天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定及遗传演化分析

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征在众多的养猪国家大规模流行,是当下养猪行业中极其重要的传染性疾病之一。临床症状主要为母猪的死胎、早产和流产;仔猪在断奶保育阶段以咳嗽和呼吸困难等呼吸道症状为主。由于PRRSV在流行过程中存在不断的遗传变异,以及疫苗不能发挥良好的保护效果,因此对PRRSV的流行进行监测和遗传演化分析是非常重要的。本研究采用ELISA的方法对样品开展血清学检测,结果表明天津地区免疫猪群的PRRSV的抗体阳性检出率为79.29%,未免猪群的抗体阳性检出率为25.63%。此外,利用鉴别RT-PCR对样品开展分子流行病学调查,结果显示平均检出率为40.47%,并且呈现增长趋势。类NADC30的检出率为28.74%,占整个阳性样品的71.01%。同时研究了PRRSV与其他病毒和细菌的混合感染情况。针对PRRSV的ORF5和Nsp2高变区,对检测样品进行序列测定。利用Marc-145细胞和PAMs细胞,结合CPE、RT-PCR和免疫荧光,对PRRSV优势毒株进行分离纯化鉴定,并对其全基因组序列进行测定和遗传演化分析。ORF5的遗传演化分析发现,TJjh1602等12株类NADC30毒株在ORF5的34位缺失了一个氨基酸。Nsp2遗传演化分析发现,有48株与NADC30毒株氨基酸有着相同类型的“111+1+19”的缺失模式,并且存在不同的点缺失。分离毒株TJxq1701和TJjh1602的全基因组遗传演化分析表明,TJxq1701毒株位于HP-PRRSV毒株的分支,TJjh1602与类NADC30毒株位于同一分枝。综上所述,PRRSV在天津各地区均有流行,类NADC30毒株已经成为主要流行毒株,并且在流行过程中还在不断的发生变异。成功分离鉴定了一株类NADC30毒株TJjh1602。全基因对比发现,在ORF5的34位缺失一个氨基酸,其生物学意义有待进一步研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
•   1.1 PRRSV概述
•   1.2 PRRSV分子生物学及基因结构特征
•   1.3 遗传变异及重组
•     1.3.1 遗传变异
•     1.3.2 基因重组
•   1.4 PRRSV的细胞感染
•   1.5 PRRS的流行病学概述
•   1.6 PRRSV的致病性及发病机理
•     1.6.1 PRRSV的致病性
•     1.6.2 PRRSV的发病机理
•   1.7 临床表现及病理变化
•   1.8 PRRSV的诊断
•     1.8.1 血清学诊断
•     1.8.2 分子生物学诊断
•   1.9 防控措施
•   1.10 目的及意义
• 第二章 2017-2018 年天津地区猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学调查
•   2.1 材料与方法
•     2.1.1 材料
•     2.1.2 方法
•   2.2 结果
•     2.2.1 血清学
•     2.2.2 病原学
•   2.3 讨论
•     2.3.1 血清学
•     2.3.2 病原学
•   2.4 小结
• 第三章 2017-2018 年天津地区猪繁殖与呼吸综合征流行毒株遗传演化分析
•   3.1 材料与方法
•     3.1.1 材料
•     3.1.2 方法
•   3.2 结果
•     3.2.1 序列获取情况
•     3.2.2 PRRSV的 ORF5 基因序列分析
•     3.2.3 PRRSV的 Nsp2 基因序列分析
•     3.2.4 全基因组扩增结果
•     3.2.5 遗传演化分析
•   3.3 讨论
•   3.4 小结
• 第四章 2017-2018 年天津地区猪繁殖与呼吸综合征流行毒株分离与鉴定
•   4.1 材料与方法
•     4.1.1 材料
•   4.2 方法
•     4.2.1 细胞复苏
•     4.2.2 细胞传代
•     4.2.3 细胞冻存
•     4.2.4 样品PRRSV鉴定
•     4.2.5 免疫荧光试验（IFA）
•     4.2.6 细胞培养物的病原学检测
•     4.2.7 病毒蚀斑纯化
• 50 测定'>    4.2.8 TCID₅₀测定
•   4.3 结果
•     4.3.1 PRRSV细胞分离结果
•     4.3.2 IFA结果
•     4.3.3 细胞培养物的分子鉴定
•     4.3.4 蚀斑纯化结果
• 50 结果'>    4.3.5 TCID₅₀结果
•   4.4 讨论
•   4.5 小结
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录一 英文缩略词表
• 攻读学位期间发表的论文

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 石青青

导师: 马吉飞

关键词: 天津地区,流行病学,纯化鉴定,遗传演化

来源: 天津农学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 天津农学院

分类号: S852.651

总页数: 71

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