导读:本文包含了果胶裂解酶基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:果胶,基因,曲霉,苹果,聚糖,高效,炭疽菌。
果胶裂解酶基因论文文献综述
何玉兰[1]（2019）在《酸性果胶裂解酶的基因筛选及其在黑曲霉中高效重组表达研究》一文中研究指出酸性果胶裂解酶可通过β-消除反应有效降解果胶类物质,在食品工业中具有广泛用途,尤其是果蔬汁加工业,有助于果蔬汁澄清和提高出汁率。酸性果胶裂解酶主要由真菌产生,尤其是黑曲霉,但其天然原始菌株普遍存在产酶量低和产物杂质多的问题,远达不到工业需求。本研究旨在以具有低蛋白背景的安全菌株黑曲霉SH-2为表达宿主,将来自黑曲霉全基因组的5个果胶裂解酶基因(pelA、pelB、pelC、pelD、pelF)分别进行过量表达以期实现酸性果胶裂解酶的高效重组表达,并对重组酶的酶学性质和其在果汁澄清方面的实际应用进行探究。主要研究内容如下:(1)将构成黑曲霉果胶裂解酶基因家族的5个果胶裂解酶基因(pelA、pelB、pelC、pelD和pelF)成功克隆,并利用黑曲霉自身强启动子(葡萄糖淀粉酶启动子,PglaA)分别实现5个果胶裂解酶基因在黑曲霉SH-2中进行重组过量表达。通过酶活测定成功筛选得到两个高表达的酸性果胶裂解酶基因pelA和pelD,转化菌株分别为SH2-PelA和SH2-PelD,在摇瓶发酵条件下最高酶活力分别为11069.2 U/mL和8822.6 U/mL,在液体深层发酵条件下最高酶活力分别为65148.8 U/mL和35670.0 U/mL,分别比摇瓶发酵酶活提高5.9倍和4.0倍,表明重组菌株具有工业化大量生产酸性果胶裂解酶的潜力,并且重组菌株SH2-PelA具有较高的表达水平。(2)高产重组酸性果胶裂解酶经镍柱亲和层析纯化后进行western blot检测及酶学性质研究。经一步纯化后,重组酶rePelA和rePelD的比酶活分别为4618.0 U/mg和8522.7 U/mg,回收率分别为88.4%和79.4%,纯化倍数分别为5.7和4.9倍;底物特异性分析表明:重组酶rePelA和rePelD的比活力随果胶底物甲酯化程度增加而增加,对柑橘果胶(≥85%酯化度)酶活分别为22423.3 U/mL和31248.0 U/mL;rePelA和rePelD的最适反应温度均为50℃,并在30-50℃的范围内热稳定性良好;rePelA和rePelD的最适反应pH分别为4.5和5.0,并在酸性pH条件下稳定性良好;加入Na~+、Mg~(2+)、Zn~(2+)、Ni~(2+)、Mn~(2+)、Ba~(2+)对rePelA具有不同程度的激活作用,其中Zn~(2+)、Mn~(2+)对rePelA激活作用较为显着,能提高约30%的酶活力,而Ca~(2+)、Cu~(2+)及表面活性剂SDS对rePelA有明显的抑制作用;加入Ca~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)、Ni~(2+)、Mn~(2+)、Ba~(2+)对重组酶rePelD具有不同程度的激活作用,而SDS表现为抑制作用。(3)将重组酸性果胶裂解酶应用于不同果汁澄清,结果表明:rePelA和rePelD对橙汁、苹果汁以及葡萄汁具有良好的澄清效果。经rePelA和rePelD处理后,橙汁的透光度分别提高了19.2和17.9倍,苹果汁的透光度分别提高了7.3和11.5倍,葡萄汁的透光度分别提高了3.8和5.7倍;此外,相比于添加单一果胶酶,复合添加不同果胶酶可在较短时间获得更好的果汁澄清效果。(本文来源于《华南理工大学》期刊2019-04-20）
洪坤奇,赵莹,尹新明,习慧君,刘闯[2]（2019）在《苹果轮纹病菌(Botryosphaeria dothidea)果胶裂解酶基因Bdpl1的致病功能分析》一文中研究指出由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的苹果轮纹病是影响我国苹果安全生产的重大病害之一。因此,本研究基于受苹果轮纹菌侵染的苹果组织中果胶裂解酶基因Bdpl1表达上调这一现象,通过Split-marker PCR技术构建Bdpl1基因敲除载体,并通过PEG介导的原生质体转化获得转化子,经常规PCR和qRT-PCR对所获得的转化子进行筛选,成功获得1个Bdpl1基因缺失阳性突变子。该转化子在PDA上的培养基性状与野生型没有明显差异,但在果胶培养基上菌落直径明显小于野生型。其胞外果胶酶活相比野生型明显下降,但在离体"早富"苹果枝条上的致病力并没有明显的下降。通过qRT-PCR技术发现在基因Bdpl1敲除后,其家族内有3个基因在病菌侵染过程中相比野生型明显上调表达(>3倍)。这些现象表明果胶裂解酶基因Bdpl1与病原菌的营养生长过程关系不大,但其参与对寄主果胶类物质的降解。Bdpl1基因对轮纹病菌致病力的影响较小,有可能是Bdpl1基因敲除后,该基因家族内其他基因的上调表达补偿了Bdpl1基因的功能。(本文来源于《植物病理学报》期刊2019年03期）
宋立立,顿宝庆,张亚楠,张兆英[3]（2018）在《果胶裂解酶基因与木聚糖酶基因的共表达》一文中研究指出利用重迭引物PCR方法将从海栖热袍杆菌中克隆得到的果胶裂解酶基因和从桔青霉CR-2菌株中克隆得到的木聚糖酶基因做重迭引物PCR扩增,扩增后得到融合基因plyxyl,将其构建载体后转化到大肠杆菌菌株BL21,克隆子经IPTG诱导在原核系统中实现了表达,p H值为中性,诱导6 h后最高酶活性分别达30.11 U/m L、2.03 IU/m L。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2018年17期）
李鸿鹏,钟昌开,吴秋玉,张艳杰,张贺[4]（2018）在《杧果炭疽病菌3个果胶裂解酶基因序列特征及受漆酶基因Lac1影响的分析》一文中研究指出果胶裂解酶是炭疽菌在侵染寄主过程中降解寄主细胞壁的一类重要水解酶。本研究在杧果炭疽病菌中克隆获得了3个果胶裂解酶基因Cgpel1、Cgpel2和Cgpel3,DNA全长分别为1 037、1 498、1 089 bp,cDNA全长分别为975、1380、978bp,分别编码324、459、325个氨基酸,均含1个果胶裂解酶保守结构域,均有典型的信号肽,不存在跨膜结构。其二级结构中α-螺旋分别占16.05%、20.26%、16.92%,延伸链分别占28.09%、21.79%、29.54%,β-转角分别占5.86%、8.93%、7.38%,无规则卷曲分别占50.00%、49.02%、46.15%。Cgpel1、Cgpel2和Cgpel3的氨基酸序列分别与C. tofieldiae(KZL77240.1)、草莓炭疽菌(C. gloeosporioides)(XP-007274932.1)、C. incanum(KZL84476.1)果胶裂解酶序列相似度在93%以上。qRT-PCR分析发现,3个果胶裂解酶基因在整个侵染过程中均持续高效表达,但在漆酶基因Lac1敲除突变体中,表达均下降约90%。可见Cgpel1、Cgpel2和Cgpel3是果胶裂解酶基因家族成员,序列差异较大,在侵染过程中起着重要的作用,且其表达受漆酶基因Lac1影响。(本文来源于《热带作物学报》期刊2018年12期）
李鸿鹏,钟昌开,吴秋玉,张艳杰,张贺[5]（2018）在《杧果炭疽病菌3个果胶裂解酶基因克隆分析及敲除载体构建》一文中研究指出果胶裂解酶(Pectate lyases,PL),是能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的一种解聚酶。许多真菌在侵染植物的过程中都可以产生果胶裂解酶,裂解高度酯化的果胶,破坏植物组织的整体性,使薄壁细胞组织软化。果胶裂解酶基因多以基因家族形式存在,同一病菌中不同的果胶裂解酶基因作用存在明显差异,如Erwinia chrysanthemi strain3937有5个Pel基因PLa～Ple,其中只有PLa、PLd和Ple对病原菌的致病力有影响,且PLe比Pla和PLd的作用更强,PLe突变后失去了侵染能力(Boccara et al.,1998);辣椒疫霉菌(Phytophthora capsici)的12个候选果胶裂解酶基因中只有Pcpel1、Pcpel16、Pcpel20明显影响致病力(付丽,2012)。杧果是我国热带和亚热带地区重要的经济果树。由胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides Penz.&Sacc.)引起的杧果炭疽病是杧果生长期及贮藏期的常发性重要病害之一。目前,对该病害的防治以化学方法为主,不仅防效有限,且易产生耐药性或抗药性及农药残留等问题。因此,有必要从分子水平上探究杧果炭疽病菌的致病机理,为开发药剂新靶标提供依据。本课题组前期用实时荧光定量方法分析发现,在胶孢炭疽菌侵染杧果叶片和果实的不同时段,果胶裂解酶基因均持续高效表达,因此推测Pel基因可能是胶孢炭疽菌的重要致病因子之一。为了进一步从分子水平上明确其在杧果炭疽病菌致病机理中的作用,本研究利用同源克隆的策略从杧果炭疽病菌中克隆获得了3个果胶裂解酶基因Cgpel1、Cgpel2和Cgpel3,DNA全长分别为1 037bp、1 498bp、1 089bp,cDNA全长分别为975bp、1 380bp、978bp,分别编码324、459、325个氨基酸,均含1个果胶裂解酶保守结构域,均有典型的信号肽,不存在跨膜结构;其二级结构中α-螺旋分别占16.05%、20.26%、16.92%,延伸链分别占28.09%、21.79%、29.54%,β-转角分别占5.86%、8.93%、7.38%,无规则卷曲分别占50.00%、49.02%、46.15%;叁级结构差别很大;Cgpel1、Cgpel2和Cgpel3的氨基酸序列分别与C.tofieldiae(KZL77240.1)、草莓炭疽菌(C.gloeosporioides)(XP-007274932.1)、C.incanum(KZL84476.1)果胶裂解酶序列相似度达93%以上。借助In-Fusion~HD Cloning Kit成功构建了3个果胶裂解酶基因的敲除载体,为后续鉴定其分子功能打下了材料基础。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
洪坤奇,臧睿,赵莹,文才艺[6]（2018）在《苹果轮纹病菌果胶裂解酶基因Bdpl1的功能研究》一文中研究指出苹果轮纹病(apple ing rot)是我国苹果生产上的毁灭性病害之一,主要为害果树枝干的皮层部分,形成暗褐色水渍状病斑或"钱币"样瘤状凸起。引起该病害的主要病原菌为茶藤子葡萄座腔菌[Botryosphaeria dothidea(Moug)Ces.&De Not.]。明确轮纹病菌与寄主之间的互作机制,对于苹果轮纹病的防治具有重要的指导意义。前期研究表明轮纹病菌在侵染苹果的过程中可产生一系列的细胞壁降解酶,如多聚半乳糖醛酸酶、聚甲基半乳糖醛酸酶、多聚半乳糖醛酸反式消除酶、果胶甲基反式消除酶和果胶裂解酶等。然而,究竟是哪些细胞壁降解酶基因在病原菌侵染寄主过程中发挥了作用目前还不清楚。本研究通过测定轮纹病菌与感病苹果品种(早富)互作转录组,发现在轮纹病菌侵染的苹果组织中,轮纹病菌的多个果胶裂解酶PL基因的表达量明显上调表达,推测PL基因在轮纹病菌侵染苹果的过程中起到了关键作用。我们通过PEG介导的原生质体遗传转化方法,成功获得Bdpl1基因的缺失突变体,对比△Bdpl1突变体与野生型菌株的生长表型,发现△Bdpl1突变体菌落形态与野生型菌株没有明显差别,△Bdpl1突变体在果胶培养基上菌落直径显着小于野生型菌株;通过DNS法测定胞外果胶酶活,显示△Bdpl1突变体胞外果胶酶活显着下降;苹果枝条离体接种测定致病力发现△Bdpl1突变体致病力与野生菌株无明显区别。qRT-PCR检测Bdpl1基因敲除后PL家族中其他基因的表达量变化,结果显示突变体中PL家族内有3个基因表达量明显上调表达。研究结果初步表明,Bdpl1基因可能通过降解果胶参与轮纹病菌的致病过程,但PL家族内其他基因可能在Bdpl1敲除后部分补偿了其在病菌致病力方面的作用。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
杨璐[7]（2017）在《番茄果胶裂解酶及S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因在果实成熟中的功能研究》一文中研究指出番茄是世界上重要的经济作物之一,具有丰富的营养价值,也具有一定的保健和抗癌功效,同时它还是研究肉质果实成熟和软化的重要模式植物。本论文以Micro-Tom番茄为研究背景,重点研究了果胶裂解酶和S-腺苷高半胱氨酸水解酶编码基因在果实成熟中的作用,虽然这两个基因间无直接必然联系,但作为不同于转录因子的功能基因,它们均在番茄果实成熟时表达增加且都对乙烯激素响应强烈。研究结果为明确这两个基因的功能及利用基因工程手段进行番茄品种改良具有重要的参考价值。果胶裂解酶(PL,E.C.4.2.2.2)是果胶相关酶的一种,通过β-消除机制将去酯化的果胶降解成一个短链的果胶分子和一个4,5-不饱和寡聚半乳糖醛酸,从而使果胶结构裂解、果实软化。在非跃变型果实草莓中,PL可以作为控制果实软化的候选基因发挥功能,因此,我们在跃变型果实番茄中也开展了对应基因的研究。首先从番茄中分离鉴定了22个PL基因,并通过转基因技术进一步在Micro-Tom番茄中从生理指标、细胞水平、分子水平以及采后耐贮性等方面深入研究了果实成熟相关的基因(SlPL,Solyc03g111690)的功能。SlPL的表达在番茄果实破色后逐渐增强,并且可以被成熟相关激素尤其是乙烯显着诱导,抑制SlPL后番茄果实硬度提高,外果皮细胞变小变多,中果皮细胞变致密,外果皮到内果皮细胞排列变得更紧密。SlPL干扰的转基因果实(SlPL-RNAi)具有采后抗腐烂、抗灰霉病的作用,进一步研究发现抑制SlPL可以导致果实中纤维素﹑半纤维素含量升高,水溶性果胶﹑总果胶含量下降,并且超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)及过氧化氢酶(CAT)活力增强,丙二醛(MDA)含量降低。农艺指标测定结果表明抑制SlPL并未对果实产率等大部分性状带来不利影响。此外,定量PCR结果显示SlPL-RNAi果实中大量细胞壁降解和信号通路相关基因表达下调,并且表达谱中的差异表达基因也在分子层面上支持了表型变化。SlPL-RNAi果实中筛选到的差异表达基因涉及激素信号转导、转录因子、细胞壁代谢和植物病原菌互作等多个方面。综上所述,本研究通过转基因方法发现抑制SlPL可以提高番茄果实硬度,延长货架期和抵抗灰霉侵染,这对于在其它物种中利用该基因增强抗病性具有重要参考价值。S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH,EC 3.3.1.1)广泛存在于真核细胞中,可逆地催化S-腺苷高半胱氨酸(SAH)水解生成高半胱氨酸(Hcy)和腺苷(Ado),是调节体内甲基循环代谢的一种重要的水解酶。该基因在降低病毒复制、调节植物生长发育和逆境适应中具有重要功能,但在果实成熟中的功能未知。番茄SAHH家族包含叁个基因,虽然它们在激素处理幼苗和非生物胁迫处理植株中的表达显示了部分功能冗余,但它们在野生型(WT)各组织中的表达模式不尽相同,SlSAHH2在果实成熟时表达显着增强并且可以被乙烯显着诱导。过表达SlSAHH2导致番茄果实发育及成熟阶段SAHH酶活力提高,并且从开花到果实破色的时间缩短。因而在相同的发育时期,SlSAHH2过表达(SlSAHH2-OE)果实的番茄红素含量显着高于WT。定量PCR结果显示,相比WT,过表达SlSAHH2乙烯合成及诱导基因的表达随着果实的发育和成熟由下调转为上调,并在破色时显着增强,且增加了乙烯释放。成熟相关转录因子的表达受到调节,我们推测SlSAHH2对乙烯的影响可能位于SlSAHH2对成熟相关因子影响的下游。此外,SlSAHH2-OE果实和幼苗中都显示出乙烯敏感性,1-氨基环丙烷羧酸(ACC)处理后SlSAHH2-OE果实成熟速率比WT更快、幼苗的下胚轴和根比WT更短。SAHH作为影响甲基化循环的重要水解酶,SlSAHH2-OE破色果实中DNA甲基化酶编码基因的表达相比WT均上调,这表明SlSAHH2可以通过调节甲基化影响果实成熟。综上所述,本研究进一步明确了SlSAHH2的功能,证实了该基因可在果实成熟中发挥作用。(本文来源于《重庆大学》期刊2017-10-01）
王柳凤,樊连梅,刘更森,姜雪娇,原永兵[8]（2017）在《乌桃果胶裂解酶基因(PpPL)的克隆及其在花色苷降解中的作用》一文中研究指出花色苷是调控果实着色的主要色素之一,具有多种保健功能。为探索花色苷在乌桃果实成熟过程中的降解与果胶裂解酶的关系,利用已报到的碧桃果胶裂解酶基因序列设计特异引物,从乌桃中克隆出果胶裂解酶基因PpPL,PpPL包括1239bp的开放阅读框,编码413个氨基酸。利用荧光定量PCR检测PpPL在果实不同成熟度及不同组织中的表达,数据显示,乌桃PpPL基因的表达量随着果实的成熟及花色苷的降解呈现递增的趋势,且在果实成熟末期表达量明显增多;不同组织中PpPL基因均有表达,同一成熟度,其相对表达量从少到多依次为:幼果果肉<叶<幼果果皮<茎,推测PpPL可能参与花色苷的降解。(本文来源于《分子植物育种》期刊2017年08期）
冷语佳[9]（2017）在《水稻果胶裂解酶基因DEL1的克隆和功能研究》一文中研究指出果胶是植物细胞壁的重要组成成份,也是植物细胞壁结构最为复杂的多糖。果胶裂解酶作为众多果胶降解酶之一,能够通过β-消除作用将去酯化的同聚半乳糖醛酸降解成一个短链的果胶分子和一个4,5-不饱和寡聚半乳糖醛酸。到目前为止,尽管许多植物中都报道了果胶裂解酶基因的功能,主要表现在参与花粉、花药和雌蕊的发育、果实软化及成熟、抗病和植物器官或组织发育等方面,但在水稻中功能还鲜有报道。本研究在水稻甲基磺酸乙酯(EMS)诱变突变体库中筛选到一个水稻矮秆、叶片早衰突变体,命名为del1(dwarf and early-senescence leaf 1)。我们通过生理学、细胞学、遗传学、分子生物学以及生物信息学分析等试验方法,剖析了其突变表型变化的分子机理。主要研究结果如下:1.突变体del1在整个生育期表现出发育缓慢、植株矮小、根长变短、分蘖数减少等表型。石蜡切片分析结果表明,造成突变体del1植株矮小的原因是细胞数目减少导致的。流式细胞仪结果表明突变体del1细胞数目减少是由于细胞周期G1期受到阻滞引起的;2.突变体del1同时也表现出叶片早衰的表型,在播种后5天叶尖及叶片边缘发生黄化,随着生长发育叶的进行,叶片衰老表型更加严重,到了成熟期叶尖甚至出现撕裂表型。透射电镜观察突变体del1中叶绿体出现部分降解,类囊体排列紊乱,片层排列不规则等现象。同时,突变体del1中叶绿素含量和光合作用都显着下降,衰老相关基因的表达显着上升。台盼蓝染色及TUNEL实验表明,突变体del1衰老的叶片中细胞程序化死亡增加;NBT和DAB染色观察发现,del1突变体中活性氧含量显着升高,且电解质渗透率也显着升高。同时,活性氧相关酶活性及清除活性氧相关基因也显着升高。这些结果表明,突变体del1叶片的衰老主要是由于活性氧的积累导致的;3.遗传分析表明,del1是由单一核基因控制的隐性性状。以del1为母本,TN1为父本杂交获得F2定位群体,选取30株突变表型的单株进行初定位,将DEL1定位在10号染色体长壁上位于标记M1和M14之间。进一步扩大群体(1081株突变表型单株)将DEL1定位于标记M7和M8之间约45kb的物理距离范围内,该区间包含8个开放阅读框。并进一步通过测序发现第五个开放阅读框的第叁个外显子发生一个碱基替换(G替换成T),导致氨基酸由色氨酸(Trp)变成亮氨酸(Leu)。序列分析表明DEL1编码一个果胶裂解酶前体基因,cDNA全长为1476bp,编码491个氨基酸。遗传互补实验证明,DEL1基因能够恢复矮秆和叶片早衰的表型;4.生物信息学分析DEL1蛋白序列含有一个PelC结构域,且保守位点与植物同源性非常高。进化分析表明,DEL1与拟南芥业已报到的易感白粉病PMR6基因在进化上亲缘关系很近,但DEL1却没有表现出抗病的特性,表明果胶裂解酶基因在单子叶和双子叶植物中已出现功能分化;5.DEL1基因在水稻各个组织器官广泛表达。其中,在茎,根和鞘等伸长部位表达量很高;6.果胶酶活性实验表明,突变体del1的酶活性要较野生型显着降低。透射电镜观察发现,突变体del1细胞壁结构发生明显变化,胞间层和次生细胞壁厚度显着下降,而初生细胞壁显着升高。同时,果胶、纤维素、半纤维素及7种中性单糖都发生了显着的变化。免疫组织化学实验表明,突变体del1果胶甲酯化显着升高。7.转录组分析表明,突变体del1中许多细胞壁相关和衰老相关基因表达量发生变化,表明DEL1可能通过间接的方式参与水稻植物发育和叶片衰老相关的通路中。以上结果说明:突变体del1矮秆、早衰表型是由于果胶裂解酶基因的突变引起细胞壁组成及成分变化导致的。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
徐林,孔华,郭运玲,刘恩平,郭安平[10]（2016）在《菠萝叶纤维生物脱胶菌株果胶裂解酶pelN基因克隆与原核表达》一文中研究指出【研究目的】菠萝叶纤维是新的天然植物纺织材料,具有良好的品质和独特的风格,市场前景广阔。菠萝叶纤维需要经过脱胶处理才能纺纱。纤维脱胶是多酶系参与的复杂过程,其中果胶裂解酶起到了重要作用。发掘新型果胶酶因发掘利用有助于推动菠萝叶纤维脱胶,推动产业良性发展。【方法】根据CAZy数据库Dickeyadadantii 3937果胶裂解酶基因信息设计引物,从菠萝叶纤维脱胶菌株Dickeyadadantii BTC105中克隆果胶裂解酶pelN基因,连接表达载体pet30a,转化E.coliB L21(3DE)进行诱导表达;【结果】克隆得到Dickeyadadantii BTC105果胶裂解酶pel N基因(Gen Bank登录号KX840321)全长1320bp,编码439个氨基酸,预测分子式为C2078H3155N591O642S11,为稳定蛋白,稳定系数为31.80;分泌蛋白,其中第1-25个氨基酸为信号肽区域;含有属于SSF51126超家族及Beta螺旋结构。该基因与该属模式菌株Dickeyadadantii3937 Pel N亲缘关系较近。经IPTG诱导,SDS-PAGE凝胶电泳分析该蛋白分子量约为46KD;【结论】本研究从菠萝叶纤维脱胶菌株中分离并成功表达pel N基因,其表达产物在菠萝叶纤维生物脱胶中有着重要的应用前景。克隆并表达果胶裂解酶基因,以期改进菠萝叶纤维脱胶工艺,为生物脱胶机理的阐述提供依据。(本文来源于《中国热带作物学会2016年学术年会论文集》期刊2016-11-09）
果胶裂解酶基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
由葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)引起的苹果轮纹病是影响我国苹果安全生产的重大病害之一。因此,本研究基于受苹果轮纹菌侵染的苹果组织中果胶裂解酶基因Bdpl1表达上调这一现象,通过Split-marker PCR技术构建Bdpl1基因敲除载体,并通过PEG介导的原生质体转化获得转化子,经常规PCR和qRT-PCR对所获得的转化子进行筛选,成功获得1个Bdpl1基因缺失阳性突变子。该转化子在PDA上的培养基性状与野生型没有明显差异,但在果胶培养基上菌落直径明显小于野生型。其胞外果胶酶活相比野生型明显下降,但在离体"早富"苹果枝条上的致病力并没有明显的下降。通过qRT-PCR技术发现在基因Bdpl1敲除后,其家族内有3个基因在病菌侵染过程中相比野生型明显上调表达(>3倍)。这些现象表明果胶裂解酶基因Bdpl1与病原菌的营养生长过程关系不大,但其参与对寄主果胶类物质的降解。Bdpl1基因对轮纹病菌致病力的影响较小,有可能是Bdpl1基因敲除后,该基因家族内其他基因的上调表达补偿了Bdpl1基因的功能。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
果胶裂解酶基因论文参考文献
[1].何玉兰.酸性果胶裂解酶的基因筛选及其在黑曲霉中高效重组表达研究[D].华南理工大学.2019
[2].洪坤奇,赵莹,尹新明,习慧君,刘闯.苹果轮纹病菌(Botryosphaeriadothidea)果胶裂解酶基因Bdpl1的致病功能分析[J].植物病理学报.2019
[3].宋立立,顿宝庆,张亚楠,张兆英.果胶裂解酶基因与木聚糖酶基因的共表达[J].江苏农业科学.2018
[4].李鸿鹏,钟昌开,吴秋玉,张艳杰,张贺.杧果炭疽病菌3个果胶裂解酶基因序列特征及受漆酶基因Lac1影响的分析[J].热带作物学报.2018
[5].李鸿鹏,钟昌开,吴秋玉,张艳杰,张贺.杧果炭疽病菌3个果胶裂解酶基因克隆分析及敲除载体构建[C].中国植物病理学会2018年学术年会论文集.2018
[6].洪坤奇,臧睿,赵莹,文才艺.苹果轮纹病菌果胶裂解酶基因Bdpl1的功能研究[C].中国植物病理学会2018年学术年会论文集.2018
[7].杨璐.番茄果胶裂解酶及S-腺苷高半胱氨酸水解酶基因在果实成熟中的功能研究[D].重庆大学.2017
[8].王柳凤,樊连梅,刘更森,姜雪娇,原永兵.乌桃果胶裂解酶基因(PpPL)的克隆及其在花色苷降解中的作用[J].分子植物育种.2017
[9].冷语佳.水稻果胶裂解酶基因DEL1的克隆和功能研究[D].华中农业大学.2017
[10].徐林,孔华,郭运玲,刘恩平,郭安平.菠萝叶纤维生物脱胶菌株果胶裂解酶pelN基因克隆与原核表达[C].中国热带作物学会2016年学术年会论文集.2016
论文知识图
