抗α毒素1D5单抗ScFv基因表达菌株生物学活性的研究

论文摘要

为研究抗A型魏氏梭菌α毒素ScFv蛋白的生物学功能,利用PCR技术克隆抗α毒素1D5单抗的ScFv基因,构建含ScFv基因表达质粒pHOG-1D5的重组表达菌株XL1-BLUE （pHOG-1D5）。酶切鉴定和序列分析证实构建的pHOG-1D5重组表达质粒含有ScFv基因,且基因序列和阅读框架正确。ELISA检测结果表明在重组菌株XL1-BLUE （pHOG-1D5）培养上清和细胞周质中均检测到目的蛋白。SDS-PAGE分析表明目的蛋白表达量占菌体总蛋白相对含量的29.2%。同时对ScFv蛋白生物学活性进行检测,结果表明其能中和α毒素的卵磷脂酶活性且能够对致死性腹腔攻击α毒素的小鼠产生良好的被动保护作用,从而为临床治疗α毒素中毒奠定了坚实基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 载体和菌株
•   1.2 试剂
•   1.3 重组表达质粒pHOG-1D5构建
•   1.4 XL1-BLUE （pHOG-1D5） 表达产物的SDS-PAGE分析和ELISA检测
•   1.5 IPTG诱导ScFv基因表达条件的优化
•     1.5.1 不同IPTG浓度对ScFv基因表达的影响
•     1.5.2 添加无机盐对ScFv基因表达的影响
•     1.5.3 不同蔗糖浓度对ScFv基因表达的影响
•     1.5.4 不同温度对ScFv基因表达的影响
•     1.5.5 不同诱导时间对ScFv基因表达的影响
•   1.6 ScFv蛋白生物学特性鉴定
•     1.6.1 α毒素粗提物最小致死剂量 （MLD） 测定
•     1.6.2 中和试验
•     1.6.3 小鼠保护试验
• 2 结果与分析
•   2.1 pHOG-1D5表达质粒的构建与鉴定
•   2.2 ScFv基因表达产物的SDS-PAGE分析和ELISA检测
•   2.3 不同诱导条件对ScFv基因表达的影响
•     2.3.1 不同IPTG浓度对ScFv基因表达的影响
•     2.3.2 添加无机盐对ScFv基因表达的影响
•     2.3.3 不同蔗糖浓度对ScFv基因表达的影响
•     2.3.4 不同培养温度对ScFv基因表达的影响
•     2.3.5 不同诱导时间对ScFv基因表达的影响
•   2.4 ScFv生物学特性检测
•     2.4.1 中和试验
•     2.4.2 ICR小鼠MLD测定
•     2.4.3 ScFv保护效果检测
•   2.5 组织学检查结果
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 许崇利,许崇波,林一民

关键词: 毒素,基因,表达,生物学活性

来源: 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,基础医学

单位: 重庆医药高等专科学校医学技术学院,韶关学院英东生命科学学院,重庆市肿瘤研究所

基金: 广东省自然科学基金资助项目(2018B0303110009)’,重庆医药高等专科学校自然科学技术研究项目(2019)

分类号: S852.61;R378

DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.02.007

页码: 47-53

总页数: 7

文件大小: 1926K

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