杨华何跃东
（珠海市妇幼保健院妇科广东珠海519000）
（四川大学华西第二医院妇科四川成都610000）
【摘要】目的探讨子宫内膜样腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E)和P53的表达情况及意义。方法应用免疫组织化学技术检测124例子宫内膜样腺癌及20例正常子宫内膜组织中eIF4E及P53蛋白的表达情况，同时结合病人的临床病理资料进行分析。结果子宫内膜样腺癌和正常子宫内膜组织中eIF4E的阳性表达率分别为72.6%和5.0%,差异有统计学意义（P=0.000＜0.05）。eIF4E的表达与肿瘤组织分化程度明显相关（p=0.039<0.05），而与FIGO分期无明显相关（p=0.296>0.05）,P53蛋白与eIF4E的表达水平之间无明显相关（p=0.052>0.05）。结论过度表达的eIF4E和p53可作为判断子宫内膜恶变及恶性程度的分子标志。
【关键词】真核细胞翻译起始因子4EP53蛋白子宫内膜样腺癌免疫组织化学
ExpressionandsignificanceofeIF4E、P53inendometrioidadenocarcinoma
【Abstract】Objective:Toexploretheexpressionandclincopathologicfeaturesofeukaryoticinitiationfactor4E(eIF4E)andproteinofp53inendometrioidadenocarcinoma.Methods:TheexpressionofeIF4Eandp53weredeterminedbyimmumo-histochemistryinboth124casesofendometrioidadenocarcinomaand20casesofnormalendometria.Results:ThepositiverateofeIF4Eexpressioninendometrioidadenocarcinomaandnormalendometriawas72.6%and5.0%，respectively，andthisdifferencehadthestatisticalsignificance(P<0.05).TheeIF4Eexpressionshowedsignificantcorrelationwiththegradeoftumordifferentiation(P=0.039)，butnosignificantcorrelationwithFIGOstaging(P=0.296).TherewereonstasticalsignificancefortherelationbetweentheexpressionofeIF4Eandp53（p=0.052）Conclusion:TheoverexpressionofeIF4Eandp53inendometriacouldserveasamolecularmarkjudgingthemalignancyandgrademalignancy.
【Keywords】eukaryoticinitiationfactor4Eendometrioidadenocarcinoma;proteinofp53immunohistochemistry
真核细胞翻译起始因子4E（eukaryotictranslationinitiationfactoreIF4E）是一个分子量为25×103的多肽，其基因位于4q21－25，在帽依赖性翻译的调节中起中心作用。近年来，mRNA帽结合蛋白eIF4E在细胞恶性转化进程中的作用受到广泛关注。在乳腺癌、头颈部癌、子宫颈癌、胃癌等多种肿瘤中发现eIF4E的过表达，并且与疾病进展相关；对于P53与子宫内膜样腺癌的研究颇多，国内外报道结论不尽相同，变异较大，其表达阳性率大约为16.7%-81.6%。但目前尚无eIF4E与子宫内膜样腺癌、p53关系的相关报道。本实验采用免疫组化SP法检测124例子宫内膜样腺癌和20例正常子宫内膜中eIF4E和P53的表达水平并分析其临床意义。
1资料与方法
1.1一般资料：收集2003年1月至2007年8月四川大学华西第二医院病理科存档的病理诊断为子宫内膜样腺癌的石蜡标本共124例。其中高分化腺癌44例，中分化（含高-中分化）腺癌40例，低分化（含中-低分化）腺癌40例。FIGOⅠ期有65例，FIGOⅡ期有34例，FIGOⅢ期有25例（临床分期标准为子宫内膜癌手术-病理分期FIGO,2000）。20例正常子宫内膜组织来源于四川大学华西第二医院病理科存档的正常子宫内膜。
1.2实验试剂：eIF4E鼠抗人单克隆抗体购自美国Santacruz公司；兔抗人p53多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；SP试剂盒购自北京中衫金桥生物技术有限公司。eIF4E工作浓度为1：100；P53工作浓度为1：200。
1.3实验方法：所有蜡块常规脱蜡水化；用磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗3min×3次，柠檬酸缓冲液微波修复20min后，蒸馏水冲洗,PBS冲洗3min×3次。过氧化物酶阻断溶液室温下孵育10min，蒸馏水冲洗,PBS浸泡3min×3次；滴加封闭用正常山羊血清室温孵育10min,倾去；滴加稀释的特异性鼠抗人eIF4E单抗/兔抗人p53多克隆抗体，4℃过夜，PBS冲洗3min×3次；滴加生物素标记的羊抗鼠IgG，室温孵育10min，PBS冲洗3min×3次；滴加链霉素抗生素-过氧化物酶溶液，室温孵育10min，PBS冲洗3min×3次。DAB显色，自来水充分冲洗；梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。PBS液代替一抗作阴性对照。
1.4结果判断：所有切片的观察均经三名病理科医生独立在光镜下完成。eIF4E以细胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性，不出现者为阴性。结果由阳性率和阳性细胞的染色强度评分共同决定。阳性率评分为：0分，阳性细胞<5%；1分，阳性细胞占5%～；2分，阳性细胞占25%～；3分，阳性细胞占75%～。阳性细胞强度评分为：0分，无染色；1分，弱染色；2分，中等强度染色；3分，强染色。阳性细胞<5%者无论染色强度如何，均判为（-）；评分之和≥2分者判为阳性（+）,P53以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，计算阳性细胞百分率，结果分级标准：阳性细胞百分率<10%为（-），阳性细胞百分率≥10%为（+）。
1.5统计学处理：所有资料经Excel建立数据库，使用SPSS10.0统计软件进行处理，采用χ2检验，分析eIF4E与p53的相关性采用kappa系数分析。P＜0.05为相差显著。
2结果
eIF4E在子宫内膜样腺癌的表达主要定位于肿瘤细胞胞浆中，呈弥漫性或散在分布的棕黄色颗粒。在124例子宫内膜癌中，eIF4E的阳性表达率为72.6%（90/124），对照组中eIF4E的阳性表达率为5.0%（1/20），差异有统计学意义。（P=0.000＜0.05）。在子宫内膜样腺癌中，eIF4E的表达率随病理分级和临床分期递增。在高分化、中分化、低分化组其表达率分别为59.1%、77.5%、82.50%，组间差异有统计学意义（p=0.039<0.05）。在FIGOⅠ期、FIGOⅡ期、FIGOⅢ期中，eIF4E的表达率分别为67.7%、73.5%、84.0%。组间差异无统计学意义（p=0.296＞0.05）。在124例子宫内膜癌中p53的阳性表达率为46.8%（58/124），对照组中p53的阳性表达率为5.0%（3/20），差异有统计学意义。（P=0.008＜0.05）。在子宫内膜样腺癌中，p53的表达率临床分期递增；与病理分级无明显相关。在高分化、中分化、低分化组其表达率分别为45.5%、42.5%、52.5%，组间差异无统计学意义（p=0.653＞0.05）。在FIGOⅠ期、FIGOⅡ期、FIGOⅢ期中，P53的表达率分别为38.5%、47.1%、68.0%。组间差异有统计学意义（P=0.042＜0.05）。（见表1）。内膜样腺癌组中eIF4E与p53的表达之间无明显相关（p=0.052＞0.05）（见表2）。
表1eIF4和P53在内膜样腺癌组及对照组的表达
3讨论
eIF4E是一个分子量为25×103的多肽，其基因位于4q21－25，在帽依赖性翻译的调节中起中心作用。在翻译起始阶段，eIF4E可特异地与mRNA结合，解旋mRNA5，端非翻译区（5’UTR），向mRNA翻译起始点扫描。90%的mRNA的5，UTRs少于200个核甘酸序列并缺少上游的AUG。这样的mRNA就是所谓的“强”mRNA，编码管家蛋白质。相反,“弱”mRNA包含G+C丰富的5’UTR，具有起稳定作用的二级结构和/或上游AUG，这类mRNA不能被有效的翻译。“弱”mRNA主要编码原癌蛋白(c-myc、cyclinD1、ODC)、血管形成因子(FGF2、VEGF)、能使基质降解和肿瘤浸润的降解酶(MMP2、9)等。eIF4E可以提高VEGF、FGF-2，VPF（血管渗透因子）的翻译促进肿瘤血管生成，通过c-myc、cyclinD调节细胞周期，促进细胞增长；可改变与肿瘤转移有关基因CD44、nm23[1]而增强转移能力。
Kerekatte等[2]首先发现eIF4E在人乳腺肿瘤中过度表达。LiBD[3]发现当乳腺癌eIF4E的含量超过正常对照7倍时,肿瘤复发率、死亡率在统计学上有显著差异。ZhouS[4]认为eIF4E可与临床分期、淋巴结转移、以及血管密度一样，作为评价肿瘤预后的独立指标，并可作为基因治疗的靶点。SorrellsDLJr[5]分析了头颈部肿瘤（HNSCCs）标本中无肿瘤手术切缘(无癌区)、癌旁组织区(过渡区)以及肿瘤核心区elF4E的基因和蛋白表达水平，发现eIF4E的表达水平逐渐升高。而手术切缘区高表达的elF4E可能是HNSCCs容易原位复发的原因[6]。Nathan[7]发现HNSCCs手术切缘区elF4E表达增高的病人有50％在一年内复发。Franklin[8]也认为HNSCCs手术切缘区elF4E表达阴性的患者，生存时间更长、预后更好。
目前国内外尚无elF4E在子宫内膜癌中表达的相关报道。本实验发现在子宫内膜样腺癌中存在elF4E的过表达（阳性表达率为72.6%）,显著高于正常的子宫内膜组织中的5.0%，且elF4E的表达水平与分化程度相关，分化程度越低，elF4E的表达水平越高：在高、中、低分化组其阳性表达率为59.1%、77.5%、82.5%，p=0.039<0.05，差异有统计学意义。而分化程度与临床预后密切相关，分化越低，预后越差。故elF4E的表达水平对子宫内膜样腺癌的预后有一定的实践指导意义。
elF4E的表达水平还与FIGO分期相关。在FIGOⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期中其阳性表达率分别为67.7%、73.5%、84.0%。这可能与elF4E促进肿瘤的浸润和转移有关。但本实验中elF4E的表达水平虽然随FIGO分期的升高而升高，但P=0.296>0.05，差异无统计学意，其可能的原因可能是由实验误差所致或者是elF4E主要在细胞恶性转化和肿瘤早期起作用，而与恶性肿瘤的进展关系不大所致。
关于P53与子宫内膜癌的研究颇多，国内外报道结论不尽相同，变异较大，其表达阳性率大约为16.7%-81.6%，本实验通过对124例子宫内膜样腺癌和20例正常子宫内膜组织中p53进行检查，发现子宫内膜腺癌组的P53阳性表达率显著升高，差异有统计学意义。这说明p53的突变失活可能在子宫内膜腺癌的发生过程中起重要作用，周琦[9]等认为：p53过表达不是正常子宫内膜和不典型增生子宫内膜的特征，仅发生在肿瘤的晚期阶段，Kohler[10]和Bur[11]等研究表明：p53基因突变和过表达与晚期子宫内膜（Ⅲ～Ⅳ期）、乳头状腺癌、腹腔液瘤细胞阳性、短生存期有关，裴海英[12]等研究提示：p53的阳性表达率与子宫内膜癌的组织分型、PR/ER、肌层浸润、淋巴转移、脉管浸润、年龄、是否绝经等因素有关。故可认为p53过表达是子宫内膜癌的预后影响因子。本实验中，p53的表达率与子宫内膜癌的临床分期密切相关（FIGO1期、FIGOⅡ期、FIGOⅢ期阳性率分别为38.5%、47.1%、68.0%;P=0.042），FIGOⅢ期阳性率显著高于FIGO1期、FIGOⅡ期，与文献报道一致。关于p53与病理分级之间的关系，OzalpS[13]等研究提示：p53与子宫内膜腺癌的病理分级密切相关，病理分级越高，分化越差，其阳性率越高，本实验中p53的阳性表达率与病理分级无关，在高分化组、中分化组、低分化组中其阳性率分别为45.5%、42.5%、52.5%，P=0.635，差异无统计学意义，与文献报道不符，二者之间的关系尚需增加样本量进一步研究明确。
eIF4E过表达，促使“弱”mRNA的翻译水平增加，而“弱”mRNA主要编码原癌蛋白（c-myc、cyclinD1、ODC）、血管形成因子（FGF2、VEGF）、能使基质降解和肿瘤浸润的降解酶（MMP2、9）等，对肿瘤的发生起“正向”的促进作用；P53基因是肿瘤抑制基因，其生理功能是诱导细胞阻滞、抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、促进DNA损伤的修复等，对肿瘤的发生起“负向”的抑制作用。其阳性表达提示p53基因突变而致“负向”的抑制作用缺失，本实验发现二者表达无明显相关性（p=0.052＞0.05），提示二者可能从两种不同的途径参与子宫内膜腺癌的发生、发展。
综上所述，过度表达的eIF4E和p53可以作为子宫内膜恶性改变及判断恶性程度的分子标志，但其在子宫内膜腺癌的确切机制尚需要进一步的研究阐明。
参考文献
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