导读:本文包含了核糖体展示论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:核糖体展示,抗体,选择,蛋白质进化
核糖体展示论文文献综述
郭园[1]（2016）在《核糖体展示研究进展》一文中研究指出核糖体展示是一种无细胞系统,可以从文库中筛选蛋白质和多肽。翻译的蛋白质及其mRNA同时结合在核糖体上形成mRNA-核糖体-蛋白质叁聚体,通过配体亲和分离得到功能性蛋白及其编码的mRNA,转换成对应的DNA后进行相关蛋白的表达,可用于抗体及蛋白质文库选择、蛋白质体外改造等,而且其可以展示较大的文库而不受细菌转化的限制,可对毒蛋白、蛋白酶敏感和不稳定的蛋白质进行筛选,也可在特定位点进行氨基酸修饰。就核糖体展示技术的研究进展及其在蛋白质进化和筛选方面的应用进行综述。(本文来源于《生物技术通报》期刊2016年08期）
程海卫,陈一飞,丁豪杰,杨怡,卓洵辉[2]（2016）在《大容量天然鼠源核糖体展示单链抗体文库的构建与鉴定》一文中研究指出为了构建大容量、天然鼠源核糖体展示(ribosome display,RD)单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库。通过提取SPF级小鼠脾脏总RNA,反转录为cDNA,利用引物分别扩增鼠抗体的VH、VL和Cκ基因,采用重迭延伸PCR(SOE-PCR)方法,通过Linker((Gly4Ser)3)相互拼接,构建单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经连接转化,对所构建基因文库进行菌落PCR鉴定和序列测定分析。所构建核糖体展示基因文库库容量约为5.6×1013,基因片段全长大小约为1 100bp,基因文库序列具有较好的完整性和多样性。本试验成功构建了一个大容量、天然鼠源核糖体展示单链抗体文库,为进一步筛选单链抗体奠定基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年05期）
李敏[3]（2015）在《核糖体展示纳米抗体文库的构建及HIF-1α纳米抗体的筛选》一文中研究指出核糖体展示技术是一种新型体外筛选分子进化功能性蛋白质的强有力的工具。该技术将基因型和表型联系在一起,无细胞环境下形成叁元复合物mRNA-核糖体-蛋白质,进而从蛋白展示文库中找到编码针对目标蛋白的基因序列,这已成功应用于scfv抗体库的构建和筛选。纳米抗体具有分子小,水溶性高,稳定性强,免疫原性低等多种优势,已在实验和医疗研究中展现出良好的应用前景。本课题通过核糖体展示技术构建了一个高容量的天然纳米抗体文库,并针对低氧诱导因子-1α的PAS-B(HIF-1α-PAS-B)结构域进行了高效的筛选,既验证了核糖体展示文库的可行性,又为新型抗体药物的发现奠定了基础。本实验选自澳洲羊驼外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA 10.4ug进行RT-PCR得到cDNA文库。利用PCR扩增VHH片段和间隔序列(geneШ,来自辅助噬菌体M13KO7),同时引入核糖体展示元件、酶切位点、组氨酸标签等。然后,采用重迭延伸PCR,将VHH片段和间隔序列重组构建核糖体展示纳米文库。通过测序鉴定,文库多样性和完整性显示良好,有效库容量为4.9×1012。同时经体外转录翻译试剂盒经Western-blot初步鉴定文库可以正常翻译。利用pGEX-4T-1-HIF-1α-PAS-B表达载体成功表达GST-HIF-1α-PAS-B蛋白,经GST亲和层析获得该融合蛋后经凝血酶酶切、纯化,成功获得具有筛选质量的抗原分子HIF-1α-PAS-B蛋白。最后利用核糖体展示技术进行四轮筛选,通过RT-PCR验证特异性抗体基因序列得到了有效富集。将筛选到的抗体片段克隆至噬菌粒载体Pcantab5E进而转化TG1,进行Phage Elisa鉴定与抗原结合的特异性,初步获得了针对HIF-1α的特异性纳米抗体。(本文来源于《天津大学》期刊2015-06-01）
王潇,王秀敏,管庆丰,滕达,姚军虎[4]（2015）在《特异性结合革兰氏阴性菌外膜蛋白C的单链抗体核糖体展示文库的构建》一文中研究指出以纯化的重组大肠杆菌外膜蛋白Omp C免疫BALB/c小鼠,提取骨髓浆细胞总RNA,逆转录获得c DNA,作为模板通过PCR扩增获得重链和轻链可变区序列。由(Gly4Ser)3 linker连接两片段,获得单链抗体可变区片段基因库。重迭延伸PCR添加T7启动子、核糖体结合位点、gⅢtether和两端茎环结构等元件,成功构建对外膜蛋白C具有特异性亲和力的单链抗体可变区的核糖体展示文库,为特异性强、亲和力高的单链抗体可变区筛选提供了技术和材料基础。构建能与革兰氏阴性菌外膜蛋白C特异性结合的鼠源单链抗体核糖体展示文库,是奠定构建饲料革兰氏阴性腐败菌分子预警和靶向抗菌剂的靶向定位区的高亲和力单链抗体可变区片段的重要基础,对建立有害革兰氏阴性菌分子检测方法和靶向抗革兰氏阴性菌菌剂设计方法具有借鉴作用。(本文来源于《中国饲料》期刊2015年09期）
郭永红,问娇,王俊红[5]（2015）在《利用PCR扩增及基因合成构建Adnectin半随机核糖体展示文库》一文中研究指出目的构建Adnectin半随机的核糖体(mRNA)展示文库。方法分析Adnectin核糖体展示文库结构序列的编码氨基酸序列,利用无意突变建立酶切位点,使用PCR扩增和基因合成两种方法相结合,构建Adnectin半随机核糖体展示文库,通过限制性内切酶及DNA测序证实序列正确性,对文库转化菌的滴定和插入失活蓝白菌斑筛查和计数测定计算文库的库容。结果经测序证实文库结构的正确性,文库的库容为1.54×1013/m L。结论成功构建Adnectin半随机的核糖体展示文库,方法简单,库容量大,该文库的建成为亲和各种相关蛋白的Adnectin结合序列奠定基础。(本文来源于《山东医药》期刊2015年04期）
刘建青,孙垚,宁保安,李晓芳,高志贤[6]（2014）在《核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库的构建及初步鉴定》一文中研究指出脂质运载蛋白(lipocalin)是一类广泛存在于生物界的小分子蛋白质家族,具备一些抗体所没有的优点。为了构建库容量大、多样性好的核糖体展示模拟抗体Anticalin文库,本研究以脂质运载蛋白家族之一大菜粉蝶(Pieris brassicae)中提取到的胆汁叁烯结合蛋白基因(bilin-binding protein,bbp)(GenBank登录号:X76568.1)为模板,设计了包含16个随机突变位点的引物,采用重迭延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR)构建bbp基因文库。然后,利用SOE-PCR法引入核糖体展示元件(T片段与P片段),体外构建核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库。结果表明,本研究成功构建了模拟抗体Anticalin基因文库,其库容达到3.76×1023,文库的可扩增性、完整性及多样性良好,为筛选多种小分子化学残留的模拟抗体提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2014年09期）
秦燕,张玲云,张德玖[7]（2014）在《核糖体展示技术在非编码核酸研究中的应用》一文中研究指出非编码RNA(non-coding RNA)是一类内源性的不具有蛋白质编码功能的RNA分子,在细胞的生长增殖、发育、核内运输,甚至在肿瘤的发生中发挥着重要的作用。核糖体展示技术(ribosome profiling)是多聚核糖体分离和深度测序技术(deep sequencing)相结合的新兴组学技术,可以精确地测定正在被翻译的转录本并具有组学广度。对非编码RNA研究而言,这既是一个新的高度又是一门新的技术。系统阐述了核糖体展示技术的实验原理、目前研究取得的进展,以及在非编码RNA调控机理中的应用。(本文来源于《生命科学》期刊2014年03期）
秦燕,张玲云,张德玖[8]（2014）在《核糖体展示技术在非编码核酸研究中的应用》一文中研究指出非编码RNA(non-coding RNA)是一类内源性的不具有蛋白质编码功能的RNA分子,在细胞的生长增殖、发育、核内运输,甚至在肿瘤的发生中发挥着重要的作用。核糖体展示技术(ribosome profiling)是多聚核糖体分离和深度测序技术(deep sequencing)相结合的新兴组学技术,可以精确地测定正在被翻译的转录本并具有组学广度。对非编码RNA研究而言,这既是一个新的高度又是一门新的技术。系统阐述了核糖体展示技术的实验原理、目前研究取得的进展,以及在非编码RNA调控机理中的应用。(本文来源于《生命科学——专题：RNA研究的新技术和新方法（第26卷第3期）》期刊2014-03-01）
严浩,王芳,毛伟平,王文倩,孟素芳[9]（2013）在《抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建》一文中研究指出[目的]构建出鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库。[方法]通过RT-PCR从人B淋巴瘤细胞Daudi的总RNA中扩增出ICOSL胞外区基因,并将此基因插入到原核表达载体pET28a中进行表达。以表达纯化的ICOSL蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,取小鼠脾脏提取总RNA,通过RT-PCR扩增小鼠的重链可变区和Linker(VH-linker)序列,以及轻链可变区和Linker(Vκ-linker)序列。经重组PCR将两段基因连接起来,将VH/κ与pMD19-T载体链接产物转化E.coli DH 5α,PCR鉴定并测序。[结果]VH和κ链得到正确的扩增,长度分别为421和689 bp,VH/κ连接产物正确,连接产物长度为1 079 bp。[结论]所采用的引物及反应条件能够扩增出目的基因,成功构建了鼠源抗ICOSL核糖体展示抗体库,为进行核糖体展示体外筛选抗ICOSL特异性单链抗体奠定基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2013年33期）
刘建青,宁保安,高志贤[10]（2013）在《Lipocalin核糖体展示文库的构建及雌二醇特异性模拟抗体的筛选》一文中研究指出[目的]构建Lipocalin核糖体展示文库,并筛选雌二醇特异性模拟抗体。[方法]以Lipocalin蛋白家族中的BBP(胆汁叁烯结合蛋白)为模板,设计包含16个随机突变位点的引物,合成BBP基因文库;引入核糖体展示所必需的全部组件,采用重迭PCR技术将BBP库与核糖体展示组件进行拼接,构建核糖体展示Anticalin模拟抗体库;再将构建的Anticalin文库进行体外转录与翻译,产生模拟抗体-核糖体-mRNA叁联复合体文库。以小分子抗原雌二醇为靶标,采用固相亲和方法筛选抗雌二醇抗体,通过改变Mg2+浓度将模拟抗体-核糖体-mRNA叁联复合体解离,得到与模拟抗体对应的mRNA,经过RT-PCR得到筛选后的DNA文库并重新引入核糖体展示元件进行下一轮淘筛。[结果]通过5轮生物淘筛,模拟抗体得到富集,获得高特异性抗雌二醇抗体。其中有一株克隆的亲和力为54 mmol/L(Kon=4.975 6×104个/M·S;Koff=0.002 7个/S)。IC50与LOD值分别为50和0.071 ng/ml。[结论]获得的雌二醇模拟抗体可以作为抗体并用于检测动物体内雌二醇的残留。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2013年31期）
核糖体展示论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建大容量、天然鼠源核糖体展示(ribosome display,RD)单链抗体(single-chain fragment variant,scFv)文库。通过提取SPF级小鼠脾脏总RNA,反转录为cDNA,利用引物分别扩增鼠抗体的VH、VL和Cκ基因,采用重迭延伸PCR(SOE-PCR)方法,通过Linker((Gly4Ser)3)相互拼接,构建单链抗体scFv基因文库和核糖体展示基因文库;经连接转化,对所构建基因文库进行菌落PCR鉴定和序列测定分析。所构建核糖体展示基因文库库容量约为5.6×1013,基因片段全长大小约为1 100bp,基因文库序列具有较好的完整性和多样性。本试验成功构建了一个大容量、天然鼠源核糖体展示单链抗体文库,为进一步筛选单链抗体奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
核糖体展示论文参考文献
[1].郭园.核糖体展示研究进展[J].生物技术通报.2016
[2].程海卫,陈一飞,丁豪杰,杨怡,卓洵辉.大容量天然鼠源核糖体展示单链抗体文库的构建与鉴定[J].中国兽医学报.2016
[3].李敏.核糖体展示纳米抗体文库的构建及HIF-1α纳米抗体的筛选[D].天津大学.2015
[4].王潇,王秀敏,管庆丰,滕达,姚军虎.特异性结合革兰氏阴性菌外膜蛋白C的单链抗体核糖体展示文库的构建[J].中国饲料.2015
[5].郭永红,问娇,王俊红.利用PCR扩增及基因合成构建Adnectin半随机核糖体展示文库[J].山东医药.2015
[6].刘建青,孙垚,宁保安,李晓芳,高志贤.核糖体展示模拟抗体Anticalin基因文库的构建及初步鉴定[J].农业生物技术学报.2014
[7].秦燕,张玲云,张德玖.核糖体展示技术在非编码核酸研究中的应用[J].生命科学.2014
[8].秦燕,张玲云,张德玖.核糖体展示技术在非编码核酸研究中的应用[C].生命科学——专题：RNA研究的新技术和新方法（第26卷第3期）.2014
[9].严浩,王芳,毛伟平,王文倩,孟素芳.抗ICOSL核糖体展示单链抗体库的构建[J].安徽农业科学.2013
[10].刘建青,宁保安,高志贤.Lipocalin核糖体展示文库的构建及雌二醇特异性模拟抗体的筛选[J].安徽农业科学.2013