导读:本文包含了猪瘟病毒囊膜糖蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:猪瘟,病毒,蛋白,佐剂,基因,免疫,杆状。
猪瘟病毒囊膜糖蛋白论文文献综述
高莹,白娟,宋中宝,姜平[1]（2019）在《猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白在昆虫细胞中的分泌表达与免疫特性研究》一文中研究指出以猪瘟病毒石门株E2囊膜糖蛋白基因序列为基础,构建了3种重组杆状病毒rAc-E2、rAc-E2oKm和rAc-HE2oKm。Western-blot和间接免疫荧光试验结果显示,这3种重组杆状病毒均可正确表达重组E2蛋白,与E2蛋白和His的单克隆抗体均有良好的抗原反应特性,其中rAc-HE2oKm可分泌表达重组E2蛋白,可形成病毒样颗粒,可诱导免疫仔猪产生高水平抗体和中和抗体,免疫效果与猪瘟活疫苗相当,为猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗研究奠定了重要基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年08期）
徐倩倩,张小敏,景娇,师保浚,王世旗[2]（2015）在《热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果》一文中研究指出为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上叁种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显着提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显着增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。(本文来源于《病毒学报》期刊2015年04期）
徐倩倩[3]（2015）在《副猪嗜血杆菌热休克蛋白Hsp70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0和E2的免疫效果研究》一文中研究指出猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一类高度接触性传染病,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,在我国被列为动物一类传染病。CSFV是有囊膜的正链RNA病毒,基因组大小约12.3kb,编码4个结构蛋白(C、E0、E1、E2)以及至少7个非结构蛋白(Npro、P7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。囊膜糖蛋白E0和E2是病毒诱导机体产生中和抗体的两个主要保护性抗原,同时也是病毒吸附进入敏感细胞的必需蛋白。其中E0蛋白具有RNase活性,可引起动物的淋巴和上皮细胞凋亡,导致免疫抑制,并且能诱导机体产生免疫反应,抵抗CSFV的攻击。猪瘟E2蛋白是能够诱导机体产生特异性抗体的主要结构蛋白,一直是研究的热点。E2蛋白主要由C端的跨膜区、N端的信号肽和中间的氨基酸区域组成,通过自身形成同源二聚体或与E1蛋白形成异源二聚体从而在病毒囊膜上发挥其生物学作用。目前控制CSF的主要手段是接种疫苗,虽然兔化弱毒疫苗是目前抗CSF最优秀的疫苗之一,在世界各国净化CSF过程中发挥了重要作用,但是却具有难以鉴别诊断的缺点。加上慢性感染、隐性感染等非典型猪瘟的散发流行,也会导致疫情难以控制或免疫失败,引起巨大的经济损失。因此,研制新型猪瘟疫苗仍然是有效控制CSF的策略之一。热休克蛋白(Hot shock protein,Hsp),通常被称为应激蛋白或蛋白分子伴侣,可作为免疫原性蛋白与病毒连接成显性抗原,进而激发机体产生相应的抗体或CTL,从而激发宿主的特异性抗病毒免疫,因此被广泛应用于新型疫苗的研制。根据Hsp的相对分子质量,主要的Hsp被分成6个家族:大分子量Hsp家族、Hsp90家族、Hsp70家族、Hsp60家族、小分子量Hsp家族和泛素。其中Hsp70是最为重要的一种蛋白质,已显示在肿瘤和细胞内源性病毒感染中有重要作用,其相关研究也最多最深入。Hsp70本身具有很多种生物学功能,包括分子伴侣,参与免疫反应,抵御细胞凋亡,抗氧化,提高细胞的应激耐受性,参与细胞骨架的形成和修复等,其广泛的生物学功能使其成为当今生命科学研究中的热点。为了初步探索热休克蛋白Hsp70作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌 Hsp70 的 pColdI-Hsp70 中,构建了 pColdI-EO 和 pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了 E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白,将以上叁种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠。同时,为了分析Hsp70在E2疫苗保护上的作用,将Hsp70蛋白与杆状病毒表达的真核E2蛋白(gE2)混合分别或混合注射小鼠和家兔。通过ELISA、流式细胞术和细胞因子等方法测定了小鼠针对E0和E2蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显着提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。同时,相比于单独的gE2免疫,与Hsp70混合能诱导更高和更持久的体液免疫和细胞免疫应答,并且能诱导兔体产生中和抗体,提供一定的攻毒保护。研究结果表明Hsp70能显着增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0、E2在小鼠和家兔上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。(本文来源于《南京农业大学》期刊2015-04-01）
高斌,冯励,付晓萍,李永强[4]（2012）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的克隆表达》一文中研究指出为了研究不同时间段细胞MHC分子表达的变化情况,从分子水平上说明E2基因与NHC之间的关系。本研究克隆了中国猪瘟病毒强毒石门毒株E2基因,构建了pcDNA3.0真核表达质粒P-E2基因。限制性内切酶进行双酶切和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。构建成功的真核表达质粒P-E2,用脂质体转染方法瞬时转染进行体外细胞表达,转染后24、48h后用Western-blot和间接免疫荧光技术检测P-E2基因质粒在PK-15细胞内的表达情况。结果表明:用His抗体进行间接免疫荧光检测发现E2基因得到表达,并定位于细胞浆,同时Western-blot检测后发现重组质粒P-E2转染后也在PK-15细胞中得到了表达。为进一步研究猪瘟病毒与宿主细胞之间的关系,病毒的致病机理提供了基础材料。(本文来源于《中国农学通报》期刊2012年17期）
周斌,刘珂,魏建超,陈溥言[5]（2011）在《整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒微量中和试验的建立和初步应用》一文中研究指出将构建的真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012分别与MuLV假型病毒构建体系的2种骨架载体pHIT60和pHIT111经磷酸钙瞬时共转染293T细胞,48h后收集假病毒上清,超速离心后用抗CSFV多抗通过Western blot分析发现只有E012蛋白能够在假病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到假型病毒粒子表面。将此假病毒(MuLV-E012)感染SK6、PK-15、ST、BHK21、Vero、COS7、293T和CEF等8种细胞,48h后检测发现只有在SK6、PK-15和ST等猪源细胞中标记基因LacZ能有效表达,表明所构建的假病毒具有感染性,只能感染猪源细胞,进一步证实了猪瘟病毒对猪的单一嗜性,并且感染性与NH4Cl浓度存在极显着的线性负相关性,结果表明猪瘟病毒进入宿主细胞的过程有pH依赖性。将假病毒MuLV-E012代替强毒Shimen株与标准阴性、阳性血清和倍比稀释的待检血清混合后感染PK-15细胞,建立了微量中和试验,与全病毒微量中和试验进行了比较,结果表明所建立的方法能够代替强毒进行血清中和试验,检测临床血清的猪瘟病毒抗体中和效价。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2011年11期）
万婧,陈宁,童超,廖迅,谢文绮[6]（2011）在《猪瘟病毒浙江分离株体外生长特性及其囊膜糖蛋白E2分子的变异分析》一文中研究指出为了研究分离于浙江省衢州和杭州的2株猪瘟病毒基因2型流行毒株QZ-07、HZ1-08在猪肾细胞(PK-15)和猪睾丸细胞(ST)中的生长特性及其囊膜糖蛋白E2的分子进化特征,采用间接免疫荧光、效价测定和进化分析等分子生物学方法将基因2型流行毒株与基因1型石门株进行了比较。结果表明,石门株在PK-15细胞中的增殖效率明显高于ST细胞;感染PK-15细胞后第48小时,细胞内的效价可达107TCID50/mL,而在ST细胞中的效价只有105.25 TCID50/mL。基因2型毒株在PK-15细胞中的增殖水平明显低于ST细胞,尤其以HZ1-08株更为明显;感染ST细胞后第48小时,细胞内的效价为105 TCID50/mL,而PK-15细胞中的效价只有102.75 TCID50/mL。两基因型毒株E2的核苷酸同源性低于90%,氨基酸同源性约为90%。表明,基因2型毒株的体外生长特性及其E2的分子特性均与基因1型毒株存在差异。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2011年08期）
宁红梅,葛亚明,岳锋,王选年,银梅[7]（2010）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2研究进展》一文中研究指出猪瘟(classical swine fever,CSF)是危害养猪业的主要传染病之一,致病原是猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV),E2囊膜糖蛋白是CSFV的主要抗原蛋白。本文对E2蛋白的分子结构、抗原特性、对病毒毒力的影响和在进入靶细胞过程中的作用等4个方面的研究现状进行了阐述。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2010年06期）
刘珂[8]（2008）在《猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白B-cell线性化表位的表达及免疫活性研究》一文中研究指出本实验利用含猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)全基因的质粒为模板,扩增囊膜糖蛋白E2中B/C抗原区和A╱D抗原区的线性化B-Cell表位。扩增了两个单独的基因片段(E2蛋白A╱D区和B/C区基因序列)与一个以上两基因片段融合的基因片段(E2蛋白A/D区连接B/C区基因序列),将扩增的叁个片段分别插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组表达质粒pTA,pTB和pTC。将构建成功的阳性质粒转化原核表达菌BL21(DE3),对转化重组菌用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行优化,使目的蛋白得到高效表达。应用Ni-NTA亲和层析柱纯化叁种重组蛋白,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定其纯化效果,并用Western-blot检验重组蛋白对猪瘟阳性血清特异的反应原性。在此基础上,将叁种纯化的蛋白定量后等体积混合弗氏佐剂免疫猪。经过两次免疫后检测免疫动物的猪瘟特异性抗体消长和免疫相关细胞因子变化情况。结果表明,叁种蛋白均可刺激机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,pTC蛋白的免疫效果明显优于另两种蛋白,并且非常接近商品化细胞疫苗的免疫效果,pTB和pTC刺激机体产生的猪瘟抗体均达到阳性。叁种重组蛋白诱导的细胞因子应答符合免疫应答规律。说明叁种重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫效果。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2008-06-17）
魏巍,刘璇,黄小国,李卫东,刘珂[9]（2008）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的原核表达及重组蛋白ELISA应用》一文中研究指出本试验优化了含有原核质粒pET-A/D的BL21(DE3)大肠杆菌的表达条件,结果表明诱导的最佳时间和诱导剂IPTG的最佳用量分别为3h和0.1 mmol/L。在此基础上,大量诱导表达蛋白质后用Ni-IDA蛋白质层析柱进行纯化,Western-blot鉴定纯化蛋白具有抗原活性,方阵滴定法确定了重组蛋白的最佳包被量为0.5μg/孔。应用建立的ELISA方法对规模化猪场仔猪母源抗体消长进行了监测,确定了猪瘟疫苗的首免时间为42日龄。研究结果表明,ELISA方法操作简便、快速、敏感性高、特异性强等优点,适合基层兽医单位应用。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2008年06期）
刘瑞峰[10]（2008）在《猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的表达研究及其单克隆抗体的制备》一文中研究指出猪瘟(classical swine fever;CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus;CSFV)引起的猪的一种高度接触性、急性传染病,以发热和出血为主要特征。CSFV囊膜糖蛋白E2含有A、B、C、D四个抗原结构域,是其最主要的保护性抗原,它能够诱导机体产生中和抗体,并保护猪抵抗强毒的攻击。E2最易变异,是CSFV叁种糖蛋白中保守性最低的蛋白,常用于基因工程疫苗和鉴别诊断的靶目标,一直都是CSFV研究的热点。本研究中分别采用原核表达系统和杆状病毒表达系统对E2蛋白进行了表达,并制备了3株抗CSFV E2蛋白的单克隆抗体,为猪瘟病原快速诊断方法的建立奠定了基础。1.CSFV E2蛋白在原核和杆状病毒系统中的表达研究我们首先分析CSFV E2蛋白的特性,选择用原核表达系统表达E2基因的不同抗原表位区。根据E2基因序列,设计并合成2对引物,分别用于扩增E2基因ABCD抗原区和AD抗原区。将扩增得到的不同E2基因的片段克隆至pMD18-T载体中,获得pT-E2/ABCD和pT-E2/AD重组质粒。经核苷酸序列测定,E2基因ABCD抗原区和AD抗原区分别长645bp和300bp,编码215个氨基酸和100个氨基酸。将得到的不同抗原区基因片段克隆至pGEX-KG表达载体中获得了重组表达载体pKGE2ABCD和pKGE2AD,与载体GST蛋白形成融合表达蛋白。经鉴定后,转化大肠杆菌BL21-condonplus-RIL感受态细胞,IPTG诱导表达。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达蛋白为融合蛋白,分子量分别约为50kDa和36kDa,表达产物主要以包涵体的形式存在;Western blot检测表明,表达产物能与CSFV阳性血清发生特异性反应,具有良好的生物学活性。杆状病毒表达系统常用于外源病毒蛋白的表达,表达的蛋白能够保持良好的抗原性。在本研究中,我们选择杆状病毒Bac to Bac表达系统。用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pT-E2,回收E2片段,克隆至pFastBac-HT载体中构建了pFastBac-E2;转化DH10Bac感受态细胞并在菌体中发生转座,构建了重组杆状病毒穿梭表达载体Bacmid-E2,经PCR鉴定证实E2基因成功整合到了杆状病毒基因组。最后转染Bacmid-E2到SF-9细胞,获得重组杆状病毒,连续扩大病毒3代后用于蛋白表达。间接免疫荧光结果显示感染重组杆状病毒的sf9昆虫细胞可以发荧光,但反应不强,目的蛋白表达量太低,不能用于后续研究。2.猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备将上述原核表达的蛋白纯化后,免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。用间接ELISA法进行筛选,采用有限稀释法对其进行克隆,经过3次融合共获得3株能稳定分泌抗CSFV E2蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为4H5、1C7和4H4。其中4H5和1C7株为针对E2 ABCD表位单克隆抗体,4H4为针对E2 AD表位单克隆抗体。细胞上清和腹水的效价分别为0.4×10~3、0.8×10~3、0.4×10~3和0.2×10~6、0.5×10~5、0.4×10~6,抗体类型为IgG2a、IgG2b和IgG1。间接免疫荧光试验显示3株单克隆抗体都可以和CSFV发生特异性结合,其中4H5和4H4和病毒的反应强于1C7。Western blot检测结果表明,4H5和4H4均可以和CSFV发生反应。(本文来源于《华中农业大学》期刊2008-06-01）
猪瘟病毒囊膜糖蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白。将以上叁种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果。结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显着提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-γ的释放。研究结果表明Hsp70能显着增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
猪瘟病毒囊膜糖蛋白论文参考文献
[1].高莹,白娟,宋中宝,姜平.猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白在昆虫细胞中的分泌表达与免疫特性研究[J].中国兽医科学.2019
[2].徐倩倩,张小敏,景娇,师保浚,王世旗.热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果[J].病毒学报.2015
[3].徐倩倩.副猪嗜血杆菌热休克蛋白Hsp70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0和E2的免疫效果研究[D].南京农业大学.2015
[4].高斌,冯励,付晓萍,李永强.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的克隆表达[J].中国农学通报.2012
[5].周斌,刘珂,魏建超,陈溥言.整合猪瘟病毒囊膜糖蛋白假型鼠白血病病毒微量中和试验的建立和初步应用[J].畜牧兽医学报.2011
[6].万婧,陈宁,童超,廖迅,谢文绮.猪瘟病毒浙江分离株体外生长特性及其囊膜糖蛋白E2分子的变异分析[J].中国兽医科学.2011
[7].宁红梅,葛亚明,岳锋,王选年,银梅.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2研究进展[J].江苏农业科学.2010
[8].刘珂.猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白B-cell线性化表位的表达及免疫活性研究[D].湖南农业大学.2008
[9].魏巍,刘璇,黄小国,李卫东,刘珂.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的原核表达及重组蛋白ELISA应用[J].畜牧与兽医.2008
[10].刘瑞峰.猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的表达研究及其单克隆抗体的制备[D].华中农业大学.2008
论文知识图
