PRV SA株gB基因和EGFP基因在BHK细胞中的融合表达研究

论文摘要

为了研究gB蛋白在细胞内的作用位点,试验以猪伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）SA株为模板,设计特异性引物,扩增gB基因保守片段;以pEGFP-N1质粒为模板扩增EGFP基因;以gB基因与EGFP基因胶回收产物为模板,用gB基因上游引物及EGFP基因下游引物通过重叠延伸PCR（SOE PCR）技术获得gB/EGFP融合基因;构建pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒,转染乳仓鼠肾细胞（BHK细胞）,采用Western-blot技术及荧光显微镜检测荧光蛋白在细胞内的表达情况。结果表明:试验成功扩增到300 bp的gB基因、760 bp的EGFP基因及1 060 bp的gB/EGFP融合基因;成功构建出pcDNA3.1/gB/EGFP重组表达质粒并转染BHK细胞;Western-blot技术及荧光显微镜检测显示,融合蛋白在BHK细胞中成功表达。说明通过荧光蛋白研究目的蛋白的作用位点是可行的。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 菌种、质粒、细胞及病毒株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 主要仪器
• 2 方法
•   2.1 融合基因的SOE PCR扩增
•     2.1.1 引物的设计与合成
•     2.1.2 融合基因的SOE PCR扩增
•   2.2 重组表达质粒的双酶切鉴定
•   2.3 gB蛋白的Western-blot 检测
•   2.4 重组表达质粒的表达及验证
• 3 结果与分析
•   3.1 融合基因的SOE PCR扩增
•   3.2 重组表达质粒的双酶切鉴定
•   3.3 gB蛋白的Western-blot 检测
•   3.4 重组表达质粒的表达及验证
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 韩强,郭广君,吕素芳,沈志强

关键词: 猪伪狂犬病病毒,融合基因,作用位点,乳仓鼠肾细胞,表达载体,荧光蛋白

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东绿都生物科技有限公司,山东省滨州畜牧兽医研究院山东省兽医生物技术重点实验室,山东省滨州畜禽蜂胶疫苗研究开发推广中心

基金: 山东省自然科学基金项目(ZR2012CQ012),山东省畜牧兽医科技服务业沈志强创新团队项目(鲁发服务[2014]01041号),山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目(SDAIT-08-17)

分类号: S852.651

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.08.0237

页码: 77-80+181

总页数: 5

文件大小: 483K

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