PLA2活性与该蛋白抑制回肠平滑肌收缩的作用不相关联。综上所述,本文分离纯化的蛇毒抑制蛋白（DA-1）为一种出血性的金属蛋白酶,能剂量依赖性地抑制小鼠回肠平滑肌的自发性和痉挛性收缩,其抑制效果不可逆;不仅具有纤维蛋白原水解活性和出血活性,而且具有PLA2活性和促水肿活性,但无溶血活性。磷脂酶活性抑制实验证明,该蛋白组分的药理活性与PLA2活性无关。平滑肌收缩幅度的降低可能是由出血性的金属蛋白酶不可逆地破坏肌细胞或神经细胞的完整性引起的,这方面的详细作用机制有待进一步研究。
周升铭[2]（2011）在《舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1优化分离及其活性研究》文中认为背景和目的:细胞毒素（Cadiotoxins CTXs）是眼镜蛇毒中一类重要的活性蛋白,约占蛇毒总蛋白含量40%左右,它们的氨基酸序列和空间结构相当保守,但生物学活性却多种多样,如引起可兴奋性组织去极化[1]、溶解肿瘤细胞[2]、心脏毒性[3]和抗菌活性[4]等。不同地区、不同蛇种的蛇毒中含有不同的CTXs,且即使是同种蛇毒中也含有2～5个CTXs,它们的结构及生物学活性有一定差异[5] [6],对它们的结构与功能的研究是当今生物毒素研究的热点之一。本课题运用CM-Sepharose FF阳离子交换凝胶柱层析一步法对舟山眼镜蛇蛇毒分离纯化,以提高分离效率和纯度;利用RP-HPLC内标法鉴定分离得到的单体;CTXs具有广泛的生物活性,如镇痛、抑制肿瘤增殖等,本研究利用热板法和醋酸扭体法初探CTX1的镇痛活性。利用125I同位素标记法观察在生理条件下和吗啡成瘾条件下,研究CTX1在体内的分布情况,对比两种情况下其脑组织内的分布情况,以考察在不同病理生理条件下,CTX1在血脑屏障的通透性。为进一步研究CTX1的药理作用打下基础。方法:一、舟山眼镜蛇毒CTX1层析分离的流速优化1.一步法对舟山眼镜蛇蛇毒进行纯化分离收集舟山眼镜蛇原毒样本,经采集处理后,运用CM-Sepharose FF阳离子交换凝胶柱层析,研究不同洗脱速度对蛇毒蛋白分离纯化的影响。2. Sephadex G-25层析洗脱脱盐利用分子筛原理,将洗脱峰内含有的蛇毒蛋白和盐溶液洗脱分离。研究不同洗脱速度对脱盐效率和结果的影响。3.舟山眼镜蛇毒单体成分的鉴定采用RP-HPLC,内标法鉴定分离纯化的舟山眼镜蛇蛇毒单体,与标准品比较保留时间,确定分离单体的成分。二.CTX1的毒性及镇痛活性测定1.急性毒性实验Bliss法检测CTX1的LD50。通过预实验确定100%致死量和0%致死量。由高浓度开始,药物浓度依次稀释0.8倍,共设5个浓度梯度。给药后观察48h,记录死亡时间和中毒症状。2.急性疼痛实验运用热板实验和醋酸扭体实验测定CTX1对生理性疼痛的镇痛作用。三.CTX1的体内分布及对不同模型小鼠血脑屏障的通透性1.小鼠吗啡成瘾模型的建立采用吗啡剂量递增法建立小鼠吗啡成瘾模型,腹腔注射纳洛酮,观察小鼠的戒断症状以及体重变化,评价成瘾模型的是否成功。2. 125I同位素标记CTX1采用氯胺酮氧化法,将CTX1标记125I,利用Sephadex G-50分子筛将标记与未标记的125I分离;纸层析法检验125I的标记率。3.小鼠尾静脉注射125I- CTX1,不同的时间点取各脏器,检测cpm值,以比较CTX1在体内的分布情况;通过两种模型的对比,研究CTX1在不同病理生理条件下,通过血脑屏障的能力。四.统计分析采用t检验、χ2检验,SPSS软件等统计分析实验数据。结果:1.运用CM-Sepharose FF阳离子交换凝胶柱层析一步法对舟山眼镜蛇蛇毒分离纯化,流速V=1.6ml/min时,分离结果理想,得到高纯度的蛇毒单体。2.运用RP-HPLC法,将分离的组分SV6与CTX1内标法对比,结果保留时间一致,判断组分SV6与CTX1为同一成分（注:文中用CTX1表示组分SV6）。3. CTX1急性毒性和镇痛活性的测定结果显示CTX1的LD50为4.33±0.56 mg/kg。CTX1具有良好的镇痛活性,具有剂量依赖性,治疗指数高。4.在生理条件下,CTX1在肾脏的分布最高,脑部的分布量很少;在吗啡成瘾模型条件下,CTX1在脑内的分布量明显增加。结论:1.舟山眼镜蛇原毒经CM-Sepharose FF阳离子交换凝胶柱层析分离得到高纯度单体,洗脱流速为1.6ml/min时分离效果最佳。2. CTX1具有镇痛作用,且呈剂量依赖性。3. CTX1在生理条件下,较少通过血脑屏障;在吗啡成瘾模型小鼠,能明显通过血脑屏障。
郑文果,苑隆国[3]（2003）在《蛇毒中非成瘾性止痛剂的研究进展》文中研究说明
叶勇[4]（2003）在《江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究》文中研究指明本论文的研究源于中药戒毒制剂冰茶栓，它是导师王泽时教授经过多年研制的，以江浙蝮蛇毒为君药的中药复方制剂，能显着控制以疼痛为主的戒断症状。探索江浙蝮蛇毒在戒毒镇痛中所起的作用，对于阐明冰茶栓的作用机理具有十分重要的意义。但江浙蝮蛇毒是一种复杂蛋白，其中每一种蛋白均有不同的药理作用，因此需要从中分离出一种具有良好戒毒镇痛效果的蛋白质，明确其性质，才能进行相关的机理研究。本论文基于此目的，分离筛选出一种江浙蝮蛇毒碱性蛋白质，揭示了它的理化性质、作用途径及对中枢神经递质的调控机理，从而为江浙蝮蛇毒的新药开发奠定了理论基础。 第一部分 冰茶栓靶基因及靶药物的筛选研究 通过冰茶栓药物靶作用的研究，发现冰茶栓能显着控制海洛因依赖猴的戒断症状，同时通过猴大脑中枢纹状体组织的基因芯片研究，找到其有显着性差异表达的基因。用剂量递增法形成海洛因依赖性猴，并进行等级评分，判定猴对海洛因的依赖程度。当形成依赖后，撤药期间，取正常组、阴性组和冰茶栓治疗组猴，从心脏直接注入空气处死，立即取下大脑纹状体，液氮保存。通过总RNA抽提，预杂交和探针标记，将对照组和实验组分别标记Cy3和Cy5荧光，通过荧光信号强度和比值，判断差异表达基因。 戒断评分结果显示：冰茶栓治疗组的分值与阴性对照组有显着差异，但与阳性可乐定组无差异，海洛因依赖猴大脑纹状体基因表达在戒断期和冰茶栓治疗期出现了二个显着性差异基因，分别为前脑啡肽原（Preproenkephalin）和白细胞抗原（HLA-SB（DP）alpha）基因。当猴形成海洛因依赖后，其前脑啡肤原基因表达下调，而经冰茶栓治疗后，其前脑啡肤原基因表达上调，白细胞抗原基因表达下调。提示冰茶栓一方面促进了前脑啡肤原基因的表达，另一方面抑制了白细胞抗原基因的表达，然后达到控制戒断症状的疗效。用均匀设计方法对冰茶栓进行拆方研究，结果提示:江浙蝮蛇毒是冰茶栓中起镇痛作用的靶药物。 第二部分江浙蝮蛇毒组分的分离纯化和镇痛C4组分的筛选及其理化性质研究 探索冰茶栓的主要镇痛活性物质一一江浙蝮蛇毒中可能存在着相关蛋白。采用AKTA一ExPlorer100蛋白质纯化平台，对江浙蝮蛇毒各蛋白质组分进行了提取、分离和纯化，结合镇痛药效和毒性实验筛选最佳镇痛组分;并采用SDS一PAGE、等电聚焦、HPLC等方法获得分子量、等电点和纯度，用紫外光谱及氨基酸序列等进一步明确其理化性质。 分离实验中用阳离子交换柱、阴离子交换柱、分子筛和不同型号的分离介质，对江浙蝮蛇毒的分离效果进行了考察。采用正交设计L，（3’）考察了缓冲液pH、流速、盐浓度等分离参数对分离效果的影响;并用SCoLlting进行方法学考察。确定了先后以离子交换，两种型号分子筛的三步法，最终可获得蛋白质分离纯度为97.5%以上的纯品。 江浙蝮蛇毒经分离纯化，分离出14个蛋白组分，其中酸性组分5个，碱性组分5个，中性组分4个。进行分子筛纯化时，小流速洗脱分离效果最佳。 对分离出的各蛋白组分以小鼠热板法和醋酸扭体法进行E氏，和L氏，的测定。发现一种碱性蛋白质具有较强的镇痛作用和较低毒性，腹腔给药的LD。。为13.33mg/Kg，ED。，为0.63mg/Kg，该组分静脉注射30分钟起效，镇痛强度在5小时达高峰，并持续10小时以上，具有较好的应用价值。编号为C4（为阳离子交换柱分离的4号峰）。 C4组分测定分子量为16.6KD，等电点为8.8，在波长214.16n:和302.Osnm处有最大吸收，在273.09nrn处有最小吸收。H尸LC测定其纯度为92%，具有热不稳定性。该蛋白质N端的前10个氨基酸序列为:H一L一L一Q一F一R一K一M一I一K，经同源性比较，发现它与磷脂酶A2有同源性，但其分子量、HPLC保留时间、热不稳定性均不同于磷脂酶A2。 经大鼠催促戒断试验、大鼠自然戒断试验和C4组分的耐受性试验均表明，C4组分在长期用药过程中不产生身体耐受性和依赖性。 第三部分江浙蝮蛇毒镇痛C4组分的中枢作用研究 江浙蝮蛇毒镇痛C4组分具有镇痛作用，但它是否是中枢镇痛作用?其作用的部位又在哪里?是对其作进一步研究必须回答的问题。因此本实验研究了药物作用之靶区，及其C4组分对大脑中枢镇痛作用之靶点。 通过纳络酮、利血平、阿托品药物对江浙蝮蛇毒C4组分镇痛作用影响的实验，结果表明:阿托品对江浙蝮蛇毒C4组分的镇痛作用无影响，它不作用于乙酞胆碱受体;利血平对C4组分具有提高痛闲的作用;纳络酮对C4组分的镇痛作用具有部分拮抗效应，说明该组分与阿片受体有一定相关性。小鼠侧脑室给药1/400ED5。即表现良好的镇痛效果，说明C4组分具有中枢性作用。脊髓化鼠模型及大鼠足踢定压刺激法试验也表明C4组分是通过中枢起效的。在停药24小时取吗啡依赖大鼠的各脑区组织，测定发现大脑尾状核、壳核、丘脑、红核、苍白球和中脑导水管灰质等组织的亮氨酸脑啡肤含量明显下降，多数脑区的日内啡肤和P物质含量也有所下降。给予C4组分后，多数脑区的亮氨酸脑啡肤含量增加，尤其以尾状核、丘
邢少璟[5]（2001）在《银环蛇粗毒的分离及其有效组分作用于人神经胶质瘤SWO细胞的研究》文中研究表明目的：确定银环蛇毒素是否能诱导人神经胶质瘤细胞SWO凋亡，或者只是杀伤作用，以及银环蛇粗毒中使SWO细胞凋亡或杀伤的毒素组分，并对其作用途径进行初步的探讨，从而为神经胶质瘤的理论研究和治疗提供新的工具，同时为蛇毒的开发利用提供理论基础。 方法：采用羧甲基纤维素CM-52阳离子交换层析和Sephadex G-100葡聚糖凝胶对银环蛇粗毒进行分离纯化。用MTT、DNA ladder、流式细胞术、电镜扫描等方法探讨银环蛇粗毒及其有效组分对人神经胶质瘤细胞SWO的作用。 结果：经羧甲基纤维素CM-52柱层析分离纯化得到十个毒素峰，第Ⅲ峰毒素经Sephadex G-100柱进一步分离得到α-银环蛇毒素（α-BTX）。MTT试验结果显示，SWO细胞对银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α-BTX的作用比较敏感，同时SWO细胞的药敏性强于3T3细胞的药敏性，而SWO对其它组分的作用不敏感；三种毒素作用于SWO细胞，均未出现DNA ladder，流式细胞术检测也未见凋亡峰。电镜细胞表面扫描显示，毒素作用后的细胞膜表面有许多小孔，显示毒素对SWO的作用主要是通过直接杀伤，而非引起凋亡。 结论：银环蛇粗毒、第Ⅲ峰毒素、α-BTX对神经胶质瘤细胞都只有杀伤，没有凋亡作用。毒素纯度越高，杀伤作用越强，且杀伤作用与毒素存在浓度依赖关系。三种毒素对神经胶质瘤细胞SWO的杀伤作用明显强于对正常细胞3T3的杀伤作用，说明毒素对细胞的杀伤是有选择性的，可望开发出针对人神经胶质瘤的特异性药物。
徐科,陈丽筠,江明恃[6]（1985）在《金环蛇神经毒素与乙酰胆碱受体结合的特点》文中认为进一步纯化了前一工作中从广西省产金环蛇（Bungarus fasciatus）蛇毒分离的突触后毒素Ⅰ和Ⅱ。以超饱和剂量的毒素Ⅰ或Ⅱ先与从电鳐（Narcine maculata）电器官得到的乙酰胆碱受体（AChR）保温10min 或 lh,再加入125Ⅰ-标记α-银环蛇毒素或125Ⅰ-标记眼镜蛇毒素,继续保温10min 或 lh,由测定与 AChR 结合的放射性强度得知,如以未经毒素Ⅰ或Ⅱ预饱和的放射性强度为100%,则经与其一预饱和者的约为30%,即毒素Ⅰ或Ⅱ只竞争地阻遏了α-银环蛇毒素或眼镜蛇毒素与 AChR 结合能力的2/3左右。文中讨论了存在两种类型 AChR 的可能性。
孙欣,龚潮梁,潘淑英,樊剑英,何其伟[7]（1985）在《丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体（AChR）某些生化性质的研究》文中认为本文报道了丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体蛋白（AChR）的某些生化性质。纯化的AChR经聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,呈现一个主要蛋白带,经测定,表观分子量为440,000,与125I-α-Bgt-AChR复合物的分子量相一致。等电聚焦电泳测得纯化AChR和125I-α-BgtAChR的等电点（pI）分别为4.9和5.2;经SDS—聚丙烯酰胺梯度（4％—30％）凝胶电泳,纯化的AChR解离成三个主要亚基蛋白带,它们的表观分子量分别为38,000,42,000和66,000,其中前两个亚基的含量很高,约占总数75％。氨基酸组成分析表明,丁氏双鳍电鳐电器官AChR由18种氨基酸组成,（色氨酸未测定）,其中酸性氨基酸含量很高,占总数的20％以上,说明纯化的AChR是一个复杂结构的酸性蛋白大分子。
龚潮梁,孙欣,何其伟,薛涛云,李淑颜,赵延德[8]（1981）在《银环蛇（Bungarus multicinctus）毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化》文中研究表明本文报导了用CM-Sephadex C-50分离广东产银环蛇毒,得到十三个蛋白组份。测定了九种酶在这些组份中的分布、五个主要毒性组份的神经肌肉阻断作用和小鼠的LD50。小鸡颈二腹肌神经肌肉阻断作用试验表明组分3及组分6显示突触后膜阻断作用,组份9、组份10及组份11为突触前膜阻断作用。对主要的突触后膜毒素组份3进一步用凝胶过滤和离子交换层析进行纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯一的α-银环蛇毒素。
毛庆武,朱艳萍,曾宏逵,王宇,乌乃侯,袁晓璞,张丽民,陈杞,孙洁[9]（1981）在《α-银环蛇毒素的分离提纯和碘标记》文中研究说明本文介绍了α-银环蛇毒素的分离提纯、碘标记和鉴定。用羧甲基葡聚糖C-50离子交换层析和葡聚糖G-25层析,从湖南银环蛇毒液中制备出纯α-银环蛇毒素。均质α-银环蛇毒素是用羧甲基纤维素CM-32重层析纯α-银环蛇毒素（第3峰）而获得。 用氯胶-T法进行125I标记α-银环蛇毒素。经Sephadex G-25柱层析分离纯化,产品放射性比度为90～100Ci/mM,标记率40～50％,蛋白回收率40～60％,游离碘含量小于3％。用测定N-末端氨基酸,氨基酸成分,等电点和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯α-银环蛇毒素的鉴定。以小白鼠毒性,神经肌肉阻断作用和结合胆硷能受体等测定α-银环蛇毒素的生物活性。
二、银环蛇(Bungarus multicinctus)毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、银环蛇(Bungarus multicinctus)毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化（论文提纲范文）
（1）尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）蛇毒中抑制回肠平滑肌收缩的蛋白组分（DA-1）的分离纯化及其生化与药理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 引言 |
| 1.1 研究目的和意义 |
| 1.2 本研究的主要内容. |
| 1.2.1 粗毒制备 |
| 1.2.2 粗毒的药理活性鉴定 |
| 1.2.3 肌肉收缩抑制蛋白分离纯化 |
| 1.2.4 肌肉收缩抑制蛋白的理化性质及生化药理活性研究 |
| 1.3 本研究的技术路线. |
| 2 尖吻蝮蛇毒中DA-1 的分离纯化与鉴定 |
| 2.1 主要仪器与设备 |
| 2.2 材料与试剂 |
| 2.2.1 药品 |
| 2.2.2 试剂及配置 |
| 2.3 方法与步骤 |
| 2.3.1 样品制备 |
| 2.3.2 柱层析分离纯化 |
| 2.3.3 蛇毒分离组分活性测定 |
| 2.3.4 蛇毒组分层析分离效果及纯度鉴定 |
| 2.3.5 DA-1 蛋白分子量测定 |
| 2.3.6 DA-1 肽质量指纹图谱鉴定 |
| 2.3.7 DA-1 蛋白含量测定 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 DA-1 的分离纯化 |
| 2.4.2 DA-1 的纯度鉴定 |
| 2.4.3 DA-1 分子量测定 |
| 2.4.4 DA-1 肽质量指纹图谱鉴定 |
| 2.4.5 DA-1 浓度测定 |
| 2.5 讨论 |
| 3 尖吻蝮蛇毒中DA-1 的生化及药理活性鉴定 |
| 3.1 主要仪器与设备 |
| 3.2 材料与试剂 |
| 3.2.1 药品 |
| 3.2.2 试剂及配置 |
| 3.3 方法与步骤 |
| 3.3.1 DA-1 生化活性测定 |
| 3.3.2 DA-1 药理活性测定 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 DA-1 的生化活性测定 |
| 3.4.2 DA-1 的药理活性测定 |
| 3.5 讨论 |
| 4 全文小结 |
| 5 文献综述 |
| 6 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（2）舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1优化分离及其活性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间研究成果 |
| 致谢 |
（3）蛇毒中非成瘾性止痛剂的研究进展（论文提纲范文）
| 1 非成瘾性止痛剂研究意义及目前国内外研究动态 |
| 1.1 非成瘾性止痛剂的研究意义 |
| 1.2 国内外研究动态 |
| 2 蛇毒中筛选非成瘾性止痛剂的意义和可行性 |
| 2.1 蛇毒中筛选非成瘾性止痛剂的意义 |
| 2.2 蛇毒中筛选非成瘾性止痛剂的可行性 |
| 3 国内外可获得非成瘾性止痛剂 (蛇毒神经毒素) 的蛇毒资源 |
| 3.1 蛇毒神经毒素分类及主要来源 |
| 3.2 各种蛇毒神经毒素的发现情况 |
| 4 蛇毒中止痛剂的纯化及药理实验方法 |
| 4.1 分离纯化 |
| 4.2 常用镇痛生物活性实验方法 |
| 4.3 蛇毒神经毒素作为镇痛剂的镇痛作用机理研究 |
| 5 蛇毒中止痛剂研究的现状与发展趋势 |
（4）江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 冰茶栓靶基因及靶药物的筛选研究 |
| 一、 冰茶栓差异表达基因的筛选研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 冰茶栓治疗后戒断症状评分 |
| 2 总RNA抽提及纯化结果 |
| 3 基因芯片的扫描结果 |
| 4 差异表达基因筛选结果 |
| 5 空白组猴与海洛因依赖猴戒断时基因表达差异 |
| 6 冰茶栓治疗后与海洛因依赖猴戒断时基因表达差异 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 冰茶栓对海洛因依赖猴的治疗作用 |
| 2 受体与相关基因芯片的作用 |
| 3 内源性阿片肽与吗啡依赖内在基因差异 |
| 4 冰茶栓治疗对基因表达的影响 |
| 二、 均匀设计对靶药物的确定 |
| (一) 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 不同组方的镇痛时效关系 |
| 2 配方优化 |
| (三) 分析与讨论 |
| 三、 小结 |
| 四、 参考文献 |
| 第二部分 江浙蝮蛇毒组分的分离纯化和镇痛C4组分的筛选及其理化性质研究 |
| 一、 江浙蝮蛇毒的分离纯化 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| (二) 结果 |
| 1 不同分离介质分离效果比较 |
| 2 江浙蝮蛇毒主峰纯化条件筛选 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 江浙蝮蛇毒组分复杂性与可分离性 |
| 2 分离参数的优化及相对性 |
| 二、 C4组分的筛选及理化性质研究 |
| (一) 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| (二) 结果 |
| 1 江浙蝮蛇毒各组分的镇痛效果 |
| 2 镇痛组分的理化性质 |
| 3 镇痛组分的耐受性和依赖性 |
| (三) 分析与讨论 |
| 1 镇痛组分的确定 |
| 2 C4组分与磷脂酶的性质比较 |
| 三、 小结 |
| 四、 参考文献 |
| 第三部分 江浙蝮蛇毒镇痛C4组分的中枢作用研究 |
| 一、 材料和方法 |
| (一) 材料 |
| 1 动物 |
| 2 江浙蝮蛇毒C4组分 |
| 3 药品 |
| 4 仪器 |
| (二) 方法 |
| 1 阿托品实验 |
| 2 利血平实验 |
| 3 纳络酮实验 |
| 4 侧脑室给药实验 |
| 5 脊髓化鼠模型 |
| 6 大鼠足跖定压刺激法 |
| 7 不同脑区药物作用实验 |
| 二、 结果 |
| (一) 阿托品对C4组分镇痛效果的影响 |
| (二) 利血平对C4组分镇痛效果的影响 |
| (三) 纳络酮对C4组分镇痛效果的影响 |
| (四) 侧脑室给药C4组分的镇痛效果 |
| (五) 大鼠脊髓化鼠实验结果 |
| (六) 大鼠足跖定压刺激法实验结果 |
| (七) 不同脑区内源性阿片肽的分布 |
| 三、 分析与讨论 |
| (一) C4组分与药物相互作用对神经递质的影响 |
| (二) 江浙蝮蛇毒C4组分的中枢作用 |
| (三) 江浙蝮蛇毒C4组分的中枢作用部位 |
| 四、 小结 |
| 五、 参考文献 |
| 第四部分 应用微透析技术探索江浙蝮蛇毒镇痛C4组分对中枢内阿片肽的调控机理 |
| 一、 材料与方法 |
| (一) 材料 |
| 1 动物造模所需材料 |
| 2 血液采集所需材料 |
| 3 微透析实验所需材料 |
| 4 测定所需材料 |
| (二) 方法 |
| 1 动物造模 |
| 2 分组 |
| 3 麻醉 |
| 4 探针定位 |
| 5 透析液收集 |
| 6 给药方法 |
| 7 取血 |
| 8 测定 |
| 二、 结果 |
| (一) 吗啡造模大鼠体重变化 |
| (二) 透析膜回收率 |
| (三) 吗啡依赖大鼠脑组织间液神经肽的改变 |
| (四) 江浙蝮蛇毒C4组分对组织间液神经肽的影响 |
| (五) 单次给药与多次给药的比较 |
| (六) 脑透析液在不同时间神经肽的动态变化 |
| (七) 血浆放免测定的标准曲线 |
| (八) 血液中内阿片肽的含量变化 |
| 三、 分析与讨论 |
| (一) 吗啡依赖对内阿片肽的影响 |
| (二) 江浙蝮蛇毒C4组分对内阿片肽的作用 |
| (三) 江浙蝮蛇毒C4组分对外周血的内阿片肽的作用 |
| 四、 小结 |
| 五、 参考文献 |
| 全文讨论 |
| (一) 论证了中医药理论对阿片成瘾认识的科学性 |
| (二) 江浙蝮蛇毒中靶成分的确定 |
| (三) C4组分主要通过对脑啡肽调控发挥镇痛作用 |
| 全文小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 论着 |
| 附: |
| 文献综述(一) |
| 文献综述(二) |
（5）银环蛇粗毒的分离及其有效组分作用于人神经胶质瘤SWO细胞的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 蛇毒 |
| 1.2 银环蛇蛇毒 |
| 1.3 细胞凋亡 |
| 1.4 蛇毒与细胞死亡 |
| 1.5 神经胶质瘤与细胞凋亡 |
| 1.6 本研究的目的和意义 |
| 第二章 银环蛇毒素的分离纯化 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法和步骤 |
| 2.3.1 银环蛇毒素的分离纯化 |
| 2.3.2 毒素蛋白含量测定 |
| 2.3.3 毒素的LD_（50）毒性测定 |
| 2.3.4 毒素分子量的鉴定 |
| 2.4 实验结果和分析 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 银环蛇粗毒及其有效组分作用于人神经胶质瘤SWO细胞的研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 主要使用仪器 |
| 3.3 实验方法和步骤 |
| 3.3.1 样品的配制 |
| 3.3.2 细胞培养 |
| 3.3.3 倒置显微镜观察 |
| 3.3.4 MTT比色实验 |
| 3.3.5 DNA实验 |
| 3.3.6 流式细胞仪实验 |
| 3.3.7 扫描电镜实验 |
| 3.4 实验结果和分析 |
| 3.5 小结 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间发表文章 |
（7）丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体（AChR）某些生化性质的研究（论文提纲范文）
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 纯化AChR的表观分子量 |
| 纯化AChR的亚基组成及其表观分子量 |
| 纯化AChR和125I-a-Bgt-AChR的等电点 |
| 纯化AChR的氨基酸组成分析 |
| 讨论 |
四、银环蛇(Bungarus multicinctus)毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化（论文参考文献）
- [1]尖吻蝮（Deinagkistrodon acutus）蛇毒中抑制回肠平滑肌收缩的蛋白组分（DA-1）的分离纯化及其生化与药理研究[D]. 刘刚. 重庆师范大学, 2015(10)
- [2]舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1优化分离及其活性研究[D]. 周升铭. 广州医学院, 2011(05)
- [3]蛇毒中非成瘾性止痛剂的研究进展[J]. 郑文果,苑隆国. 蛇志, 2003(04)
- [4]江浙蝮蛇毒镇痛C4组分提取纯化及其对内阿片肽调控机理研究[D]. 叶勇. 浙江中医学院, 2003(03)
- [5]银环蛇粗毒的分离及其有效组分作用于人神经胶质瘤SWO细胞的研究[D]. 邢少璟. 暨南大学, 2001(01)
- [6]金环蛇神经毒素与乙酰胆碱受体结合的特点[J]. 徐科,陈丽筠,江明恃. 生理学报, 1985(02)
- [7]丁氏双鳍电鳐（Narcine timlei）电器官烟碱型乙酰胆碱受体（AChR）某些生化性质的研究[J]. 孙欣,龚潮梁,潘淑英,樊剑英,何其伟. 动物学研究, 1985(01)
- [8]银环蛇（Bungarus multicinctus）毒柱层析分离及其组份的活性测定和α-银环蛇毒素的纯化[J]. 龚潮梁,孙欣,何其伟,薛涛云,李淑颜,赵延德. 动物学研究, 1981(S1)
- [9]α-银环蛇毒素的分离提纯和碘标记[J]. 毛庆武,朱艳萍,曾宏逵,王宇,乌乃侯,袁晓璞,张丽民,陈杞,孙洁. 第二军医大学学报, 1981(04)