导读:本文包含了分子内佐剂论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:佐剂,热肠,幽门,蛋白,螺杆,毒素,疫苗。
分子内佐剂论文文献综述
雷垚[1]（2019）在《基于不同分子内佐剂的A型、O型口蹄疫病毒二价多表位免疫原的初步研究》一文中研究指出口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染猪、牛、羊等偶蹄动物引起的一种急性、热性和高传染性动物疫病,可造成严重的经济损失。目前口蹄疫灭活疫苗仍是预防和控制口蹄疫的主要手段,但是鉴于灭活疫苗在生产中存在的安全隐患,研制新型安全有效的口蹄疫亚单位疫苗刻不容缓。在FMD表位疫苗研究领域,如何将FMDV中和表位更加有效的呈递给免疫系统,从而更加高效的激发抵抗FMD感染的免疫应答,是目前表位疫苗研究的主要方向。本研究选取了叁种FMD多表位抗原的分子内佐剂,分别是:乙肝核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg),结核分枝杆菌热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)的羧基端肽结合区(mHSP70C)以及肝素结合血凝素蛋白(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)。另外选取A型和O型FMDV代表性毒株VP1上的B细胞表位(VP1 134-161aa,200-213aa)或非结构蛋白3A上的T细胞表位(3A 21-35aa)的编码基因进行串联,并插入到截短型HBcAg的主要免疫原区(major immunogenic region,MIR)进行合成。在原核表达系统中获得不同的重组抗原rHBc/AO和rHBc/AOT,经过亲和层析纯化以及尿素梯度透析复性等程序后使其在体外高效自组装成携带有FMDV抗原表位的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。此外,笔者将A型和O型FMD二价多表位基因AO和HAO分别与mHSP70C以及HBHA的编码基因进行融合,以及HAO和HBHA单独构建至原核表达载体pET-28a,在原核系统中成功表达和纯化了重组蛋白AOHSP,HAO,HBHA以及HAO-HBHA。笔者将得到的rHBc/AO和rHBc/AOT VLPs以及融合抗原AO-HSP、HAO-HBHA等在小鼠模型中进行了免疫效果评价。rHBc/AO和rHBc/AOT VLPs均能刺激机体产生A型和O型FMDV特异性中和抗体;在细胞免疫应答方面,两者均能显着刺激机体产生Th1型细胞免疫应答,而灭活疫苗更倾向于刺激产生Th2型细胞免疫应答。与rHBc/AO VLPs相比,rHBc/AOT VLPs能够产生更高水平的Th2型细胞免疫应答。此外,HAO-HBHA免疫组的抗体水平以及脾淋巴细胞增殖水平明显高于HAO+HBHA混合免疫组,HAO以及HAO+206佐剂组。绵羊免疫结果显示,HAOHBHA免疫组能产生同灭活疫苗组同等的FMDV特异性抗体水平。由此可得出结论,在HBc分子MIR区插入多种血清型FMDV的抗原表位以提高该类VLPs疫苗广谱性的优势性;另外mHSP70C以及HBHA在增强FMDV表位免疫原性方面同样具有优势,特别是HBHA在提高FMDV特异性抗体水平以及细胞免疫应答方面有良好的应用前景。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
张少铎,来怡君,姜辉,程欣然,叶玉婷[2]（2017）在《含有分子内佐剂的CIC蛋白表达及免疫活性初步研究》一文中研究指出为了研究含有分子内佐剂的CTB-IsdBid-Clfais(CIC)蛋白表达及其免疫活性,试验采用重迭PCR方法将分子内佐剂CTB与IsdBid-Clfais基因串联,并将CTB-IsdBid-Clfais(CIC)插入到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒,将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达目的蛋白CIC,利用Western blotting方法对其进行鉴定,并以ELISA方法检测CIC蛋白的免疫活性。结果发现,试验成功扩增了2 072bp的目的基因CIC,并将CIC正确连接到pET-32a(+)载体上,构建了pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒;Western blotting结果证实,该重组质粒能够在大肠杆菌BL21感受态细胞中正确表达CIC蛋白,分子质量大小为95.9ku;ELISA结果显示,CIC试验组与IsdBid、Clfais蛋白组间均无显着差异(P>0.05),与BSA组间差异极显着(P<0.01)。综上所述,本研究成功构建了pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒,该质粒在大肠杆菌BL21中成功表达了CIC蛋白,且CIC能与IsdBid、Clfais免疫小鼠血清发生反应,具有较强的免疫活性。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2017年12期）
焦成凤[3]（2014）在《鞭毛蛋白作为分子内佐剂的表位疫苗的研制》一文中研究指出鞭毛蛋白是细菌鞭毛的主要组成成分，是TLR5的刺激剂，与TLR5结合激活天然免疫的结构是鞭毛蛋白高度保守的N端和C端，具有作为分子内佐剂携带外源表位成为疫苗的潜能。为了考察鞭毛蛋白N和C端作为分子内佐剂对外源表位的免疫增效作用，本实验选取一段来自猪圆环病毒流行株（PCV2b）衣壳蛋白的表位片段(Pd)，替换鞭毛蛋白的NC端以外的序列，制备成鞭毛蛋白-病毒表位融合蛋白（NPC）；另外构建了鞭毛蛋白C端与病毒表位的融合蛋白（CP）。考察鞭毛蛋白-病毒表位融合蛋白的免疫激活作用。结果显示，鞭毛蛋白-病毒表位融合蛋白NPC刺激小鼠产生抗体能够有效识别PCV2类病毒颗粒和PCV2灭活病毒，鞭毛蛋白NC端具有分子内佐剂的效用，具有与病毒表位融合制备重组蛋白疫苗的潜能。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-05-01）
潘玉竹,罗小莉,孔祥军,吕凤林[4]（2011）在《DEC-205对病毒抗原的提呈机制及其作为分子内佐剂的研究进展》一文中研究指出DEC-205是一种表达于大多数APC细胞的I型跨膜蛋白,属于甘露糖受体家族。DEC-205在抗原的内化、处理及呈递中扮演重要角色。但DEC-205介导抗原内化、提呈的机制并未被探明,尤其是其在介导抗原交叉提呈机制以及作为疫苗分子内佐剂等方面。本文通过对DEC-205的结构的认识,详细分析了国内外关于抗原提呈机制和DEC-205的研究进展,总结了DEC-205作为分子内佐剂角色的研究现状。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2011年11期）
张卫军,郭刚,刘开云,解庆华,邹全明[5]（2008）在《幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化》一文中研究指出目的克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul)。方法采用重迭延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b(+)中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414-ltB(AUL)。融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白。结果PCR扩增出1350bp的目的基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯。纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上。Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性。结论成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2008年17期）
刘焕[6]（2008）在《以LTb为分子内佐剂的PRRSV-gp5蛋白免疫特性研究》一文中研究指出本研究对PRRSV新型疫苗设计进行了新的探索,构建了以LTb为分子内佐剂的PRRSV-GP5融合蛋白,经动物免疫试验,阐明LTb的分子佐剂作用,为研究新型PRRS疫苗探寻新途径。主要研究内容如下:1.PRRSV ORF5基因的克隆、表达与免疫印迹将PRRSV ORF5基因克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET- ORF5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,2小时后表达量达到高峰。经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为13.75KD。经Western Blotting分析,表达蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。2.E.coli LTb与PRRSV gp5融合基因克隆,表达与免疫印迹采用PCR重迭延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET- LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,表达蛋白2小时后表达达到高峰。经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为26KD。经Western Blotting分析,表达蛋白均能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。3.gp5蛋白与LTb- gp5融合蛋白免疫效果的比较将表达产物gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白免疫6-8周龄ICR小鼠,并设对照组用间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T、B淋巴细胞增殖功能。结果gp5蛋白以肌肉注射途径免疫效果较好;叁免后gp5特异性抗体达到较高水平,其中LTb-gp5 IM与gp5+氟氏佐剂组之间差异不显着,而这两组与gp5 IM差异显着;从抗体种类来说,LTb-gp5叁免后达到和gp5+氟氏佐剂组相同的叁种抗体亚型,而gp5 IM仍然是一种抗体亚型。LTb-gp5 IM、gp5+氟氏佐剂组和gp5 IM均能够诱导脾脏T,B淋巴细胞增殖;LTb-gp5 IM、gp5+氟氏佐剂组均显着高于gp5 IM。4.大肠杆菌LTb蛋白单克隆抗体的制备和鉴定将大肠杆菌不耐热肠毒素LTb基因去除信号肽后与载体pPIC9K连接,电转化入酵母菌SMD1168中进行诱导表达。用纯化的LTb表达蛋白免疫6周龄BALB/c鼠3次,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合后,以间接ELISA和有限稀释法进行筛选,获得4株能稳定分泌抗大肠杆菌LTb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1F2,2C2,3D6,4H6株。经Western blotting分析,这几株均能与大肠杆菌LTB表达蛋白产生特异性反应。抗体亚型鉴定结果表明,这四株均为IgG2a型。(本文来源于《新疆农业大学》期刊2008-06-01）
高原,张卫军,邹全明[7]（2006）在《幽门螺杆菌分子内佐剂叁价疫苗的构建、纯化及活性研究》一文中研究指出目的构建幽门螺杆菌(helicobacterpylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白基因napA、黏附素hpaA、尿素酶B亚单位活性功能片段ureB414与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂叁价融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-hpaA-ureB414-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-NHUL,转化E.coliBL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用HK26/60Superdex-75分子筛和亲和层析柱ChelatingSepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westernblot鉴定,GM1-ELISA检测rNHUL与神经节苷脂的结合。口服免疫Balb/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重迭延伸PCR扩增出了约1590bp的NHUL融合基因;其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的25%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的Mr约59000,纯化后纯度大于90%。Westernblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与神经节苷脂GM1结合的生物学活性。动物实验表明,多亚单位疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG、IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显着高于单一亚单位疫苗。结论所获得重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2006年06期）
石统东,吴玉章,任红[8]（2006）在《脂类分子内佐剂Th/CTL多表位肽体内诱导HLA-A2转基因鼠HBV特异性CTL应答的研究》一文中研究指出目的探索如何在体内启动对外源性合成肽抗原的HLAⅠ类分子限制性CD8+T细胞应答。方法应用分子设计方法设计、合成基于免疫优势性HBcAg CTL表位、PreS2 B细胞表位和破伤风类毒素通用Th表位的多肽,并在氨基端导入脂类分子内佐剂,分别与以完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)乳化的多肽抗原相比较,在HLA-A2转基因小鼠体内对其诱导T细胞Th1型极化、CD8+CTL扩增及CD8+CTL介导的HBV特异性细胞毒活性的功能进行研究。结果含脂质分子内佐剂的Th/CTL多表位肽可在HLA-A2转基因小鼠体内诱导强而有效的Th1型极化和CD8+CTL扩增及HBV特异性CD8+CTL介导的细胞毒活性,其免疫原性显着高于CFA和IFA乳化的多肽(P<0.05);而后二者其免疫原性未见显着差异。结论Th/CTL多表位肽设计并引入脂质分子内佐剂是在体内有效诱导抗原特异性CTL应答并降低抗原制剂毒副作用的有效途径。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2006年18期）
高原,邹全明,张卫军[9]（2006）在《幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究》一文中研究指出目的构建幽门螺杆菌(HP)中性粒细胞激活蛋白基因(napA)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(heat-labileenterotoxinBsubunit,LTB)的分子内佐剂融合蛋白疫苗,并通过口服免疫小鼠研究其抗原性,为疫苗的开发奠定基础。方法利用分子克隆技术构建携带napA-LTB融合基因的重组原核表达质粒pET-22b-napA-LTB,转化E.coliBL21(DE3),进行原核表达,重组表达蛋白采用亲和层析柱ChelatingSepharose进行纯化,Tris-Tricine电泳和Westernblot鉴定,GM1-ELISA检测rNAP-LTB与神经节苷脂的结合。口服免疫BALB/c小鼠,检测重组融合蛋白的抗原性。结果重迭延伸PCR扩增出了约760bp的napA-LTB融合基因,其核苷酸序列与GenBank公布的相关序列一致。重组融合蛋白以可溶和包涵体两种形式表达,表达量约占细菌总蛋白的30%,Tris-Tricine初步测定目的蛋白的相对分子质量(Mr)约29000,纯化后纯度大于90%。Westernblot检测其具有良好的抗原性。该重组蛋白保持了与GM1神经节苷脂结合的生物学活性。动物实验表明,分子内佐剂疫苗口服免疫小鼠后血清特异性IgG,IgA和胃黏液、肠黏液的抗原特异性sIgA抗体显着高于无佐剂单一亚单位疫苗。结论所获得的重组融合蛋白具有良好的抗原性和黏膜佐剂活性,为进一步的疫苗研究奠定了基础。(本文来源于《中国药业》期刊2006年18期）
柏杨[10]（2005）在《幽门螺杆菌分子内佐剂多亚单位融合疫苗的实验研究》一文中研究指出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是一种定植于人类胃粘膜的革兰氏染色阴性、螺杆状、微需氧菌;在全世界范围内广泛感染,对人类健康构成严重危害。Hp的抗感染治疗存在较大问题,使用单剂药物根除率低,而使用多联药物费用昂贵,治愈率不高且不能有效阻止Hp的再感染和复发,此外,耐药菌株的增加也使抗Hp治疗面临越来越复杂的难题,因此研制Hp疫苗和其有效接种可能是预防Hp感染最有前景的手段。本研究依托实验室长期研究Hp疫苗的结果,拟在已完成的Hp叁亚单位融合蛋白HspA-HpaA-UreB414(rHHU)的基础上,将该基因片段hhu与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因ltB构建融合基因;并通过原核表达系统得到带分子内佐剂LTB的多亚单位蛋白疫苗;纯化目的蛋白后对沙鼠进行免疫后攻毒保护实验,评价该疫苗的免疫保护效率,并与其它疫苗方案的保护效果进行比较,为新型分子内佐剂多亚单位Hp疫苗的研制提供一定的实验依据。本实验完成了以下几个方面的工作:1.采用PCR技术分别扩增目的基因片段hhu和ltB; PCR重迭延伸拼接法将ltB基因融合于hhu基因的头部,构建lhhu融合基因形式;NcoⅠ、XhoⅠ双酶切后将融合基因构建至原核表达载体pET-28a(+)中;经酶切、测序鉴定后,阳性重组子分别转化宿主菌E.coli BL21(DE3)、E.coli JM109(DH3)。2.工程菌分别在25℃、37℃及42℃条件经IPTG诱导表达;SDS-PAGE,兔抗LTB、兔抗Hp血清和小鼠抗His_6单抗免疫印迹检测,证实重组融合蛋白rLHHU在不同温度条件及不同宿主菌环境中均表达为两条分子量接近的蛋白带,显示目的蛋白发生了降解。3.重新构建融合基因hhul形式,将ltB融合于hhu的尾部,并在两片段间引入8氨基酸柔性linker GGGSGGGS;融合基因构建至原核表达载体pET-28a(+)中获得表达质粒phhul;经酶切、测序鉴定后,阳性重组子转化宿主菌E.coli BL21(DE3);IPTG诱导工程菌表达,SDS-PAGE及免疫印迹检测,证实为目的蛋白的表达,分子量约为55.2KD;UVP扫描证实融合蛋白表达约占总蛋白的20%。4.重组蛋白rHHUL提交PridictProtein(http://cubic.bioc.columbia.edu/predictprotein/)(本文来源于《第叁军医大学》期刊2005-05-01）
分子内佐剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了研究含有分子内佐剂的CTB-IsdBid-Clfais(CIC)蛋白表达及其免疫活性,试验采用重迭PCR方法将分子内佐剂CTB与IsdBid-Clfais基因串联,并将CTB-IsdBid-Clfais(CIC)插入到表达载体pET-32a(+)中,构建pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒,将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞中表达目的蛋白CIC,利用Western blotting方法对其进行鉴定,并以ELISA方法检测CIC蛋白的免疫活性。结果发现,试验成功扩增了2 072bp的目的基因CIC,并将CIC正确连接到pET-32a(+)载体上,构建了pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒;Western blotting结果证实,该重组质粒能够在大肠杆菌BL21感受态细胞中正确表达CIC蛋白,分子质量大小为95.9ku;ELISA结果显示,CIC试验组与IsdBid、Clfais蛋白组间均无显着差异(P>0.05),与BSA组间差异极显着(P<0.01)。综上所述,本研究成功构建了pET-32a(+)-CTB-IsdBid-Clfais重组质粒,该质粒在大肠杆菌BL21中成功表达了CIC蛋白,且CIC能与IsdBid、Clfais免疫小鼠血清发生反应,具有较强的免疫活性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
分子内佐剂论文参考文献
[1].雷垚.基于不同分子内佐剂的A型、O型口蹄疫病毒二价多表位免疫原的初步研究[D].中国农业科学院.2019
[2].张少铎,来怡君,姜辉,程欣然,叶玉婷.含有分子内佐剂的CIC蛋白表达及免疫活性初步研究[J].中国畜牧兽医.2017
[3].焦成凤.鞭毛蛋白作为分子内佐剂的表位疫苗的研制[D].吉林大学.2014
[4].潘玉竹,罗小莉,孔祥军,吕凤林.DEC-205对病毒抗原的提呈机制及其作为分子内佐剂的研究进展[J].免疫学杂志.2011
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[6].刘焕.以LTb为分子内佐剂的PRRSV-gp5蛋白免疫特性研究[D].新疆农业大学.2008
[7].高原,张卫军,邹全明.幽门螺杆菌分子内佐剂叁价疫苗的构建、纯化及活性研究[J].免疫学杂志.2006
[8].石统东,吴玉章,任红.脂类分子内佐剂Th/CTL多表位肽体内诱导HLA-A2转基因鼠HBV特异性CTL应答的研究[J].第叁军医大学学报.2006
[9].高原,邹全明,张卫军.幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白分子内佐剂融合疫苗的构建、纯化及活性研究[J].中国药业.2006
[10].柏杨.幽门螺杆菌分子内佐剂多亚单位融合疫苗的实验研究[D].第叁军医大学.2005
论文知识图
