猪肾上皮细胞Ⅰ型干扰素受体1敲除对伪狂犬病毒复制的影响

论文摘要

目的探讨Ⅰ型干扰素受体1 （IFNAR1）对伪狂犬病病毒（PRV）复制的影响。方法以慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建猪肾上皮细胞（PK15）敲除IFNAR1基因的稳定细胞系。运用细胞活力检测、荧光观察、流式细胞术检测、滴度测定、Real-time PCR等技术进行IFNAR1功能验证。结果随着PRV感染时间延长,敲除IFNAR1基因可以显著促进PRV-TK mRNA的转录,PRV-gE蛋白的翻译以及子代病毒的毒力。结论IFNAR1在抑制PRV增殖中发挥重要作用。

论文目录

• 材料和方法
•   1．主要试剂材料
•   2．引物设计与合成
•   3. Cas9/sgRNA载体的构建
•   4. IFNAR1敲除细胞系的构建
•   5. T7核酸内切酶检测
•   6. CCK-8检测细胞增殖
•   7．光学显微镜观察细胞形态
•   8．荧光观察及流式细胞术检测
•   9. PRV感染力测定（TCID50）
•   1 0. Real-time PCR检测
•   1 1. Western blotting检测PRV-gE蛋白的表达
• 结果
•   1.Cas9/sgRNA载体的构建
•   2.IFNAR1基因敲除PK15细胞系的构建
•   3.IFNAR1基因敲除对PK15细胞增殖的影响
•   4.IFNAR1基因敲除对PK15细胞形态的影响
•   5.IFNAR1基因敲除对PRV-GFP病毒复制的影响
•   6.IFNAR1基因敲除对PRV-QXX病毒滴度的影响
•   7.IFNAR1基因敲除对PRV-TK和ISG15 mRNA水平的影响
•   8.IFNAR1基因敲除对PRV-gE蛋白表达的影响
• 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邵科宇,张爽,段利芳,马英先,郭玉堃,李佳佳,刘晓贺,杜永坤,褚贝贝

关键词: 猪肾上皮细胞,型干扰素受体,伪狂犬病病毒,基因编辑,免疫印迹法,实时定量聚合酶链反应

来源: 解剖学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南农业大学农业农村部动物生化与营养重点开放实验室

基金: 转基因生物新品种培育重大专项(2016ZX08006001-006),国家自然科学基金(31502031),霍英东教育基金会高等院校青年教师基金(151033),2019河南省重点研发与推广专项(192102110191)

分类号: S852.65

DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2019.06.007

页码: 741-746

总页数: 6

文件大小: 590K

下载量: 99