（广西河池市妇幼保健院广西河池547000）
【摘要】目的：探讨孕中期孕妇羊水细胞的培养及染色体核型。方法：此次实验选择了我院2014年5月—2016年5月收治的孕中期孕妇300例，于B超检查监护下为孕妇行羊膜腔穿刺术，将所抽的羊水行细胞培养与染色体核型分析。结果：经实验可得，300例孕妇中一次性羊水穿刺与细胞培养成功299例（99.7%）；胎儿染色体异常核型检出率为27例（9.0%），结构异常23例（7.7%）；数目异常8例（2.7%）。结论：羊水细胞培养与染色体核型分析安全可靠，对孕妇产前诊断具有重要作用。
【关键词】孕中期；羊水细胞培养；染色体核型
【中图分类号】R71【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2017）21-0262-02
染色体疾病会造成胎儿先天性畸形与智力低下、身体发育迟缓，孕中期孕妇羊膜腔穿刺术可于产前有效诊断胎儿染色体病，以便有效避免有疾病患儿的出生，降低新生儿出生缺陷发生率。此次实验选择了我院2014年5月-2016年5月收治的孕中期孕妇300例，于B超检查监护下为孕妇行羊膜腔穿刺术，将所抽的羊水行细胞培养与染色体核型分析，现将报道如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
此次实验选择了我院2014年5月—2016年5月收治的孕中期孕妇300例，孕妇年龄均于26～43岁之间，平均年龄为（32.74±5.61）岁；孕周均于17～28周之间，平均孕周为（23.93±4.12）周；经孕妇及其家属同意，行羊膜穿刺术与羊水细胞培养、染色体核型分析。
1.2方法
1.2.1羊水细胞培养
孕妇适当活动后以一次性羊水穿刺针于B超下抽羊水20毫升；将抽取的羊水以1分钟1500r离心10分钟，于无菌环境下去掉上面的清液，留0.5毫升的羊水细胞层，混合均匀后将其接种在2个培养瓶中，同时1瓶加入张氏羊水细胞培养基4毫升，另1瓶加入gibco羊水培养基4毫升，分别放在5%二氧化碳、37摄氏度不同的培养箱中进行培养；待7天后仔细观察细胞贴壁的生长情况，及时更换新鲜的培养液继续培养，之后每天都要观察细胞贴壁的生长情况，如果细胞贴壁生长情况良好，同时细胞生长数量达到规定要求，增长情况旺盛，此时便可收获；如果细胞数量并未达到收获标准，则要进行传代后继续培养，等到细胞生长到规定数量，同时增长旺盛时便可收获[1]。
1.2.2羊水细胞收获
给培养瓶中加入秋水仙素(10μg/ml)0.6ml，混合均匀后将其再置于培养箱中，待3个小时后收获，同时把已预温至37摄氏度的胰蛋白酶液加入培养瓶内2毫升，以37摄氏度消化5分钟之后再进行洗脱，洗脱液倒入离心管内用1分钟1800r离心8分钟；之后便加入4毫升37摄氏度预温低渗液，将其混匀之后，以37摄氏度水浴6分钟后，再加入固定液1毫升混匀后放在室温下6分钟进行预固定，离心沉淀之后再加入4毫升固定液，混合均匀后于室温下固定30分钟；上述固定步骤重复1次后加盖并置于4摄氏度冰箱中储存[2]。
1.2.3制片、显带、染色方法
将标本以1分钟2000r离心10分钟，将上面的清去掉后加入适当的新鲜固定液，混匀细胞团后制成适宜的细胞悬液，吸3滴细胞悬液后，滴在预冷的洁净载波片上，再把滴好的染色体放在75摄氏度鼓风干燥箱内烤3小时，之后再取出自然冷却，再进行常规G显带染色体制备[3]。
1.3核型分析
选择达标的20个核型，详细分析5个分裂相；异常核型：以异常种类不同情况为依据，计数50～100个核型，同时再分析核型数量，必要时要行C显带分析与N显带分析，严格确定异常染色体与染色体多态性，并于父母的核型进行分析[4]。
2.结果
经实验可得，300例孕妇中一次性羊水穿刺与细胞培养成功299例（99.7%）；胎儿染色体异常核型检出率为27例（9.0%），结构异常23例（7.7%）；数目异常8例（2.7%）。
3.讨论
30%～40%的出生缺陷患儿均是遗传因素导致的，而染色体疾病亦是新生儿出生缺陷的关键因素[5]。染色体数目或结构异常所致的疾病为染色体疾病，会造成胎儿智力低下、发育迟缓等方面情况，临床上对此症并无特效治疗方式，羊水细胞培养与染色体核型分析可于孕妇孕中期有效诊断出胎儿的染色体结构与数目异常等情况，对新生儿出生缺陷发生率降低有着重要作用[6]。
孕妇年龄与染色体异常情况发生率相关，孕妇年龄偏大时的生殖细胞老化快，减数分裂时的染色体会出现不分离情况，使得胎儿出现三体型[7]。年龄偏大是胎儿21-三体综合征的关键原因，但同时与其他三体型染色体疾病相关，降低新生儿出生缺陷发生率的关键，是要对大于35岁高危孕妇进行血清学筛查或者是羊膜腔穿刺[8]。已经生育过唐氏综合征患儿或其他染色体异常患儿的夫妻双方，其生育染色体异常胎儿的几率更大，而这已经构成了产前诊断指征，产前进行羊水细胞培养与染色体核型分析十分重要[9]。
夫妻双方中有一方为染色体异常者时，生育染色体异常胎儿几率高，胎儿二分之一的染色体是来自父亲，而剩下的二分之一是来自母亲，因此父母亲无论任何一方是染色体异常者，则胎儿极易出现染色体异常[10]。此次实验选择了我院2014年5月—2016年5月收治的孕中期孕妇300例，经羊水细胞培养、羊水细胞收获与制片、显带、染色后，核型分析得出300例孕妇中一次性羊水穿刺与细胞培养成功299例；胎儿染色体异常核型检出率为27例，结构异常23例；数目异常8例。
综上所述，具有产前诊断指征的孕妇，应及时进行羊水细胞染色体核型分析，严格准确的检出胎儿染色体异常情况，并能够提高数目异常类染色体疾病胎儿。羊水细胞培养与染色体核型分析安全可靠，于孕妇孕中期行羊水细胞培养与染色体核型分析，可及时发现染色体异常胎儿，施以选择性引产，可有效减少新生儿出生缺陷发生情况，对优生优育、家庭和谐有着极大现实意义。
【参考文献】
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[9]初云霞，贺方华.有产前诊断指征的孕中期孕妇进行羊水细胞染色体核型分析的意义[J].中国妇幼保健，2015，39(22):3856-3857.
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