一、牛磺酸对过氧化氢致细胞过氧化损伤的影响（论文文献综述）
王秀琴[1]（2021）在《保肝型中草药的筛选及对花鲈氧化应激的缓解作用研究》文中研究说明在花鲈的养殖过程中,不可避免的会有应激现象的发生,而氧化应激最为常见且副作用显着,过度的氧化应激导致水产养殖动物生长受到抑制,严重影响养殖效益。部分中草药能够预防和治疗氧化应激,在水产养殖中的应用受到广泛关注。因此,本实验以花鲈为研究对象,建立H2O2氧化损伤模型,在细胞水平筛选保肝作用最强的中草药,在活体验证筛选中草药的有效性。本研究主要有以下四部分内容。1.花鲈原代肝细胞氧化损伤模型的构建本试验通过体外培养花鲈原代肝细胞,用不同浓度的H2O2（50、100、200、400和800μM）作用不同时间（2 h和4 h）,建立花鲈原代肝细胞氧化损伤模型。采用CCK-8法检测肝细胞活力,并测定细胞培养上清液中GPT、GOT和LDH的活性。结果显示,不同浓度H2O2作用不同时间均能降低肝细胞存活率,且降低趋势一致,在H2O2浓度为200μM、作用时间为2 h时,细胞存活率达到68.01%。肝细胞上清液中GPT、GOT和LDH的活性随着H2O2浓度的增加呈先升高再降低的趋势,在H2O2浓度为200μM时达到最大值。综上所述,200μM H2O2作用2 h为建立花鲈原代培养肝细胞氧化损伤模型的最佳条件。2.中草药对花鲈肝细胞氧化损伤的保护作用本试验通过已建立的花鲈H2O2氧化损伤模型,探究中草药对原代培养花鲈肝细胞氧化损伤的保护作用。选取10种单方和10组复方中药（M1、M2、M3、M4、M5、M6、M7、M8、M9和M10）,煎制成终浓度为5 mg/mL的水提物,用20种水提物处理花鲈原代培养肝细胞4 h,再换用浓度为200μM H2O2处理2 h进行氧化损伤,之后测定培养液中胞内酶活性（GPT、GOT和LDH）及肝细胞抗氧化指标（T-AOC、SOD和MDA）。结果显示:肝细胞受损后其培养液中GPT、GOT和LDH的活性显着高于对照组（P<0.05）,肝细胞中T-AOC和SOD活性显着低于对照组（P<0.05）,MDA含量显着高于对照组（P<0.05）。经中草药处理用H2O2进行氧化损伤后,各中草药处理组GPT、GOT和LDH活性降低,其中姜黄、五味子和M9组中草药GPT、GOT和LDH活性显着低于其他中药组（P<0.05）。姜黄和M9组中草药T-AOC和SOD活性显着高于其他组（P<0.05）,MDA含量显着低于其他组（P<0.05）。综上所述,本研究的10种单方和10组复方中草药中,大黄、丹参、银杏、姜黄、甘草、赤芍、猪苓、五味子、M1、M4、M6、M7和M9组中草药均能缓解H2O2诱导的原代培养花鲈肝细胞氧化损伤,其中姜黄和M9组中草药保护作用最强。3.饲料中添加中草药对花鲈生长性能与肝脏抗氧化能力的影响配制添加水平为0.2%、0.4%的姜黄水提物和0.2%、0.4%的M9组中草药水提物饲料投喂花鲈幼鱼,为期56 d的养殖试验,实验结束后测定花鲈生长性能相关指标:WGR、SGR、FR和SR;血清生化相关指标:GPT、GOT和LDH;肝脏抗氧化相关指标:SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX和MDA;以及肝脏抗氧化相关基因相对表达量:Nrf2、Keap1、HO-1和GCLC。结果显示,饲料中添加水平为0.4%的姜黄组显着促进花鲈的生长（P<0.05）,添加M9组中草药对花鲈的生长无显着影响（P>0.05）。添加水平为0.2%、0.4%的姜黄和添加水平为0.2%的M9组中草药显着降低了花鲈血清中GPT和GOT的活性（P<0.05）;添加不同水平的姜黄和M9组中草药显着提高了肝脏抗氧化酶活性（CAT、GSH-PX和T-AOC）（P<0.05）,添加水平为0.4%的姜黄和M9组中草药显着降低了MDA的含量（P<0.05）;添加不同水平的姜黄和M9组中草药显着上调花鲈肝脏中Nrf2、HO-1和GCLC的相对表达量（P<0.05）。综上,饲料中添加姜黄和M9组中草药均能提高花鲈肝脏抗氧化能力,其中添加水平为0.4%的姜黄和0.4%的M9组中草药的缓解效果最佳。4.饲料中添加中草药对花鲈急性氧化应激的保护作用在第四章养殖试验结束后,进行H2O2氧化损伤试验。采用腹腔注射的方法造成花鲈肝脏氧化损伤,48 h后观察花鲈存活情况,并分析血清生化指标（GPT、GOT、LDH）、肝脏抗氧化指标（SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX、MDA）以及抗氧化相关基因相对表达量（Nrf2、Keap1、HO-1和GCLC）。结果表明,注射H2O2后,姜黄和M9组中草药的存活率显着高于损伤组（P<0.05）,肝脏组织形态趋于对照组;姜黄和M9组中草药血清中GPT与GOT活性显着低于损伤组（P<0.05）,肝脏中T-AOC和GSH-PX活性显着高于损伤组（P<0.05）,MDA含量显着低于损伤组（P<0.05）。0.4%的姜黄和0.4%的M9组中草药间MDA含量无显着差异（P>0.05）;添加不同水平的姜黄和M9组中草药显着上调花鲈肝脏中Nrf2、HO-1和GCLC的相对表达量（P<0.05）,其中以姜黄和M9组中草药添加量为0.4%时效果最佳。因此,添加0.4%的姜黄和0.4%的M9组中草药能较好的缓解肝脏减少H2O2氧化损伤。综上所述,10种单方和10组复方中药中,姜黄和M9组中草药能显着提升花鲈肝细胞的抗氧化能力,对H2O2诱导的肝细胞氧化损伤起到较好的缓解作用;饲料中添加不同水平的姜黄和M9组中草药均能提高肝脏的抗氧化能力,其中添加量为0.4%的姜黄和0.4%的M9组中草药抗氧化能力最强;添加不同比例姜黄和M9组中草药能显着提高花鲈在急性氧化损伤后的存活率,其中添加0.4%的姜黄和0.4%的M9组中草药能更好的缓解肝脏损伤,具体机制可能与激活Nrf2-Keap1信号通路有关。
马启伟[2]（2021）在《外源牛磺酸对卵形鲳鲹生长及牛磺酸合成调控的影响》文中研究表明卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）隶属于鲹科、鲳鲹属,为暖水性中上层洄游性鱼类,已成为我国华南沿海地区重要的经济养殖鱼类,然而养殖过程中过高饵料系数以及不断提高的鱼粉价格,导致了养殖成本的增加,以价格低廉和分布广泛的植物蛋白替代鱼粉是维持卵形鲳鲹产业可持续发展的重要途径。但有研究表明过多的植物蛋白替代时,会使饲料中缺乏牛磺酸,导致鱼类生长性能下降,抗氧化免疫能力降低等不良影响。因此,探讨外源牛磺酸对鱼类产生的多种生理作用是必要的。本试验旨在探讨外源牛磺酸对卵形鲳鲹生长、抗氧化免疫能力及组织牛磺酸沉积的影响,并初步研究牛磺酸调节内源性合成的机制。试验以鱼粉（Fish meal）,发酵豆粕和玉米蛋白粉为基础蛋白源配制了牛磺酸含量分别为1.3（对照组）、4.4（T1）、7.4（T2）、10.5（T3）、12.7（T4）g·kg-1等氮等能饲料;将750尾卵形鲳鲹（81.0±0.5）g随机分为5组（每组150尾,分为3个平行）,试验为期56 d。实验结果如下:1.在本试验中,外源牛磺酸能显着提高卵形鲳鲹的生长性能,在T3组特定生长率最高（P<0.05）,生长最好;T1和T3组摄食率显着高于T0组（P<0.05）,T3组肝体比显着高于T0组（P<0.05）,各组间的饲料系数、脏体比和肥满度无显着性差异（P>0.05）。T2、T3和T4组全鱼粗蛋白和粗脂肪含量均显着高于T0组,T4组达到最高（P<0.05）;T3组和T4组全鱼水分含量显着低于T0组（P<0.05）;灰分含量在各组间无显着性差异（P>0.05）。在抗氧化免疫方面,随饲料牛磺酸含量的增加,卵形鲳鲹的抗氧化和抗病能力显着提高。血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和过氧化氢酶活性均随牛磺酸含量的增加而升高,T3组超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性达到最高（P<0.05）,T3和T4组过氧化氢酶活性均显着高于T0组（P<0.05）,T3和T4组丙二醛含量显着低于T0组（P<0.05）。T2、T3和T4组溶菌酶活性显着高于T0组（P<0.05）,T3组补体C4和免疫球蛋白（A、G）含量显着高于T0组（P<0.05）,各组间的补体C3和免疫球蛋白M含量无显着性差异（P>0.05）。综合来看,外源牛磺酸能显着提高卵形鲳鲹生长性能和抗氧化免疫能力。以特定生长率为指标,经多项式回归分析,当牛磺酸添加量为10.0 g·kg-1能达到最好的生长需求。2.首次获得卵形鲳鲹ToCBS、ToCSE、ToCDO、ToCSAD和ToADO的cDNA序列,全长分别为2290 bp、2463 bp、1070 bp、1882 bp、2405 bp,开放阅读框分别编码591、409、201、508、253个氨基酸,编码区氨基酸序列均具有显着结构特征。组织表达分析显示,ToCBS和ToCSE mRNA在脑和肝脏中的表达最高;ToCDO mRNA在肝脏和肠道中表达最高;ToCSAD mRNA在肾脏和肝脏中表达最高;ToADO mRNA在心脏和肾脏中表达较高。外源牛磺酸对牛磺酸组织沉积有显着影响,随饲料牛磺酸含量的增加,全鱼、肝、心、鳃、眼、肾、脑、和肌肉中牛磺酸浓度均显着升高（P<0.05）。饲料中不同牛磺酸水平对卵形鲳鲹牛磺酸相关合成酶的酶活和基因表达具有显着影响,CSE、CDO、CSAD和ADO酶活性随着饲粮牛磺酸含量的增加而降低（P<0.05）,对CBS活性没有显着影响（P>0.05）;随着牛磺酸含量的增加,ToCBS、ToCSE、ToCDO、ToCSAD和ToADO的基因表达量呈下降趋势,与对照组相比,T2、T3和T4组中ToCBS和ToCDO表达均显着下调（P<0.05）,T3组和T4组ToCSE表达显着低于T0组,在T3组表达最低（P<0.05）;ToCSAD在T4组表达水平最低（P<0.05）;ToADO基因在各实验组的表达均低于T0组（P<0.05）。另外,本试验还通过原核表达系统得到CDO重组蛋白。综合来看,卵形鲳鲹有两种主要途径合成牛磺酸的关键酶,具有内源性合成牛磺酸的能力,可以通过ADO和CDO-CSAD两种途径合成牛磺酸。外源牛磺酸能够影响组织牛磺酸沉积以及合成相关酶的酶活和基因表达,对内源性牛磺酸合成具有调控作用。3.通过16S rRNA测序技术对肠道微生物菌群进行分析,每个样品测得87 707条Tags,以97%的一致性为阈值将序列聚类成为OTUs,得到5 382个OTUs,能够注释到数据库的数目为5 130（95.32%）。卵形鲳鲹肠道微生物菌群占据主导地位的主要包括变形菌门Proteobacteria、软壁菌门Tenericutes、螺旋体门Spirochaetes（门水平）;支原体菌属Mycoplasma、短螺旋体属Brevinema、甲基杆菌属Methylobacterium（属水平）。优势菌群往往会影响宿主自身微生物的组成和结构,在门水平中,牛磺酸能降低变形菌门和螺旋体门的相对丰度,提高软壁菌门和拟杆菌门的相对丰度（P<0.05）,在属水平中,能降低支原体菌属丰度（P<0.05）,增加短螺旋体属丰度（P<0.05）。通过Alpha和Beta多样性分析表明牛磺酸能显着影响卵形鲳鲹肠道菌群,降低微生物多样性和丰富度,Alpha多样性分析显示:ACE指数、Chao1指数、香农-威纳指数和辛普森指数随牛磺酸含量的增高而降低,在T2组中最低（P<0.05）;Beta多样性分析显示:T1、T2和T3组聚集在一起,物种相似度较高;T0和T4组间样品距离较远。对肠道免疫研究发现,牛磺酸对卵形鲳鲹肠道TLRs/NF-κB信号通路有显着性影响,能够下调促炎因子ToTLR、ToNFkBP 65、ToTNF-α、ToIL-1β和上调抗炎因子ToIL-10表达,提高肠道免疫能力。综上所述,牛磺酸在卵形鲳鲹肠道中发挥着重要的生理功能,对肠道菌群及免疫能力有着显着的影响。牛磺酸能引起肠道菌群丰度和结构的改变,能够调节肠道TLRs/NF-κB信号通路,提高肠道免疫能力。
王钦汶[3]（2021）在《丹酚酸与丹参酮组分配伍对糖尿病肾病协同效应的研究》文中进行了进一步梳理一、文献研究糖尿病肾病是糖尿病患者临床常见而难治的慢性微血管并发症,也是导致终末期肾病的主要原因。世界卫生组织（WHO）预估,直至2045年,糖尿病患者将增至7亿人,而临床上超过1/3的糖尿病患者发展为DKD患者,是糖尿病患者致残和致死的重要原因。因此,针对DKD的发病机制研究以及开发新型治疗药物,已经成为国内外医药领域研究的热点。本文较为系统地总结和归纳了国内外糖尿病肾病的发病机制,主要有高血糖、高血压、血脂异常、肾素-血管紧张素-醛固酮系统的激活、胰岛素抵抗及氧化应激等多种因素,以及丹参酚酸和丹参酮干预糖尿病肾病的作用机制,丹参酚酸可调控Act-A蛋白表达,调节TGF-β1和MCP-1水平;抑制MAPK信号通路,减少ECM的产生;进而减轻糖尿病肾病的症状。丹参酮可通过抑制肾脏中的TGF-β/Smad和NF-κB通路的表达;抑制PTP1B改善T2DM患者中胰岛β细胞分泌功能:下调Wnt/β-catenin信号通路的活性来等。以期为进一步深入研究和药物开发提供科学依据。二、丹酚酸及丹参酮有效组分的提取制备与成分分析1.在课题组对丹酚酸类成分分离纯化工艺研究的基础上,采用课题组前期优化的提取分离纯化工艺,采用水提取醇沉淀的方法从丹参中获得丹酚酸粗提取物;进一步采用乙酸乙酯萃取法和大孔吸附树脂柱层析法进行纯化精制,获得高纯度的丹酚酸类成分。最终总丹酚酸（原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C）的纯度达84.82%。2.对丹参酮类成分的纯化工艺进行了系统研究与评价,以丹参中4种丹参酮类成分（二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA）的总含量为评价指标,通过大孔树脂进行分离纯化确定最佳纯化工艺。乙酸乙酯萃取进一步提高丹参酮类成分的纯度,最终确定最佳分离纯化工艺,获得总丹参酮的纯度为67.33%。三、基于细胞模型的丹参酚酸与丹参酮配伍效应与量效特征研究1.本实验采用高糖（GLU）对人肾小管上皮细胞（HK-2）进行造模,造成细胞损伤模型。经高糖造模给药后发现,丹酚酸和丹参酮以及配伍组对细胞均有保护作用,且中、低剂量对细胞保护作用较为显着。与单独用药组相比,配伍组对GLU诱导的HK-2细胞损伤保护作用较强,保护率较高的主要集中在配伍比例为10:1和9:1。在高糖模型下,模型组细胞内的炎症因子水平较正常组显着升高,各配伍组对高糖诱导的炎症因子异常现象,均有向正常组调节趋势。对于炎症因子IL-6、TNF-α MCP-1下调作用显着的配伍比例为4:1,配伍组10:1、9:1对IL-1/β的调控作用最佳。2.本实验采用过氧化氢（H2O2）对HK-2细胞进行造模,造成氧化损伤模型。经过氧化氢造模给药后发现,丹酚酸和丹参酮以及配伍组对细胞均有保护作用。其中丹酚酸剂量越高,对氧化损伤的HK-2细胞保护率越高。丹参酮对其也有较好的保护作用。在配伍组配伍比例为4:1、3:1、2:1的保护效果较为显着。在过氧化氢模型下,模型组细胞内的炎症因子水平较正常组显着升高,配伍给药组对炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α MCP-1下调作用显着的配伍比例为4:1,其他配伍比例组效果不明显。3.本实验采用GLU对大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞进行造模,造成细胞损伤模型。高糖造模给药后发现,丹酚酸和丹参酮以及配伍组对细胞均有保护作用,其中丹参酮保护效果优于丹酚酸,且配伍组对GLU诱导的HBZY-1细胞损伤的保护作用更为显着。结果显示,当配伍组丹酚酸比例越高,保护效果越佳。在高糖模型下,模型组细胞内的炎症因子水平较正常组显着升高,各配伍组对各炎症因子均有回调趋势,其中对IL-1β、TNF-α、MCP-1下调趋势明显,且比列在9:1和4:1时效果最为显着。但各配伍组对IL-6均无回调趋势。4.本实验采用H2O2对HBZY-1细胞进行造模,造成其氧化损伤模型。经过氧化氢造模给药后发现,丹酚酸和丹参酮以及配伍组对HBZY-1细胞均有保护作用。其中丹酚酸对氧化损伤的HBZY-1的保护作用呈现剂量依赖性。丹参酮对肾小球系膜细胞也有较好的保护作用。配伍组可有效防止细胞氧化损伤,其中配伍比例10:1、9:1、6:1、4:1,效果较为明显。在过氧化氢模型下,模型组细胞内的炎症因子水平较正常组显着升高,各配伍组对炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1下调效果明显的比例主要为10:1、9:1、5:1、4:1、3:1,其他配伍比例调节效果不显着。这个结果与细胞保护率趋势相一致。四、基于动物模型的丹参酚酸与丹参酮配伍效应与作用机制研究1.以小剂量STZ联合膳食诱导大鼠慢性肾损伤模型,分别给予厄贝沙坦（IRB）、二甲双胍（MEL）、丹酚酸（SAL）、丹参酮（TAN）、以及丹酚酸和丹参酮不同配伍比例4:1（COM1）、9:1（COM2）进行药物干预。病理切片结果表明,各给药组对糖尿病肾病大鼠的肾脏损伤的病理情况,均有一定程度改善作用,其中MEL组、COM1组、COM2组可显着改善肾脏的病理变化;24h尿蛋白检测结果显示,IRB、COM1、COM2有明显回调作用;而在生化指标血清肌酐SCr、尿素氮BUN、甘油三酯TG、总胆固醇TC、谷丙转氨酶AST、谷草转氨酶ALT等的检测结果中发现,各个给药组均有下调作用,其中MEL、COM1最为显着;在肾组织炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1）测定结果表明,IRB、SAL、COM2对其下调效果较为显着。综合病理切片情况、生化指标、24h尿蛋白结果和炎症因子水平,同时参考前期细胞水平的活性筛选结果,确定2种组分最优配伍比例为4:1,且丹酚酸和丹参酮配伍使用效果优于丹酚酸和丹参酮单独使用。2.采用非靶向代谢群组学研究方法,采用UPLC-Q-TOF-MS技术,并结合统计学分析,综合评价多种变量,探究糖尿病肾病的大鼠尿液、血浆的代谢轮廓特点,研究丹酚酸、丹参酮及其配伍组的生物效应与作用机制。结果表明,在血浆中发现并鉴定了 23个潜在生物标志物,在尿液中鉴定了 22个潜在生物标志物,其涉及牛磺酸和次牛磺酸代谢、苯丙氨酸代谢、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢等代谢通路;各组别在PLS-DA图上有较大不同,可以明显区分出正常组、模型组、阳性药组、丹酚酸、丹参酮及其配伍组,给药组均向正常状态转归。3.通过16Sr DNA技术分析糖尿病肾病大鼠结肠内容物中肠道菌群多样性,结果显示,相较与空白组,模型组大鼠肠道菌群在门水平上均有显着性差异。门水平上,模型组在厚壁菌门、拟杆菌门中丰度下降;在放线菌门、变形菌门、疣微菌门中,丰度上升。在科分类的菌群中 Bifidobacteriaceae、Enterobacteriaceae、Erysipelotrichaceae 在糖尿病肾病模型组呈上升趋势,Lactobacillaceae、Lachnospiraceae、Prevotellaceae在模型组呈下调趋势。表明糖尿病肾病鼠体内发生了一定程度的肠道菌群失调。各给药组能回调其肠道菌的失衡,其中IRB、MEL、COM1均表现出良好回调效果,且COM1比SAL、TAN调节效果显着。
热孜艳木·亚森[4]（2021）在《复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12神经衰老细胞的保护作用及其对细胞代谢物的影响研究》文中认为目的:检测复方铁线蕨颗粒总黄酮体外化学抗氧化活力和探讨其对D-半乳糖致PC12衰老细胞的保护作用及机制,并用细胞代谢组学技术进一步检测分析复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12衰老细胞代谢物和代谢通路的影响。方法:（1）采用水提醇沉法从复方铁线蕨颗粒中提取并纯化得到总黄酮提取物,利用紫外分光光度法测定含量。通过使用紫外分光光度法对不同浓度复方铁线蕨颗粒总黄酮的还原力,DPPH自由基、OH和O2-自由基清除率进行体外抗氧化活性测定。（2）采用MTT法检测不同浓度（8、16、32、64 g/L）D-半乳糖干预PC12细胞24、48、72 h时的细胞活力,用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色试剂盒检测衰老细胞数目并确定建立衰老细胞模型所需的干预时间和D-半乳糖浓度。（3）使用16 g/L的D-半乳糖干预PC12细胞48h以建立细胞衰老模型,MTT法检测复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12细胞的细胞活力,以确定给药浓度。β-半乳糖苷酶染色法检测衰老细胞数量。采用流式细胞技术检测PC12细胞周期及细胞凋亡情况的影响。以丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、乳酸脱氢酶（LDH）活力检测PC12细胞氧化应激水平。（4）采用核磁共振检测分析复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12衰老细胞及其培养基中的对抗衰老相关的代谢物和代谢通路的影响。结果;（1）复方铁线蕨颗粒中提取并纯化所得到的复方铁线蕨颗粒总黄酮含量为51.8%。复方铁线蕨颗粒总黄酮具有较强的还原能力和自由基清除能力,随着复方铁线蕨颗粒总黄酮浓度的增加,其对DPPH、OH和O2-自由基的清除能力和还原能力逐渐增加,且浓度为0.3 mg/m L时抗氧化作用达到最大值。（2）PC12细胞用8、16、32、64 g/L的D-半乳糖干预24、48、72 h时随着浓度的增加和干预时间的延长其存活率逐渐降低,β-半乳糖苷酶染色阳性率也明显增加,染蓝色细胞数目变多,与正常对照组比较具有统计学意义（P<0.01）,最终确定D-半乳糖诱导PC12细胞衰老模型的干预时间为48 h、浓度为16 g/L。（3）与正常对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例明显增加,细胞凋亡率和G0/G1期细胞比例以及细胞中MDA的含量和LDH的活力均明显增加,G2/M期和S期细胞比例以及细胞中SOD活力均显着降低（P<0.01）。与模型组比较,不同浓度的复方铁线蕨颗粒总黄酮组PC12细胞的存活率明显增高,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例明显减少,细胞凋亡率和G0/G1期细胞比例以及细胞中MDA的含量和LDH的活力均明显降低,G2/M期和S期细胞比例以及细胞中SOD的活力均显着升高（P<0.05或P<0.01）。（4）PC12衰老细胞及其培养基内涉及衰老相关的差异性代谢物共有36种:异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、脂类（LDL）、乳酸、丙氨酸、胆碱、三甲胺、脯氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、瓜氨酸、牛磺酸、蛋氨酸、丙酮酸、谷氨酰胺、肉碱、乙酰天冬氨酸、谷胱甘肽、α-酮戊二酸、苯丙氨酸、肌酸、组氨酸、β-葡萄糖、肌醇、鲨肌醇、甘氨酸、α-葡萄糖、丝氨酸、肌酸酐、络氨酸、肌酐、鸟氨酸、甜菜碱、氨基马尿酸和不饱和脂类。复方铁线蕨颗粒总黄酮通过改善PC12细胞内的谷胱甘肽代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,丙酮酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢,TCA循环,半胱氨酸和蛋氨酸代谢,糖酵解和葡萄糖异生,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢,氨基酸生物合成,氨酰生物合成,精氨酸和脯氨酸代谢以及精氨酸生物合成等代谢途径的紊乱进而延缓PC12细胞衰老过程。结论:D-半乳糖能够诱导PC12细胞衰老。复方铁线蕨颗粒总黄酮使DPPH、羟基、超氧阴离子等自由基的清除率和还原力均增强,能起到较强的抗氧化效果。复方铁线蕨颗粒总黄酮通过抑制PC12细胞凋亡及细胞周期的阻滞,降低氧化应激,促进细胞增殖,改善氨基酸、糖、能量代谢等代谢紊乱以及降低参与氧化应激的代谢物含量从而改善D-半乳糖对PC12细胞的损伤,起到较强的抗衰老作用。
李丽杰[5]（2020）在《牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究》文中指出腹水综合征（AS）是一种以患病鸡腹腔积液和心脏衰竭为特征的代谢性疾病,该病典型特征为鸡右心肥大,它是导致肉鸡死亡的一个主要原因,且该病的发生和低温环境之间有着密切的关系。长时间的低温会导致肉鸡氧化应激的发生,增加肉鸡心肌中活性氧的含量,氧化与抗氧化系统之间的动态失衡,最终使心肌损伤。Keap1/Nrf2信号通路在心肌抗氧化损伤中有着非常重要的作用。牛磺酸是心肌细胞中含量最丰富的游离氨基酸,具有提高细胞的抗氧化能力,调控Keap1/Nrf2信号通路的作用。目前有关Keap1/Nrf2信号通路是否参与肉鸡心肌肥大损伤尚无研究报道。因此,本试验通过环境低温诱导肉鸡右心肥大,在饮水中添加牛磺酸,体外通过异丙肾上腺素（ISO）诱导H9c2细胞肥大,探讨牛磺酸对肉鸡心肌肥大过程中Keap1/Nrf2信号通路的影响,为应用牛磺酸防治腹水综合征提供理论基础。肉鸡饲养试验将240只14日龄肉仔鸡随机分为三组,对照（C）组,低温（M）组、牛磺酸低温（T）组。在第35日龄时收集右心室肌组织。采用TBA法检测MDA含量、比色法检测GSH-Px活力、LDH活力、微板法检测SOD活力、可见光法检测CAT活力;荧光定量PCR法测定心肌抗氧化基因（PI3K、AKT、Hsp70、Keap1、Nrf2、HO-1、NQ O1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px）m RNA表达水平的变化。（1）抗氧化酶测定结果:M组与C组相比较,M组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着下降（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着升高（P<0.01）;M组与C组相比较,M组中MDA、LDH含量极显着升高（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中M DA、LDH含量极显着下降（P<0.01）。（2）牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2信号通路因子m RNA表达结果:M组与C组相比,M组Hsp70、PI3K、AKT m RNA极显着升高（P<0.01）,T组与M组相比,T组Hsp70、PI3K、AKT m RNA显着下降（P<0.05）;M组与C组相比,M组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA的表达水平下降（P<0.05）,T组与M组相比,T组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、G CLC、GSH-Px m RNA表达水平显着上调（P<0.05）。细胞试验将H9c2细胞随机分为:对照组（C组）、对照牛磺酸组（CT组）、ISO组（M组）、ISO组+牛磺酸（MT组）。测定方法及指标同上。测定结果表明:（1）抗氧化酶测定:M组与C组相比较,M组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着下降（P<0.01）,T组与M组进行比较,T组中SOD、CAT、GSH-Px活性极显着升高（P<0.01）;M组与C组相比,M组中MDA、LDH含量极显着升高（P<0.01）,T组与M组进行比,T组中MDA、LDH含量极显着下降（P<0.01）。（2）牛磺酸对H9c2细胞Keap1/Nrf2信号通路因子m RNA表达结果:M组与C组相比,M组Hsp70、PI3K、AKT、HO-1、γ-gcs m RNA表达量极显着升高（P<0.01）,CT组与M组相比,CT组Hsp70、PI3K、AKT m RNA表达量显着下降（P<0.05）;M组与C组相比,M组Keap1、Nrf2、NQO1、GCLC、GSH-Px m RNA的表达水平下降（P<0.05）,CT组与M组相比,CT组Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA表达水平显着上调（P<0.05）。1.牛磺酸处理后,心肌和H9c2细胞中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT的活性升高,LDH、MDA含量降低,推测牛磺酸可以提高心肌和H9c2细胞抗氧化能力,维持心肌和H9c2细胞功能。2.牛磺酸处理后,负调控因子Hsp70、PI3K、AKT m RNA下调,Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1、γ-gcs、GCLC、GSH-Px m RNA上调。由此可推测,牛磺酸参与了Keap1/Nrf2通路调控,发挥抗氧化保护心肌作用。综上所述,牛磺酸可能通过上调Nrf2信号通路增强心肌抗氧化能力,从而对低温环境下肉鸡心肌起到保护作用。
何程实[6]（2020）在《蛋白组学研究鸡胚肝脏组织中抗氧酶的关键调控蛋白和调控机制》文中指出鸡胚在发育过程中仅依靠鸡蛋中沉积的营养物质来维持,不与外界进行物质交换,因此只能通过自身来代谢废物。同时由于发育过程中机体代谢增加,鸡胚在发育过程中产生了大量的活性氧堆积在机体当中,而高水平的活性氧会对蛋白、脂质和DNA造成损伤。研究发现鸡胚中的过氧化物酶（Peroxidase,POD）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）形成第一道抗氧化防御线,这道防御线共同发挥作用来抵御活性氧对机体造成的损伤。在整个鸡胚发育过程中,这些抗氧化酶发挥了重要的作用,酶的活性也随之不停的发生变化。因此明确调控抗氧化酶的作用机制至关重要,但目前该方面的研究尚少。因此本研究基于课题组前期转录组测序的研究,进一步通过蛋白组测序分别对Day12、Day16、Day20的鸡胚蛋肝脏组织进行研究,鉴定鸡胚发育过程中调控抗氧化酶的关键蛋白,以此探究鸡胚发育过程中抗氧化酶的调控机制。本研究开展了三方面的内容:1.鉴定影响抗氧化酶活性的关键蛋白:通过对Day12、Day16、Day20的鸡胚肝脏进行蛋白组测序,筛选差异蛋白,通过GO富集分析和KEGG Pathway富集分析,筛选出与抗氧化酶活性相关差异蛋白和富集通路。试验一共筛选出389个差异蛋白,50条富集通路。其中与抗氧化相关的差异蛋白包括:APOA1、APOA4、APOH、GPX1、GPX3、TTPA、HSP90AB1等。与抗氧化相关的KEGG Pathway包括:谷胱甘肽代谢途径、乙醛酸和二羧酸代谢途径和丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代谢途径等。综合分析确定将GPX1,GPX3,HAO2、TATP等蛋白作为影响抗氧化酶活性的关键候选蛋白进行后续的验证。2.建立鸡胚肝细胞氧化模型:为研究肝细胞参与的抗氧化作用机制,本研究通过培养鸡胚的肝细胞作为氧化模型,检测不同浓度过氧化氢对鸡胚肝细胞氧化酶的影响。分别研究了2、4、6、8、10、12mmol/L的过氧化氢对肝细胞的影响,结果表明过氧化氢鸡胚肝细胞氧化模型的最优条件为:过氧化氢浓度8mmol/L,培养4h。3.牛磺酸介导GPX1参与调控鸡胚肝细胞抗氧化作用的机制研究:牛磺酸具有明显的抗氧化作用,本研究通过添加不同浓度的牛磺酸,筛选最适浓度。在此基础上,鉴定试验组与对照组GPX1的表达量的变化,以探究GPX1调控鸡胚肝细胞抗氧化的作用机制。结果表明:牛磺酸浓度为6.25、12.5mmol/L时可以有效抑制过氧化氢对鸡胚肝细胞的损害。定量PCR结果表明牛磺酸可以明显提高GPX1的表达量,并且基因的表达程度与牛磺酸的添加量成正比。因此表明牛磺酸可能通过介导GPX1的表达参与鸡胚抗氧化作用。本研究首次通过蛋白组学技术对鸡胚肝脏抗氧化酶体系进行了研究,通过建立鸡胚肝细胞的氧化模型,研究鸡胚发育过程中牛磺酸抑制氧化损伤的作用,并探究其对GPX1基因表达的影响。本研究为进一步研究鸡胚发育,了解在氧化应激过程中胚胎抗氧化酶的调控机制提供理论依据。
杨松[7]（2020）在《人参多糖改善氧化应激致肝细胞损伤的药效物质及作用机制研究》文中提出目的:本研究通过建立体外H2O2诱导的BRL-3A细胞损伤模型,开展人参对损伤模型具有保护作用的物质基础筛选,在此基础上,探索人参活性成分通过调控肝细胞的线粒体及糖异生功能从而发挥其保护肝细胞损伤的作用机制。为人参发挥补气、供能功效的进一步研究提供数据支撑。方法:1.使用H2O2进行造模,损伤肝细胞后,给予人参三种有效成分处理,MTT法检测肝细胞的存活率,确定细胞密度、损伤时间、给药浓度以及人参最佳有效成分等。2.采用流式细胞技术检测各组BRL-3A细胞凋亡的水平,MMP的变化及ROS检测。3.采用ELISA检测技术检测各组BRL-3A细胞肝糖原、ATP、SOD、MDA、G6P、PEPCK等。4.采用RT-PCR技术开展不同给药组目标基因转录水平变化、Western blot技术开展目标蛋白表达量的变化,通过外源性加入PGC-1α抑制剂开展人参多糖发挥保护作用的可能作用靶点研究。结果:1.经筛选,人参三种有效成分中人参多糖优于人参蛋白及人参皂苷（p<0.05）,人参多糖对H2O2损伤的大鼠肝细胞有显着的恢复作用,且呈时间-剂量依赖关系,其最有效浓度为1.6mg/ml（P<0.05）。2.经流式细胞术检测,人参多糖能有效降低细胞凋亡水平,通过提高线粒体膜电位来恢复H2O2对肝细胞的损伤,同时,降低氧化应激导致的活性氧升高,均呈浓度依赖关系。3.与单独H2O2作用的损伤组相对比,人参多糖减弱了H2O2诱导的Bax蛋白表达水平的上调,同时,在q PCR水平上,Bcl-2/Bax表达升高,有效的阻止了凋亡的发生（p<0.05）。4.人参多糖能够恢复氧化应激造成的肝糖原降低及ATP含量降低,经过提高SOD、减少MDA来削弱H2O2产生的损伤,以及提高G6P、PEPCK含量来恢复肝细胞糖异生的功能,从而探究人参多糖的药效物质机制研究。5.通过蛋白免疫印迹法及q PCR技术证实,人参多糖作用后能够明显升高PGC-1α的表达（p<0.05）,且呈现浓度依赖性。人参多糖依赖于SIRT1/PGC-1α通路提高PGC-1α的表达,PGC-1α抑制剂干预后,PGC-1α的蛋白水平明显降低（p<0.05）,人参多糖对受损肝细胞的保护作用下降。结论:1.人参多糖对H2O2诱导的大鼠肝细胞损伤有一定的保护作用且呈浓度-剂量依赖关系。2.人参多糖通过降低MMP来恢复肝细胞线粒体功能,使线粒体正常产生ATP,从而提高ATP含量。3.人参多糖通过提升肝细胞糖异生功能、降低氧化应激损伤来恢复肝细胞功能,从而恢复肝糖原的输出。4.人参多糖通过激活SIRT1/PGC-1α信号通路,提高PGC-1α的表达来降低氧化应激对肝细胞的损伤。
唐日益[8]（2019）在《牛磺酸对大鼠黄曲霉毒素B1中毒的干预作用及机制研究》文中研究说明黄曲霉毒素B1（AFB1）是毒性最强的黄曲霉毒素（AF）之一,广泛存在于发霉的花生、玉米、小麦等农产品及饲料中,严重威胁着人类及动物的健康。AFB1在肝脏代谢过程中,生成有毒代谢产物以及氧自由基（ROS）,造成肝脏结构及功能的损伤;同时,AFB1代谢产物主要由肾脏排出体外,可使肾脏发生不可逆损害;AFB1毒性作用也可累及脾脏,引发机体发生炎症反应,降低免疫力。牛磺酸是人和哺乳动物体内的条件性必需氨基酸,在多种原因导致的组织损伤中发挥着抗氧化、抗炎、增强免疫力等生物学功能,但其对AFB1中毒引起的肝、肾及脾脏功能损伤的作用尚不明确。本试验通过制备AFB1中毒大鼠模型,同时饮水中添加牛磺酸,探讨牛磺酸对AFB1中毒大鼠的保护作用及机制,以期为应用牛磺酸预防AFB1中毒提供理论依据。试验一将SD大鼠随机分为3组:采用250μg/kg B.W AFB1灌胃的方式制备动物模型,分别以灌胃相同剂量的生理盐水和AFB1溶剂（DMSO）的大鼠作为正常对照组和溶剂对照组。40天试验结束后,采集大鼠的肝脏、肾脏和脾脏,石蜡切片后显微镜下观察病理变化。试验结果表明:对照组大鼠肝脏、肾脏及脾脏结构正常;AFB1中毒大鼠肝细胞索紊乱,细胞发生颗粒变性及脂肪变性;肾小管上皮细胞肿胀,胞浆呈颗粒变性;脾脏红髓充血,白髓萎缩,红髓、白髓分界不清。对照组大鼠肝脏、肾脏和脾脏结构未见显着病理改变。说明40d连续灌胃AFB1造成了大鼠的肝脏、肾脏和脾脏损伤,成功制备了AFB1中毒大鼠模型,而单独添加溶剂DMSO对脏器结构无显着影响。试验二将SD大鼠随机分为7组:模型制备方法参照试验一进行,正常对照组、溶剂对照组、牛磺酸对照组大鼠分别灌胃相同剂量的生理盐水、DMSO以及2%牛磺酸,牛磺酸干预组大鼠在制备AFB1中毒模型的基础上,饮水中分别添加1%、2%、3%牛磺酸。40d试验结束后,收集大鼠血液、尿液,检测肝功能、肾功能及血液免疫球蛋白水平。试验结果表明:随着试验时间的延长,模型组大鼠采食量逐渐减少,从20d开始,较对照组下降显着（P<0.05）;体重较对照组增长缓慢,从第10d开始,与对照组差异显着（P<0.05）;肝脏、肾脏指数显着增加,脾脏指数显着下降（P<0.01）;血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）活性,尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、尿酸（UA）、胱抑素（Cys-c）水平,尿液ALP、微量白蛋白（m ALB）的水平均高于正常对照组大鼠（P<0.05或P<0.01）;血清中免疫球蛋白A（Ig A）、免疫球蛋白M（Ig M）、免疫球蛋白G（Ig G）含量明显低于正常对照组大鼠（P<0.05）;牛磺酸干预组大鼠食欲增加,从30d开始,与模型组相比,采食量增加显着（P<0.05）;牛磺酸干预组体增重从试验第10d开始较模型组显着增加<0.05);肝脏、肾脏指数较AFB1中毒大鼠明显降低,脾脏指数显着增加（P<0.05）;血清ALT、AST、ALP活性、LDH活性、BUN、CRE、UA、Cys-c水平、尿液ALP、m ALB水平显着升高（P<0.05或P<0.01）;血清Ig A、Ig M、Ig G含量显着降低（P<0.05或P<0.01）,其中2%和3%牛磺酸干预效果优于1%牛磺酸;牛磺酸对照组、DMSO对照组大鼠上述指标与正常对照组大鼠差异不显着。上述结果说明牛磺酸能缓解大鼠的AFB1中毒症状,改善AFB1导致的大鼠肝脏、肾脏和脾脏组织的病理损伤,提高大鼠的肝、肾功能及体液免疫机能,从而在一定程度上保护大鼠免受AFB1导致的毒性损伤。试验三在前期结果的基础上将大鼠随机分为5组:牛磺酸干预组选择2%牛磺酸添加到饮水中,其余各组大鼠处理同试验二。40d试验结束后,采集肝脏、肾脏和脾脏,检测抗氧化能力,肝脏线粒体功能,肝脏、肾脏细胞凋亡情况,肝脏、肾脏Nrf2信号通路和细胞凋亡通路相关因子m RNA表达水平,肝脏、脾脏炎性因子水平及TLR4及下游信号通路相关基因表达水平。试验结果表明:AFB1中毒大鼠肝脏、肾脏和脾脏中超氧化物歧化酶（SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、谷胱甘肽（GSH）活性/含量显着降低,丙二醛（MDA）水平显着增加（P<0.05或P<0.01）;肝脏、肾脏信号Nrf2通路关键因子Nrf2、NQO1、HO-1、GCLC、GSH-Px、SOD m RNA表达显着降低（P<0.05或P<0.01）;肝脏线粒体膜电位（MMP）、线粒体解偶联蛋白2（UCP2）、肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT-1）、细胞色素C氧化酶（COX）、NADPH细胞色素C还原酶（NCR）水平显着降低（P<0.05或P<0.01）;肝脏、肾脏细胞凋亡率显着增加,Bax、Bak-1、Apaf-1、Caspase 9、Caspase 3 m RNA表达显着升高,Bcl-2 m RNA表达量下降（P<0.05或P<0.01）;肝脏、脾脏肿瘤坏死因子α（TNF-α）,白细胞介素1β（IL-1β）,白细胞介素6（IL-6）水平显着升高,TLR4信号通路关键因子TLR4、CD14、My D88、NF-κB p65 m RNA表达量显着升高（P<0.05或P<0.01）。与AFB1中毒大鼠相比,2%牛磺酸干预组大鼠肝脏、肾脏和脾脏SOD、T-AOC、CAT、GSH-Px、GSH活性/含量显着增加,MDA水平显着降低（P<0.05或P<0.01）;肝脏、肾脏Nrf2信号通路关键因子m RNA表达显着增加;肝脏MMP、UCP2、CPT-1、COX、NCR水平显着升高（P<0.05或P<0.01）;肝脏、肾脏细胞凋亡率显着减少,Bax、Bak-1、Apaf-1、Caspase 9、Caspase 3 m RNA表达量显着降低,Bcl-2 m RNA表达量显着增加（P<0.05或P<0.01）;肝脏、脾脏TNF-α,IL-1β,IL-6水平显着降低,TLR4、信号通路关键因子m RNA表达量显着减少（P<0.05或P<0.01）。以上结果说明:（1）牛磺酸可通过上调Nrf2信号通路,促进抗氧化酶的转录和翻译,增强大鼠肝脏、肾脏和脾脏的抗氧化能力,清除过量的ROS,从而保护大鼠免受AFB1导致的氧化应激损伤;（2）牛磺酸可保护线粒体的结构,维持正常的线粒体功能,进而通过抑制线粒体凋亡通路减少AFB1诱导的肝脏、肾脏细胞凋亡;（3）牛磺酸可下调AFB1中毒大鼠TLR4及其下游信号通路的表达,抑制炎性因子的转录及翻译,进而抑制AFB1引起的肝脏、脾脏的炎性损伤。
陈祥兴[9]（2018）在《过氧化氢诱导的肉鸡氧化损伤机制及牛磺酸的缓解作用研究》文中研究说明氧化应激会使肉鸡机体活性氧（ROS）水平升高,引起氧化损伤,导致肉鸡生长性能和肉品质下降,危害肉鸡产业的发展。前人在研究氧化问题时,大都以单一应激源刺激机体间接产生ROS为前提。但应激源的性质和处理方法不同,使得氧化损伤确切机制尚不明确。因此采用直接增加机体ROS水平的方法可为探讨氧化损伤机制提供新思路。已有研究证实过氧化氢（H202）是机体内的高活性ROS,几乎可由所有氧化应激源产生,并且研究表明牛磺酸具有抗氧化性。基于此,本研究拟采用腹腔注射H2O2的方法,研究H2O2诱发的高浓度ROS对肉鸡氧化损伤与生长性能、肉品质变化的效应关系;结合细胞培养研究H202诱发的高浓度ROS对肉鸡肝脏和肌肉细胞凋亡与自噬发生变化规律以及核因子kappa B（NF-κB）通路关键因子表达规律的影响与作用机制,并进一步研究牛磺酸的缓解作用。本研究可为肉鸡生产中建立科学缓解氧化应激的管理与营养调控策略提供理论依据。1.腹腔注射过氧化氢对肉鸡生长性能和肉品质的影响及其对肝脏和肌肉氧化损伤作用研究试验一:研究H2O2对肉鸡生长性能和肉品质以及肝脏和肌肉氧化损伤状态的影响。选取320只1日龄健康AA肉鸡,随机分为5个处理:（Ⅰ）:对照组（Control）,不进行注射;（Ⅱ）:生理盐水组（Saline）,腹腔注射0.75%的生理盐水（1 mL/kg BW）;（Ⅲ）:H2O2（0.74）组,腹腔注射 0.74 mmol/kg BW 的 H202溶液;（Ⅳ）:H202（1.48）组,腹腔注射 1.48 mmol/kg BW 的 H202 溶液;（V）:H202（2.96）组,腹腔注射 2.96 mmol/kg BW的H202溶液,每个处理8个重复,每个重复8只鸡。饲养期为42 d,在饲养期的第16和37 d进行腹腔注射。结果显示:H202（1.48）和H202（2.96）组肉鸡22-42 d和1-42 d阶段的体增重（BWG）显着低于（P<0.05）Control和Saline组,而H202（2.96）组肉鸡22-42 d和1-42 d阶段以及H202（1.48）组1-42 d阶段的料重比（F/G）显着高于（P<0.05）Control和Saline组;H202（2.96）组的肉鸡胸肌和腿肌以及H202（1.48）组的腿肌宰后24小时的pH（pH24 h）显着低于（P<0.05）Control和Saline组,而H202（2.96）组肉鸡胸肌和腿肌的剪切力以及腿肌滴水损失则显着高于（P<0.05）Control和Saline组;21日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）肝脏相对重量以及血清的总抗氧化能力（T-AOC）和过氧化氢酶（CAT）活性,血清和肝脏的总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和总巯基含量,显着升高了（P<0.05）血清的高级蛋白产物（AOPPs）含量,血清和肝脏的8-羟基脱氧核糖鸟苷酸（8-OHdG）和丙二醛（MDA）含量以及肝脏的羰基含量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）肝脏相对重量以及血清的T-AOC和总巯基含量,血清和肝脏的T-SOD活性,肝脏的GSH-Px的活性,显着升高了（P<0.05）肝脏的MDA含量;21日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）胸肌和腿肌的T-AOC、T-SOD和GSH-Px的活性以及腿肌总巯基含量,显着升高了（P<0.05）胸肌和腿肌的羰基、8-OHdG、AOPPs和MDA含量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H2O2显着降低了腿肌的T-AOC和GSH-Px活性,显着升高了（P<0.05）胸肌的MDA含量。42日龄时,与Control和.Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）血清的T-AOC和CAT活性,血清和肝脏的T-SOD和GSH-Px活性以及总巯基含量,显着升高了（P<0.05）胰腺器官指数,肝脏的ROS水平以及血清的8-OHdG含量,血清和肝脏的AOPPs、MDA含量和肝脏的羰基含量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）血清的T-AOC和T-SOD活性,显着升高了（P<0.05）肝脏的ROS水平以及血清和肝脏的MDA含量和肝脏羰基含量;42日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）肌肉的相对重量,胸肌的线粒体复合物Ⅰ和Ⅲ活性以及膜电位,胸肌和腿肌T-AOC和T-SOD、GSH-Px的活性,总巯基含量,显着升高了（P<0.05）胸肌和腿肌的羰基、8-OHdG、AOPPs和MDA含量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）胸肌的线粒体复合物Ⅲ活性和膜电位,胸肌和腿肌的T-SOD的活性和总巯基含量以及腿肌的GSH-Px活性,显着升高了（P<0.05）胸肌的羰基和8-OHdG含量以及腿肌的MDA含量。此外,H2O2组的胸肌和腿肌ROS水平均显着高于（P<0.05）Control和Saline组;与Control和Saline组相比,H2O2（1.48）和H2O2（2.96）组肝脏组织形态呈现病理状态并且凋亡细胞数量增多。2.腹腔注射过氧化氢诱导的肉鸡肝脏和肌肉氧化损伤机制研究试验二的设计与试验一相同。研究H2O2诱导的肝脏和肌肉细胞凋亡与自噬发生的变化规律和NF-κB信号通路关键因子的表达。结果显示:21日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）肝脏的核因子kappa B副族1（p50）、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白（Bcl-2）和v-rel禽网状内皮增生病病毒癌基因同源物A（RelA）的mRNA表达量,显着升高了（P<0.05）肝脏半胱天冬蛋白酶（caspase）-3,6,8、Beclin 1的mRNA表达量和微管相关蛋白1轻链3（LC3）-Ⅱ/Ⅰ的值以及Bcl-2相关X蛋白（Bax）的mRNA表达量;21日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）胸肌和腿肌p50、Bcl-2和RelA的mRNA表达量,显着提高了（P<0.05）胸肌和腿肌 caspase-3,6,8、Beclin 1 以及 Bax 的 mRNA 表达量,而腹腔注射 1.48 mmol/kg BW的H202显着降低了（P<0.05）胸肌p50和Bcl-2的mRNA表达量。42日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2显着降低了（P<0.05）肝脏p50和RelA的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平,显着升高了（P<0.05）肝脏caspase-3,6,8的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1的mRNA表达量和LC3-Ⅱ/Ⅰ的值以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平、Bax的mRNA表达量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H2O2显着升高了（P<0.05）肝脏caspase-6的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、LC3-Ⅱ蛋白表达水平和Bax的mRNA表达量;42日龄时,与Control和Saline组相比,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H202显着降低了（P<0.05）胸肌和腿肌p50、Bcl-2和RelA的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平,显着升高了（P<0.05）胸肌和腿肌的caspase-3,6,8的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的mRNA表达量以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平、Bax的mRNA表达量,而腹腔注射1.48 mmol/kg BW的H202显着降低了（P<0.05）胸肌的NF-κB蛋白表达水平以及腿肌的p50的mRNA表达量,显着升高了（P<0.05）胸肌caspase-3的mRNA表达量及其蛋白表达水平以及胸肌和腿肌LC3-Ⅱ蛋白表达水平。3.过氧化氢对小鼠成肌细胞的氧化损伤作用研究试验三:以体外培养的小鼠成肌细胞（C2C12）为研究对象,进一步探讨氧化损伤可能的路径。试验分为3个处理组,每个处理组6个重复。处理组分别为:（Ⅰ）:对照组（Control）,以DDMEM培养基培养的细胞作为空白对照,培养24 h;（Ⅱ）:PDTC组（PDTC）,以 1 mL/孔 20 μmol/L的PDTC孵育细胞24 h;（Ⅲ）:H202组（H202）,加入MTT法筛选出的安全浓度（0.5 mmol/L）的H202处理细胞24 h。结果显示:与Control组相比,PDTC组的总凋亡率、caspase-3,6,9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的mRNA表达量以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平均显着增加（P<0.05）,p50、Bcl-2、RelA和Cox-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平则显着降低（P<0.05）;与Control组相比,H202组的细胞ROS水平、细胞总凋亡率、caspase-3,6,8,9的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1和LC3-Ⅱ/Ⅰ的mRNA表达量以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平,Bax的mRNA表达量均显着增加（P<0.05）,而p50、Bcl-2、RelA和Cox-1,2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平则显着降低（P<0.05）。4.牛磺酸对过氧化氢诱导的肉鸡肌肉氧化损伤缓解作用及机制研究试验四:研究牛磺酸对高浓度ROS引起的肉鸡肌肉氧化损伤缓解作用和机制。选取192只28日龄健康AA肉鸡,随机分为3个处理组,每个处理组8个重复,每个重复8只鸡。3个处理组分别为:（Ⅰ）:对照组（Control）,不进行注射,饲喂基础日粮;（Ⅱ）:H2O2组（H2O2）,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H2O2溶液,饲喂基础日粮;（Ⅲ）:H2O2+牛磺酸组（H2O2+taurine）,腹腔注射2.96 mmol/kg BW的H202溶液,饲喂0.5%的牛磺酸试验日粮。饲养期为14 d,并第14 d（42日龄）进行屠宰,屠宰前5天进行腹腔注射。结果显示:H2O2组的BWG、FI、相对肌肉重、胸肌的滴水损失以及H2O2组和H2O2+taurine组的胸肌和腿肌pH24h均显着低于（P<0.05）Control组,而H2O2组的F/G以及H2O2组和H202+taurine组胸肌和腿肌的剪切力则显着高于（P<0.05）Control组;与Control组相比,H202组胸肌的线粒体复合物Ⅰ和Ⅲ活性以及膜电位、T-AOC和T-SOD、GSH-Px活性、总疏基含量显着降低（P<0.05）,胸肌的ROS水平以及8-OHdG、AOPPs、羰基和MDA含量则显着升高（P<0.05）,而H2O2+taurine组胸肌的T-SOD活性显着降低（P<0.05）,胸肌的ROS水平以及AOPPs和MDA含量则显着升高（P<0.05）;与Control组相比,H2O2组胸肌p50、Bcl-2和RelA的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,胸肌caspase-3,6,8的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1的mRNA表达量和LC3-Ⅱ/Ⅰ的值以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平、Bax的mRNA表达量则显着升高（P<0.05）,而H202+taurine组胸肌的p50和Bcl-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平显着降低（P<0.05）,胸肌的caspase-3,6,8的mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1的mRNA表达量和LC3-Ⅱ/Ⅰ的值以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。此外,H202+taurine组的BWG、FI显着高于（P<0.05）H2O2组,而F/G以及胸肌的剪切力则显着低于（P<0.05）H2O2组;与H2O2组相比,H2O2+taurine组胸肌的线粒体复合物Ⅲ活性以及T-AOC和T-SOD、GSH-Px活性显着升高（P<0.05）,胸肌的ROS水平以及羰基和AOPPs含量显着则降低（P<0.05）;与H2O2组相比,H2O2+taurine组p50和Bcl-2的mRNA表达量以及NF-κB蛋白表达水平显着升高（P<0.05）,胸肌的caspase-3,6,8mRNA表达量以及caspase-3蛋白表达水平、Beclin 1的mRNA表达量和LC3-Ⅱ/Ⅰ的值以及LC3-Ⅱ蛋白表达水平则显着降低（P<0.05）。综上所述,得出如下结论:（1）H2O2引起的氧化应激能够降低肉鸡的生长性能,抑制肌肉发育并造成肉鸡肉品质的下降。H2O2能够增加肉鸡肝脏和肌肉的ROS水平,造成肉鸡胸肌线粒体功能的损伤,并对肉鸡肝脏和胸肌的组织形态和氧化还原状态有负面的影响。（2）H2O2引起的氧化应激能够促进肉鸡肝脏和肌肉的细胞凋亡和自噬发生,并且通过抑制NF-κB信号通路调控细胞凋亡和自噬过程,这可能是肉鸡机体氧化损伤的重要路径。（3）H2O2会引起C2C12细胞的ROS升高,并且能够通过抑制NF-κB信号通路介导细胞凋亡和自噬的发生,这与NF-κB因子的特异性抑制剂PDTC的作用相类似。（4）牛磺酸的添加能够抵抗H2O2对肉鸡生长性能和肉品质的危害,并在一定程度上缓解H2O2导致的肉鸡胸肌氧化损害。这可能是与牛磺酸下调了 H202导致的ROS水平升高,进而通过激活NF-κB信号通路调控肉鸡胸肌细胞凋亡和自噬的过程有关。
徐德利[10]（2016）在《钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预》文中指出乌骨鸡（Gallus gallus domesticus Brisson）是江西地方特色食品资源和地道药材之一,有悠久的滋补和药用历史,乌骨鸡的特殊性就在其富含黑色素,黑色素是其重要的功能成分。矿物质元素会直接或是间接地对黑色素生物合成过程产生影响,Ca、Fe元素在乌骨鸡黑色素中的含量显着高于其他矿物元素,可能是乌骨鸡黑色素生物合成中参与程度最高的矿物元素。本研究在获得能大量体外培养且稳定传代的乌骨鸡黑色素细胞的基础上,研究Ca、Fe元素对乌骨鸡黑色素细胞生长和黑色素生物合成的干预作用,为进一步提高和改善乌骨鸡中黑色素的合成量、结构组成和功能活性提供科学基础,为促进江西乌骨鸡资源开发和产业发展作出贡献。主要研究结论归纳如下:1,采用MTT法研究葡萄糖、卵黄总脂质等生长因子对黑色素细胞增殖作用,可知葡萄糖浓度是乌骨鸡黑色素细胞生长的必要条件,又是黑色素合成的主要影响因素。在高糖（25mMGlc）培养条件下,5%FBS、1%卵黄总脂质有显着促进细胞生长作用,作用强度且无显着差别,且两者联用有协同作用;TPA和卵黄总脂质的生长曲线说明,卵黄总脂质较TPA更有利于乌骨鸡黑色素细胞的生长;低浓度葡萄糖（16.8 mM）培养条件下FBS是促进细胞生长的主要因素。2,研究了钙铁元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响发现,低浓度（0.01-0.02mmol/L）Fe3+和Fe2+对黑色素细胞的生长有显着促进作用。在0.04 mmol/L Fe3+背景下,0.04-0.16 mmol/L Fe2+对乌骨鸡黑色素细胞的生长有抑制作用。不同价态的铁元素对乌骨鸡黑色素细胞的生长的作用是不同的,二价铁的细胞毒性显着高于三价铁。Ca2+在0.1-6.4 mmol/L浓度区间内会极显着的促进黑色素细胞的生长,1.6 mmol/L时促进作用最强。可知乌骨鸡黑色素细胞对Ca2+的耐受力远大于Fe3+和Fe2+,这可能和细胞内的黑色素含量有关。3,采用细胞划痕实验研究Ca2+、Fe2+、Fe3+、Fe2++Fe3+对乌骨鸡黑色素细胞迁移能力的影响。0.4mmol/L CaCl2能显着促进黑色素细胞迁移。使用钙离子拮抗剂维拉帕米阻断了L-型钙通道后,细胞外钙内流受阻,钙对黑色素细胞的迁移能力的促进作用显着下降,说明L-型钙通道是钙离子进入黑色素细胞的重要通道。FeCl3（0.040.16 mmol/L）对细胞迁移率具有明显促进作用,随FeCl3的浓度增大而增大,并呈铁剂量依赖。0.01 mmol/L FeSO4对细胞迁移率具有明显促进作用,继续增大浓度,则对细胞迁移没有促进作用。0.04 mmol/L FeCl3和（0.010.08）mmol/LFeSO4联用时即Fe3+:Fe2+=4:1、2:1、1:1、1:2,对细胞相对迁移率具有促进作用,并随着Fe2+浓度增大,促进作用减弱,可见两者联合并未有良好的协同作用。肌肽通过螯合Fe3+和Fe2+离子,或是将Fe3+还原为Fe2+离子发挥抑制作用,进而进一步验证了Fe3+和Fe2+离子对黑色素细胞的迁移的促进作用。明胶酶谱法检测乌骨鸡黑色素细胞上清液和全蛋白的基质金属蛋白酶的酶活,发现在同等培养条件下,阳性对照组有蓝色背景下的白色条带（MMPs的活性条带）,而黑色素细胞未见白色条带。说明在此培养条件下,乌骨鸡黑色素细胞不表达基质金属蛋白酶。4,溶剂A溶解精制黑色素得到黑色素标准品,分析比较精制黑色素和标准品黑色素的红外光谱图发现二者无明显差异,但各特征峰的吸收强度和宽度不同,标品黑色素烷烃结构吸收峰更强。可推断标品有酰胺结构和游离的羟基而精制黑色素有伯酰胺结构。5,发现了另一种独特的可以溶解乌骨鸡黑色素标品的溶剂B,在溶剂A中,黑色素标准品的最大溶解度为60ug/mL（25℃）,且溶剂在405nm处吸光度背景大。在溶剂B中,黑色素标品的最大溶解度为250ug/mL（25℃）,在405nm处溶剂吸光度背景小。溶剂B的细胞中黑色素含量的可见光分光光度法测定的方法学考察表明:乌骨鸡黑色素标品溶液在5250ug/mL范围内吸光度与浓度呈良好的线性关系,相关系数r=0.9995（n=9）。精密度实验,黑色素吸光度值的RSD为1.3%—2.0%;细胞样品在3h内稳定RSD为4.86%;试验重复性良好,RSD为4.4%。黑色素细胞样品平均加标回收率在95.2%103.6%之间,RSD为3.5%。6,酶学方法研究酪氨酸二钠、酪氨酸、葡萄糖、钙离子、不同价态的铁离子以及钙铁组合对乌骨鸡黑色素细胞黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的影响发现,酪氨酸二钠是增强乌骨鸡黑色素细胞黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的重要因子,适当的葡萄糖浓度会产生协同作用。高浓度的Ca2+（0.4-1.6mM）,低浓度的Fe2+（0.01mM）和Fe3+（0.01-0.04mM）对酪氨酸酶激活均有显着的促进作用。Ca2+、Fe3+和Fe2+均对黑色素细胞酪氨酸酶激活率有显着的促进作用,但联用后会降低各自的促进作用,而Fe3+和Fe2+联用时则对酪氨酸酶活无促进作用。7,荧光酶标仪定量检测钙铁元素对黑色素细胞内的ROS含量的影响,发现Ca2+（0.2-0.8mM）会显着提高黑色素细胞ROS含量,其中0.4mM促进作用最强。Fe2+和低浓度的Fe3+会降低黑色素细胞内ROS含量,且在此浓度下的钙离子和铁离子对黑色素细胞生长没有抑制作用,说明在钙铁的干预下,虽然黑色素细胞的ROS含量发生变化,但细胞内的ROS平衡并未失衡。8,新建立的黑色素含量测定方法考查卵黄总脂质、TPA、钙、铁元素对黑色素合成量的影响,结果表明,卵黄总脂质对低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞合成黑色素有明显的促进作用;TPA会抑制其促进作用。钙、铁元素对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素有明显促进作用,钙元素强于铁元素,且两者无协同作用,而该浓度下的二价和三价铁离子具有协同作用。钙、铁元素干预后,生物合成所获得的黑色素抗氧化能力显着增强了,以三价铁干预产生的黑色素抗氧化能力最强。9,Western bolt方法检测钙铁元素对酪氨酸相关蛋白酶1（TRP1）表达的影响,结果显示,Ca2+能显着促进黑色素细胞TRP1的表达,而Fe2+和Fe3+会显着抑制黑色素细胞TRP1的表达,而Fe2+和Fe3+联用时又会促进黑色素细胞TRP1的表达,Fe2+和Fe3+分别和Ca2+联用时,会显着抑制Ca2+对TRP1表达的促进作用,其中二价铁的抑制作用强于三价铁。10,采用钙离子拮抗剂维拉帕米阻断黑色素细胞钙离子通道后,细胞内钙离子含量减少,细胞黑色素含量显着降低,TRP1酶表达量减少,而黑色素含量依然显着高于对照组,因而说明黑色素细胞主要通过L-型钙离子通道摄取钙离子,影响黑色素合成和酪氨酸相关蛋白酶1的表达的,但也有其他摄入方式进入细胞参与黑色素合成。11,采用MTT法研究葡萄糖、过氧化氢、卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12细胞存活的影响。结果表明,高糖在72h内对细胞存活影响不大,48h除外;无糖在12-72h会显着抑制细胞存活,呈时间依赖性;1mM H2O2会显着抑制细胞存活,且呈时间依赖性;12h内,卵黄总脂质对细胞存活率无抑制作用。24h内,牛磺酸对细胞存活率无抑制作用。12h内,柠檬酸锌对细胞存活率无抑制作用。12,采用MTT法研究卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12细胞的H2O2和无糖损伤保护作用的影响。结果表明,低浓度卵黄总脂质、作用浓度的牛磺酸和柠檬酸锌对H2O2损伤内皮细胞的有保护作用。三者两两联合对H2O2损伤内皮细胞的保护作用弱于三者单独。然而,作用浓度的柠檬酸锌、牛磺酸和卵黄总脂质对无糖引起的内皮细胞的损伤没有保护作用。
二、牛磺酸对过氧化氢致细胞过氧化损伤的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、牛磺酸对过氧化氢致细胞过氧化损伤的影响（论文提纲范文）
（1）保肝型中草药的筛选及对花鲈氧化应激的缓解作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 鱼类细胞培养研究进展 |
| 1.2 过氧化氢诱导的肝脏氧化损伤研究进展 |
| 1.2.1 氧化应激对动物的影响 |
| 1.2.2 过氧化氢诱导肝脏氧化损伤的研究现状 |
| 1.2.3 过氧化氢诱导肝脏氧化损伤的作用机制 |
| 1.3 中草药保肝作用研究进展 |
| 1.3.1 中草药在水产养殖中的应用 |
| 1.3.2 中草药对肝脏氧化损伤的保护作用 |
| 1.4 研究目的与意义 |
| 1.5 研究内容及技术路线 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 第2章 过氧化氢诱导花鲈肝细胞氧化损伤模型的构建 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验对象及管理 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 花鲈原代肝细胞分离、纯化与培养 |
| 2.1.4 过氧化氢诱导肝细胞氧化损伤模型的构建 |
| 2.1.5 数据统计与分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 花鲈原代肝细胞形态观察 |
| 2.2.2 不同浓度H_2O_2对肝细胞存活率的影响 |
| 2.2.3 H_2O_2对肝细胞上清液中GPT、GOT和 LDH活性的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 中草药对花鲈肝细胞氧化损伤的缓解作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验对象及管理 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 花鲈原代肝细胞分离、纯化与培养 |
| 3.1.4 中草药的制备 |
| 3.1.5 中草药对肝细胞活力的影响 |
| 3.1.6 试验分组设计 |
| 3.1.7 CCK-8 法测定细胞活力 |
| 3.1.8 生化指标的测定 |
| 3.1.9 数据统计与分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 中草药对花鲈肝细胞活力的影响 |
| 3.2.2 各组GPT、GOT和 LDH活性的变化 |
| 3.2.3 各组T-AOC、SOD和 MDA水平的变化 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 饲料中添加中草药对花鲈生长性能、肝脏抗氧化力的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 中药的制备 |
| 4.1.2 饲料制备 |
| 4.1.3 试验动物饲养及管理 |
| 4.1.4 样品采集 |
| 4.1.5 指标计算 |
| 4.1.6 样品测定 |
| 4.1.7 数据统计与分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 姜黄和复方中草药对花鲈生长性能的影响 |
| 4.2.2 姜黄和复方中草药对花鲈全体组成成分的影响 |
| 4.2.3 姜黄和复方中草药对花鲈血清生化指标的影响 |
| 4.2.4 姜黄和复方中草药对花鲈肝脏抗氧化力的影响 |
| 4.2.5 姜黄和复方中草药对花鲈肝脏抗氧化基因相对表达量的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 姜黄和复方中草药对花鲈生长性能的影响 |
| 4.3.2 姜黄和复方中草药对花鲈肝脏抗氧化能力的影响 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 饲料中添加中草药对花鲈急性氧化应激的保护作用 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验分组和过氧化氢作用时间与浓度的确定 |
| 5.1.2 样品的采集 |
| 5.1.3 样品测定 |
| 5.1.4 数据统计与分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 确定H_2O_2造成花鲈肝脏氧化损伤浓度和时间的预实验 |
| 5.2.2 饲料中添加中草药对氧化应激花鲈成活率的影响 |
| 5.2.3 饲料中添加中草药对急性氧化应激花鲈肝脏组织学的影响 |
| 5.2.4 饲料中添加中草药对急性氧化应激花鲈血清生化指标的影响 |
| 5.2.5 饲料中添加中草药对急性氧化应激花鲈肝脏抗氧化力的影响 |
| 5.2.6 中草药对氧化应激花鲈肝脏抗氧化基因相对表达量的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果情况 |
（2）外源牛磺酸对卵形鲳鲹生长及牛磺酸合成调控的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 引言 |
| 1.1 牛磺酸简介 |
| 1.2 牛磺酸含量特征 |
| 1.3 外源牛磺酸对鱼类生长性能的影响 |
| 1.4 外源牛磺酸对鱼类抗氧化免疫功能的影响 |
| 1.5 外源牛磺酸对鱼类牛磺酸合成的影响 |
| 1.6 外源牛磺酸对鱼类肠道微生物的影响 |
| 1.7 其他影响 |
| 1.7.1 神经调节 |
| 1.7.2 抗应激能力 |
| 1.7.3 繁殖性能 |
| 1.7.4 视功能 |
| 1.7.5 解毒功能 |
| 1.8 本研究的目的与意义及技术路线 |
| 第二章 牛磺酸对卵形鲳鲹生长性能、体组成及抗氧化免疫的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验饲料 |
| 2.1.2 实验鱼和饲养管理 |
| 2.1.3 实验仪器与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 样品采集 |
| 2.2.2 生长指标计算 |
| 2.2.3 全鱼体成分的测定 |
| 2.2.4 血清抗氧化免疫指标的测定 |
| 2.2.5 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 牛磺酸对卵形鲳鲹生长的影响 |
| 2.3.2 牛磺酸对卵形鲳鲹体组成的影响 |
| 2.3.3 牛磺酸对卵形鲳鲹抗氧化和免疫能力的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 牛磺酸对卵形鲳鲹组织牛磺酸沉积及合成调控的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验饲料 |
| 3.1.2 实验鱼与饲养管理 |
| 3.1.3 实验仪器与试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 样品采集 |
| 3.2.2 组织牛磺酸含量测定 |
| 3.2.3 牛磺酸合成酶活性测定 |
| 3.2.4 序列获取与验证 |
| 3.2.5 基因序列生物信息学分析 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR |
| 3.2.6.1 总RNA提取 |
| 3.2.6.2 cDNA合成 |
| 3.2.6.3 实时荧光定量PCR |
| 3.2.7 CDO重组表达 |
| 3.2.7.1 CDO基因重组载体的构建及表达 |
| 3.2.7.2 CDO蛋白放大培养 |
| 3.2.7.3 上清中亲和层析纯化CDO蛋白 |
| 3.2.7.4 CDO蛋白浓度和质量检测 |
| 3.2.8 数据处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 组织牛磺酸含量 |
| 3.3.2 牛磺酸合成酶活性 |
| 3.3.3 牛磺酸合成基因序列特征分析 |
| 3.3.3.1 ToCBS cDNA序列分析 |
| 3.3.3.2 ToCSE cDNA序列分析 |
| 3.3.3.3 ToCDO cDNA序列分析 |
| 3.3.3.4 ToCSAD cDNA序列分析 |
| 3.3.3.5 ToADO cDNA序列分析 |
| 3.3.4 系统发育分析 |
| 3.3.4.1 ToCBS系统发育分析 |
| 3.3.4.2 ToCSE系统发育分析 |
| 3.3.4.3 ToCDO系统发育分析 |
| 3.3.4.4 ToCSAD系统发育分析 |
| 3.3.4.5 ToADO系统发育分析 |
| 3.3.5 牛磺酸合成基因组织表达分析 |
| 3.3.6 外源牛磺酸添加对卵形鲳鲹合成基因表达影响 |
| 3.3.7 CDO重组蛋白 |
| 3.3.7.1 重组蛋白的诱导表达 |
| 3.3.7.2 CDO重组蛋白的纯化 |
| 3.3.7.3 CDO蛋白浓度及质量检测 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 牛磺酸对卵形鲳鲹肠道微生物及免疫功能的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验饲料 |
| 4.1.2 实验鱼与饲养管理 |
| 4.1.3 实验仪器与试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 样品采集 |
| 4.2.2 肠道微生物多样性测定 |
| 4.2.2.1 DNA提取及PCR扩增 |
| 4.2.2.2 文库构建和上机测序 |
| 4.2.2.3 测序数据处理 |
| 4.2.3 肠道免疫基因表达分析 |
| 4.2.4 数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 肠道微生物分析 |
| 4.3.1.1 序列分析 |
| 4.3.1.2 Alpha多样性分析 |
| 4.3.1.3 Beta多样性分析 |
| 4.3.1.4 肠道菌群组成及其相对丰度分析 |
| 4.3.2 肠道免疫基因表达 |
| 4.4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 附录 Ⅰ |
| 附录 Ⅱ |
| 致谢 |
（3）丹酚酸与丹参酮组分配伍对糖尿病肾病协同效应的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 文献研究 |
| 参考文献 |
| 第二章 丹参有效组分的制备与分析 |
| 第一节 丹酚酸类成分的制备与分析 |
| 第二节 丹参酮类成分的制备与分析 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于细胞模型的丹酚酸与丹参酮组分配伍效应及量效关系研究 |
| 第一节 基于HK-2细胞模型的丹酚酸与丹参酮组分配伍效应及量效关系研究 |
| 第二节 基于HBZY-1细胞模型的丹酚酸与丹参酮组分配伍效应及量效关系研究 |
| 参考文献 |
| 第四章 基于小剂量STZ联合膳食诱导大鼠慢性肾损伤模型的丹酚酸与丹参酮配伍效应与作用机制研究 |
| 第一节 丹酚酸与丹参酮配伍效应评价 |
| 参考文献 |
| 第二节 基于动态代谢组学糖尿病肾病发病机制的研究 |
| 第三节 基于代谢组学的丹酚酸与丹参酮组分配伍作用机制研究 |
| 参考文献 |
| 第四节 基于肠道菌群的丹酚酸与丹参酮配伍调节作用与机制 |
| 参考文献 |
| 小结与展望 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12神经衰老细胞的保护作用及其对细胞代谢物的影响研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 复方铁线蕨颗粒总黄酮的提取、含量测定以及体外抗氧化活性检测 |
| 1.1 仪器与试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 2 研究复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12 神经细胞衰老的改善作用及其作用机制. |
| 2.1 仪器与试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 3 通过~1H-NMR测定复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12 神经细胞衰老代谢物的影响 |
| 3.1 仪器与试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 细胞衰老模型建立的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 导师评阅表 |
（5）牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstarct |
| 1 前言 |
| 1.1 腹水综合症 |
| 1.2 心肌肥大 |
| 1.2.1 肉鸡心肌肥大的发生及其机制 |
| 1.2.2 心肌肥大的预防 |
| 1.2.3 ISO与心肌肥大的关系 |
| 1.3 .牛磺酸 |
| 1.3.1 牛磺酸的理化性质 |
| 1.3.2 牛磺酸与心肌肥大 |
| 1.4 本研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 动物日粮 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 主要试验仪器 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 动物饲养试验 |
| 2.2.2 H9c2细胞培养试验 |
| 2.3 数据的统计与分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化能力及Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.1.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化酶能力作用的影响 |
| 3.1.2 牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.2 牛磺酸对H9c2 细胞抗氧化能力及Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 3.2.1 牛磺酸对 H9c2 细胞抗氧化酶能力的影响 |
| 3.2.2 牛磺酸对H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 牛磺酸对肉鸡心肌及H9c2细胞中抗氧化能力的影响 |
| 4.1.1 牛磺酸对肉鸡心肌抗氧化能力的影响 |
| 4.1.2 牛磺酸对H9c2细胞抗氧化能力的影响 |
| 4.2 牛磺酸对肉鸡心肌及H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 4.2.1 牛磺酸对肉鸡心肌Keap1/Nrf2 信号通路m RNA表达的影响 |
| 4.2.2 牛磺酸对H9c2 细胞Keap1/Nrf2 信号通路因子m RNA表达的影响 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）蛋白组学研究鸡胚肝脏组织中抗氧酶的关键调控蛋白和调控机制（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 鸡胚蛋 |
| 1.1.1 鸡胚蛋简介 |
| 1.1.2 孵化过程对鸡蛋营养物质的影响 |
| 1.1.3 鸡胚的研究进展 |
| 1.2 蛋白质组学 |
| 1.2.1 蛋白质组学 |
| 1.2.2 蛋白质组技术 |
| 1.3 氧化应激 |
| 1.3.1 活性氧 |
| 1.3.2 氧化应激 |
| 1.3.3 抗氧化成分的研究 |
| 1.3.4 鸡胚中天然抗氧化剂 |
| 1.3.5 鸡胚发育过程中生成的抗氧化剂 |
| 1.3.6 鸡胚抗氧化机制的研究进展 |
| 第二章 蛋白组学的测序与分析结果 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.2.3 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 鸡胚肝脏组织的提取 |
| 2.3.2 鸡胚肝脏蛋白样品的制备和定量 |
| 2.3.3 蛋白质酶解与脱盐处理 |
| 2.3.4 TMT标记 |
| 2.3.5 高效液相色谱与质谱分析 |
| 2.3.6 生物信息学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 蛋白质数据质控分析 |
| 2.4.2 蛋白的功能注释 |
| 2.4.3 鸡胚Day12和Day16 肝脏差异蛋白分析 |
| 2.4.4 鸡胚Day16和Day20 肝脏差异蛋白的鉴定结果 |
| 2.4.5 鸡胚Day12和Day20 肝脏差异蛋白的鉴定结果 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 过氧化氢诱导鸡胚肝细胞氧化模型的建立 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料和试剂 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验试剂 |
| 3.2.3 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 鸡胚原代肝细胞的分离培养 |
| 3.3.2 H_2O_2浓度的初步选择 |
| 3.3.3 实验分组 |
| 3.3.4 肝细胞存活率的检测 |
| 3.3.5 PI染色 |
| 3.3.6 MDA、SOD、CAT的测定 |
| 3.4 实验结果与讨论 |
| 3.4.1 过氧化氢浓度区间的选择结果 |
| 3.4.2 过氧化氢处理对鸡胚肝细胞存活率的影响 |
| 3.4.3 不同浓度过氧化氢对肝细胞MDA产量的影响 |
| 3.4.4 过氧化氢对肝细胞SOD和 CAT活性的影响 |
| 3.6 讨论 |
| 3.7 结论 |
| 第四章 牛磺酸对鸡胚肝细胞的保护作用及对GPX1的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料和试剂 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 实验试剂 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 鸡胚原代肝细胞的培养 |
| 4.3.2 药物安全浓度的确定 |
| 4.3.3 鸡胚肝细胞活力的检测 |
| 4.3.4 荧光定量PCR检测GPX1 |
| 4.4 实验结果与讨论 |
| 4.4.1 牛磺酸的安全浓度的筛选结果 |
| 4.4.2 鸡胚肝细胞的活力变化 |
| 4.4.3 提取的RNA含量与纯度 |
| 4.4.4 荧光定量PCR |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 结论 |
| 第五章 总结与创新 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 创新点 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 |
| 1 )参加的学术交流与科研项目 |
| 2 )发表的学术论文 |
（7）人参多糖改善氧化应激致肝细胞损伤的药效物质及作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 文献综述 |
| 实验研究 |
| 第一章 人参活性成分的的筛选 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂与试药 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞复苏及培养 |
| 2.2 细胞传代 |
| 2.3 细胞冻存 |
| 2.4 氧化应激损伤模型的建立 |
| 2.5 人参物质基础的筛选 |
| 2.6 人参提取物的给药剂量及过氧化氢的损伤浓度的确定 |
| 2.7 实验分组 |
| 2.8 MTT法测定细胞活性 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 人参中三种物质基础的含量测定结果 |
| 3.2 人参三种有效成分的筛选 |
| 3.3 人参三种物质基础对氧化应激损伤肝细胞的保护作用 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 人参多糖成分分析及对过氧化氢损伤肝细胞凋亡的影响研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 实验分组 |
| 1.4 主要仪器 |
| 1.5 实验试剂盒 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 人参多糖的成分分析 |
| 2.2 SOD及MDA含量检测 |
| 2.3 胞内ROS的检测 |
| 2.4 流式细胞术测定细胞凋亡 |
| 2.5 线粒体膜电位检测 |
| 2.6 BCA法蛋白含量测定 |
| 2.7 荧光定量PCR |
| 2.8 Western blot检测目标蛋白的表达 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 人参多糖成分分析 |
| 3.2 人参多糖对过氧化氢损伤肝细胞的SOD、MDA的检测 |
| 3.3 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞ROS的变化情况 |
| 3.4 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞的凋亡保护作用 |
| 3.5 人参多糖降低氧化应激损伤肝细胞线粒体膜电位的功能障碍 |
| 3.6 人参多糖对过氧化氢损伤肝细胞Bax和Bcl-2 qPCR水平的测定 |
| 3.7 人参多糖对过氧化氢损伤的肝细胞Bax和 Bcl-2蛋白的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 人参多糖对过氧化氢损伤肝细胞糖异生途径的作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 肝糖原的测定 |
| 2.3 ATP含量检测 |
| 2.4 G6P与PEPCK含量测定 |
| 2.5 BCA法蛋白含量测定 |
| 2.6 QPCR水平测定 |
| 2.7 Western blot检测目标蛋白的表达 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞肝糖原的变化情况 |
| 3.2 人参多糖升高氧化应激损伤肝细胞的ATP含量 |
| 3.3 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞G6P及 PEPCK的变化情况 |
| 3.4 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞PGC-1α与 G6P qPCR水平的测定 |
| 3.5 人参多糖对氧化应激损伤肝细胞的PGC-1α蛋白的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 本文创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（8）牛磺酸对大鼠黄曲霉毒素B1中毒的干预作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 黄曲霉毒素概述 |
| 1.1 AFB1的理化性质 |
| 1.2 AFB1的检测方法 |
| 1.3 AFB1的危害 |
| 1.4 AFB1的毒力 |
| 1.5 AFB1的代谢及致病机理 |
| 1.6 AFB1的脱毒方法 |
| 2 牛磺酸概述 |
| 2.1 牛磺酸的理化性质 |
| 2.2 牛磺酸在体内的分布与代谢 |
| 2.3 牛磺酸的生物学作用 |
| 2.4 牛磺酸的应用 |
| 3 研究目的与意义 |
| 第一章 AFB1中毒大鼠模型的制备 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 试验材料 |
| 1.1.2 试验方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.2.1 肝脏病理组织学观察结果 |
| 1.2.2 肾脏组织学观察结果 |
| 1.2.3 大鼠脾脏组织学观察结果 |
| 1.3 讨论与小结 |
| 1.3.1 讨论 |
| 1.3.2 小结 |
| 第二章 牛磺酸对AFB1致大鼠肝脏、肾脏和脾脏损伤的干预作用研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验材料 |
| 2.1.2 试验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 牛磺酸对AFB1中毒大鼠一般状态的影响 |
| 2.2.2 牛磺酸对AFB1中毒大鼠体重及采食量变化的影响 |
| 2.2.3 牛磺酸对AFB1中毒大鼠肝脏的保护作用 |
| 2.2.4 牛磺酸对AFB1中毒大鼠肾脏的保护作用 |
| 2.2.5 牛磺酸对AFB1中毒大鼠脾脏的保护作用 |
| 2.3 讨论与小结 |
| 2.3.1 讨论 |
| 2.3.2 小结 |
| 第三章 牛磺酸对AFB1致大鼠肝脏、肾脏和脾脏损伤的干预机制研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 牛磺酸对AFB1中毒大鼠肝脏的保护机制研究 |
| 3.2.2 牛磺酸对AFB1中毒大鼠肾脏保护的机制研究 |
| 3.2.3 牛磺酸对AFB1中毒大鼠脾脏保护的机制研究 |
| 3.3 讨论与小结 |
| 3.3.1 讨论 |
| 3.3.2 小结 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 创新点 |
| 4.3 不足之处及展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读学位论文期间发表文章 |
（9）过氧化氢诱导的肉鸡氧化损伤机制及牛磺酸的缓解作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照 |
| 前言 |
| 上篇 文献综述 |
| 第一章 氧化过程和动物氧化应激 |
| 1.氧化过程及主要反应 |
| 2.动物的氧化应激及防御机制 |
| 2.1 主要应激源 |
| 2.2 活性氧的产生 |
| 2.3 氧化应激的生物效应 |
| 2.4 机体的防御机制 |
| 3.氧化应激对家禽生产的影响 |
| 3.1 生长性能 |
| 3.2 肉品质 |
| 第二章 氧化损伤机制的研究进展 |
| 1 细胞凋亡在氧化损伤中的变化规律 |
| 1.1 细胞凋亡 |
| 1.2 细胞凋亡与氧化应激 |
| 2 细胞自噬在氧化损伤中的变化规律 |
| 2.1 细胞自噬 |
| 2.2 细胞自噬与氧化应激 |
| 3 NF-κB信号通路在氧化损伤中的调控作用 |
| 3.1 NF-κB信号通路 |
| 3.2 NF-κB信号通路与氧化应激 |
| 第三章 牛磺酸生物学功能研究进展 |
| 1 牛磺酸的理化性质及抗氧化特性 |
| 1.1 牛磺酸的理化性质 |
| 1.2 牛磺酸的抗氧化特性 |
| 2 牛磺酸的生物学功能 |
| 2.1 牛磺酸与中枢神经系统 |
| 2.2 牛磺酸与肺脏和肾脏功能 |
| 2.3 牛磺酸的抗癌效应 |
| 3 牛磺酸在家禽生产上的应用研究进展 |
| 3.1 提高生长性能和繁殖性能 |
| 3.2 提高机体免疫力 |
| 3.3 增强机体抗氧化能力 |
| 本研究的目的和意义 |
| 技术路线 |
| 下篇 试验研究 |
| 第四章 腹腔注射过氧化氢对肉鸡生长性能和肉品质的影响及其对肝脏和肌肉氧化损伤作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计及方法 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标和方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 腹腔注射H_2O_2对肉鸡生长性能的影响 |
| 2.2 腹腔注射H_2O_2对肉鸡器官指数的影响 |
| 2.3 腹腔注射H_2O_2对肉鸡相对肌肉重和肉品质的影响 |
| 2.4 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏和肌肉ROS水平的影响 |
| 2.5 腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌线粒体复合物Ⅰ和Ⅲ活性及膜电位的影响 |
| 2.6 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏和肌肉组织形态的影响 |
| 2.7 腹腔注射H_2O_2对肉鸡血清抗氧化指标的影响 |
| 2.8 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏抗氧化指标的影响 |
| 2.9 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肌肉抗氧化指标的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第五章 腹腔注射过氧化氢诱导的肉鸡肝脏和肌肉氧化损伤机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计及方法 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标和方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏细胞凋亡的影响 |
| 2.2 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肌肉细胞凋亡的影响 |
| 2.3 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏细胞自噬的影响 |
| 2.4 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肌肉细胞自噬的影响 |
| 2.5 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肝脏NF-κB信号通路的影响 |
| 2.6 腹腔注射H_2O_2对肉鸡肌肉NF-κB信号通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第六章 过氧化氢对小鼠成肌细胞的氧化损伤作用研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计及方法 |
| 1.3 测定指标和方法 |
| 1.4 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同浓度H_2O_2对C2C12细胞存活率的影响 |
| 2.2 H_2O_2对C2C12细胞ROS水平的影响 |
| 2.3 H_2O_2对C2C12细胞凋亡的影响 |
| 2.4 H_2O_2对C2C12细胞自噬的影响 |
| 2.5 H_2O_2对C2C12细胞NF-κB信号通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第七章 牛磺酸对过氧化氢诱导的肉鸡肌肉氧化损伤缓解作用及机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验设计及方法 |
| 1.3 样品采集 |
| 1.4 测定指标和方法 |
| 1.5 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡生长性能和肌肉相对重量的影响 |
| 2.2 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡肉品质的影响 |
| 2.3 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌ROS水平的影响 |
| 2.4 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌线粒体复合物Ⅰ和Ⅲ活性及膜电位的影响 |
| 2.5 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌抗氧化指标的影响 |
| 2.6 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌细胞凋亡的影响 |
| 2.7 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌细胞自噬的影响 |
| 2.8 日粮添加牛磺酸及腹腔注射H_2O_2对肉鸡胸肌NF-κB信号通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 总体讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 本文创新点及有待进一步研究的问题 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 |
（10）钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 黑色素的简介 |
| 1.3 黑色素的合成 |
| 1.3.1 黑色素合成途径 |
| 1.3.2 黑色素合成相关的通路 |
| 1.3.3 钙铁元素对黑色素合成的影响 |
| 1.4 黑色素生成量的测定方法 |
| 1.4.1 HPLC方法 |
| 1.4.2 紫外-可见分光光度法 |
| 1.5 主要研究内容 |
| 1.6 本研究的创新性 |
| 第2章 低黑色素起点黑色素细胞生长的培养基组分的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 2.2.3 仪器与设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞 |
| 2.3.2 乌骨鸡黑色素细胞最适细胞接种浓度研究 |
| 2.3.3 葡萄糖对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.4 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,FBS和卵黄总脂质对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.5 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,TPA和卵黄总脂质的乌骨鸡黑色素细胞生长曲线研究 |
| 2.3.6 低浓度葡萄糖(16.8 mM)背景下,FBS、卵黄总脂质、TyrNa2对乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.7 钙、铁元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的研究 |
| 2.3.8 MTT法测定乌骨鸡黑色素细胞存活率 |
| 2.4 统计学分析 |
| 2.5 结果与讨论 |
| 2.5.1 低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞形态观察 |
| 2.5.2 黑色素细胞数和OD值关系曲线 |
| 2.5.3 葡萄糖浓度对乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.4 高浓度葡萄糖(25mM)背景下,FBS和卵黄总脂质对乌骨鸡黑色素细胞生长的促进作用 |
| 2.5.5 高浓度葡萄糖(25mM)和5%FBS培养背景下,TPA、卵黄总脂质的乌骨鸡黑色素细胞生长曲线 |
| 2.5.6 在低浓度葡萄糖(16.8 mM)背景下FBS、卵黄总脂质、TyrNa2 对乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.7 不同价态的Fe元素对低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 2.5.8 Ca元素对体外培养低黑色素起点的乌骨鸡黑色素细胞生长的影响 |
| 本章小结 |
| 第3章 钙铁元素对黑色素细胞迁移能力的影响研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器与设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 乌骨鸡黑色素细胞的培养 |
| 3.3.2 实验分组 |
| 3.3.3 划痕实验检测钙铁对乌骨鸡黑色素细胞迁移影响研究 |
| 3.3.4 明胶酶谱检测乌骨鸡黑色素细胞基质金属蛋白酶的表达活性 |
| 3.4 统计学分析 |
| 3.5 结果与讨论 |
| 3.5.1 细胞培养因子对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.2 钙对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.3 铁对乌骨鸡黑色素细胞迁移力的影响 |
| 3.5.4 维拉帕米和肌肽对钙铁促进黑色素细胞迁移作用的干预 |
| 3.5.5 明胶酶谱检测乌骨鸡黑色素细胞MMPs的表达活性 |
| 本章小结 |
| 第4章 乌骨鸡黑色素含量测定的方法学研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与设备 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 仪器设备与试剂 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 乌骨鸡黑色素的标准品的制备 |
| 4.3.2 乌骨鸡黑色素标准品红外图谱分析 |
| 4.3.3 两种溶解黑色素标品溶剂的比较 |
| 4.3.4 乌骨鸡黑色素细胞中黑色素含量测定及溶剂B的方法学考察 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 乌骨鸡黑色素标准品的制备 |
| 4.4.2 精制黑色素和黑色素标品的红外吸收图谱 |
| 4.4.3 两种溶解黑色素标品溶剂的比较 |
| 4.4.4 溶剂B溶解的乌骨鸡黑色素的含量测定方法学考察 |
| 本章小结 |
| 第5章 钙铁元素对黑色素细胞生物合成黑色素的影响研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与设备 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验试剂以及溶液配制方法 |
| 5.2.3 仪器与设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 黑色素细胞培养 |
| 5.3.2 酶学方法测定酪氨酸酶活性 |
| 5.3.3 乌骨鸡黑色素细胞内ROS含量的测定 |
| 5.3.4 实验分组 |
| 5.3.5 黑色素含量测定 |
| 5.3.6 DPPH清除能力的测定乌骨鸡细胞黑色素的抗氧化能力 |
| 5.3.7 乌骨鸡黑色素细胞钙离子水平检测 |
| 5.3.8 Ca、Fe元素对乌骨鸡黑色素细胞酪氨酸相关蛋白酶1(TRP1)表达量的影响 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 卵黄总脂质、TPA对乌骨鸡黑色素细胞黑色素合成的影响 |
| 5.4.2 不同培养基因子对乌骨鸡黑色素生物合成关键酶酪氨酸酶活性的影响 |
| 5.4.3 钙铁元素对乌骨鸡黑色素黑色细胞ROS含量的影响 |
| 5.4.4 钙、铁元素对黑色素合成量的影响以及其黑色素抗氧化能力的差别. |
| 5.4.5 钙、铁元素对酪氨酸相关蛋白酶1(TRP1)表达的影响 |
| 5.4.6 维拉帕米对黑色素细胞黑色素合成的干预作用 |
| 本章小结 |
| 第6章 卵黄总脂质、牛磺酸、柠檬酸锌对无糖和H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究 |
| 6.1 引言 |
| 6.2 实验材料与设备 |
| 6.2.1 材料与试剂 |
| 6.2.2 仪器与设备 |
| 6.3 实验方法 |
| 6.3.1 MTT法测定HUVEC-12 细胞的存活率 |
| 6.3.2 H_2O_2 和葡萄糖对HUVEC-12 细胞增殖的影响 |
| 6.3.3 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12 细胞存活率的影响 |
| 6.3.4 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对H_2O_2 和低浓度葡萄糖诱导HUVEC-12 细胞增殖抑制作用的影响 |
| 6.4 数据处理 |
| 6.5 结果与讨论 |
| 6.5.1 葡萄糖和H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤模型的建立 |
| 6.5.2 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对HUVEC-12 细胞存活率的影响 |
| 6.5.3 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 6.5.4 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌联用对H_2O_2 诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 6.5.5 卵黄总脂质、牛磺酸和柠檬酸锌对无糖诱导HUVEC-12 细胞损伤的保护作用 |
| 本章小结 |
| 第7章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 进一步工作方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
四、牛磺酸对过氧化氢致细胞过氧化损伤的影响（论文参考文献）
- [1]保肝型中草药的筛选及对花鲈氧化应激的缓解作用研究[D]. 王秀琴. 集美大学, 2021(01)
- [2]外源牛磺酸对卵形鲳鲹生长及牛磺酸合成调控的影响[D]. 马启伟. 上海海洋大学, 2021(01)
- [3]丹酚酸与丹参酮组分配伍对糖尿病肾病协同效应的研究[D]. 王钦汶. 南京中医药大学, 2021
- [4]复方铁线蕨颗粒总黄酮对PC12神经衰老细胞的保护作用及其对细胞代谢物的影响研究[D]. 热孜艳木·亚森. 新疆医科大学, 2021(08)
- [5]牛磺酸对低温环境下肉鸡心肌抗氧化作用影响的研究[D]. 李丽杰. 沈阳农业大学, 2020(04)
- [6]蛋白组学研究鸡胚肝脏组织中抗氧酶的关键调控蛋白和调控机制[D]. 何程实. 合肥工业大学, 2020(02)
- [7]人参多糖改善氧化应激致肝细胞损伤的药效物质及作用机制研究[D]. 杨松. 长春中医药大学, 2020(09)
- [8]牛磺酸对大鼠黄曲霉毒素B1中毒的干预作用及机制研究[D]. 唐日益. 沈阳农业大学, 2019(03)
- [9]过氧化氢诱导的肉鸡氧化损伤机制及牛磺酸的缓解作用研究[D]. 陈祥兴. 南京农业大学, 2018(07)
- [10]钙、铁对乌骨鸡黑色素细胞生物合成黑色素的干预[D]. 徐德利. 南昌大学, 2016(05)