双柱连续流层析亲和分离抗体的过程设计与应用

论文摘要

针对单抗生产下游过程的瓶颈-蛋白A亲和分离,以提高产率和降低成本为目标,探讨了双柱连续流层析的新方法。从过程设计的关键因素出发,比较和分析了保留时间和蛋白浓度的影响,优化了分离条件,并应用于细胞培养液中单抗的分离。以两种蛋白A亲和介质MabSelect SuRe和UniMab为典型介质,考察了不同保留时间和IgG浓度下的穿透曲线,比较了保留时间和蛋白浓度对产率、介质利用率和缓冲液消耗的影响。结果表明,与常规的批次层析相比,双柱连续流层析拥有更优越的分离性能,低保留时间条件下的产率和介质利用率显著提高,缓冲液消耗减少,特别适合于高流速操作。对于从细胞培养液中分离单抗,双柱连续流层析的分离性能与常规批次层析相当,单抗纯度在97%以上、收率87%以上、聚集体含量低于2%、宿主细胞蛋白含量低于300ppm,优势是产率提高,介质利用率从20%～30%提高到70%～80%,,缓冲液消耗下降为常规批次层析过程的1/5～1/4,显示出良好的应用前景。

论文目录

• 1 前言
• 2 双柱连续流层析原理
• 3 材料和方法
•   3.1 主要材料与仪器
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 蛋白穿透曲线测定
•     3.2.2 批次层析分离
•     3.2.3双柱连续流层析分离
•     3.2.4 细胞培养液中分离单抗
•     3.2.5 分析方法
•     3.2.6 分离过程评价
• 4 结果与讨论
•   4.1 动态载量比较
•   4.2 双柱连续流层析设计
•   4.3 连续流层析分离性能比较
•     4.3.1 保留时间影响
•     4.3.2 蛋白浓度影响
•     4.3.3 细胞培养液中捕获单抗
• 5 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 高宗晔,史策,姚善泾,林东强

关键词: 连续流层析,抗体,分离,产率,介质利用率

来源: 高校化学工程学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 浙江大学生物质化工教育部重点实验室浙江大学化学工程与生物工程学院

基金: 国际科技合作专项项目(2015DFG42070),国家自然科学基金(21776243,21476198)

分类号: TQ464

页码: 117-127

总页数: 11

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