导读:本文包含了酶纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:氧化酶,性质,马斯,糖化酶,蛋白,芽孢,青皮。
酶纯化论文文献综述
马倩倩[1]（2019）在《白腐菌Pleurotus ostreatus漆酶纯化和酶学性质研究》一文中研究指出漆酶是一种含铜多酚氧化酶,主要来源于微生物、植物、动物,真菌是能分泌漆酶的主要微生物。漆酶作为一种绿色催化剂,其催化底物非常广泛,且大多数催化反应的唯一产物为水,对环境无害,漆酶的优秀性能使其广泛应用于各个领域。自然条件下生长的菌株漆酶产量及漆酶活力普遍较低,筛选漆酶高产菌株,获得性能优良的漆酶,开发漆酶的应用研究具有重要意义。本论文以一株复合诱变筛选后的糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)高产菌株为研究菌株,从其发酵液分离纯化出一种漆酶,并对分离纯化后的纯漆酶进行酶学性质研究,为漆酶进一步应用于工业化大规模生产提供一些理论和技术支持。利用粗酶液脱色7种不同结构类型的染料,研究漆酶对不同染料的脱色效果,为染料脱色研究提供参考。以糙皮侧耳C1诱变高产菌株F-13为研究菌株,在液体培养基中摇瓶培养,温度30℃,转速220r/min,发酵9d后漆酶活力达到最高值148U/L。粗酶液经过(NH_4)_2SO_4分级沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephasex G-100凝胶层析,最终得到电泳纯的漆酶,漆酶比活力达到96.4U/mg,纯化倍数达27.5倍,回收率为6.5%。对分离纯化后的漆酶进行酶学性质研究,结果发现,所得漆酶分子量为60.5kDa;最适反应pH和温度为5.0和50℃,pH为4.0-6.0时漆酶活力较高,pH为3.0、4.0和5.0时稳定性较好,温度为40℃和50℃时漆酶稳定性很好;对底物的适宜程度由高到低依次为:ABTS、DMP、愈创木酚,此漆酶在最适底物ABTS条件下的K_m为0.194mmol/L,V_(max)为9.25μmolL~(-1)min~(-1);Cu~(2+)能很好地激发漆酶活性,Al~(3+)、Ba~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)、K~+在一定浓度时对酶活起促进作用,Hg~(2+)、Pb~(2+)、Cd~+对酶活起一定的抑制作用,Fe~(3+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)对酶活无显着影响。将粗酶液应用于7种不同结构类型的染料脱色,结果表明,在染料浓度为100mg/L,各染料的最适pH及温度下,蒽醌类染料茜素红2h时脱色率可达95.3%;苯甲烷类染料碱性品红和孔雀石绿2h时脱色率分别达到90.1%和93.6%;苯胺类染料中性红及杂环类染料次甲基蓝,2h时的脱色率分别达到81.5%和85.9%;偶氮类染料甲基橙和刚果红,2h的脱色率仅为20.8%和13.8%。表明此漆酶对蒽醌类和苯甲烷类染料脱色作用显着,对苯胺类和杂环类染料脱色效果良好,对偶氮染料脱色作用差。(本文来源于《辽宁工业大学》期刊2019-03-01）
廖丹葵,熊珍爱,周利琴,孙丽霞,伍善广[2]（2018）在《猪肺血管紧张素转化酶纯化工艺中试放大研究》一文中研究指出采用DEAE离子交换层析-超滤法纯化猪肺血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE),在小试工艺条件的基础上对DEAE离子交换层析进行中试放大。以ACE比活及酶活回收率为指标,考察工艺放大后的纯化效果,并进一步完善纯化工艺条件。结果表明,DEAE离子交换层析柱放大15倍后,最终得到的ACE比活为(1.05±0.04)U/mg,达到电泳级纯,与小试工艺的纯化结果无明显差异,酶活回收率为34.6%±0.3%,高于小试工艺。由此认为,猪肺ACE提取放大纯化工艺是可行的,且可提高纯化效率,该工艺为更大规模的纯化ACE奠定了基础。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年12期）
孙欣欣,张兴国,伍校军,汤欢,宋晓梅[3]（2017）在《叁种酶纯化常用试剂对Bradford法的干扰研究》一文中研究指出为了研究常用酶纯化试剂对考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量的影响,试验以牛血清白蛋白(BSA)为标准蛋白,探索硫酸铵、乙醇和丙酮对该方法的干扰规律和消除这些干扰的方法,然后在丙酮沉淀脂肪酶试验中进行验证。结果表明:硫酸铵对蛋白质含量测定值影响较小,而高浓度的丙酮、乙醇造成测定值偏高数倍;将蛋白质样品稀释5倍可基本消除丙酮、乙醇的干扰。在验证试验中,将上清液稀释5倍,然后测定蛋白质含量,解决了随着丙酮浓度升高,沉淀和上清液蛋白质含量测定值同时增加的问题。说明稀释是解决高浓度乙醇、丙酮对Bradford法干扰的有效方法。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年19期）
宁程茜,叶展,王斌,胡传荣,刘零怡[4]（2016）在《糖化酶纯化棉籽分离蛋白的工艺研究》一文中研究指出以脱酚棉籽为原料,对比碱溶酸沉法和酶水解-超声波辅助碱溶酸沉法对棉籽蛋白提取率的影响发现,酶解和超声辅助可以显着增加碱溶酸沉的蛋白提取率。在酶水解-超声波辅助碱溶酸沉提取蛋白的基础上,利用糖化酶纯化所提取的蛋白粗品,并在单因素试验的基础上采用正交试验优化棉籽蛋白纯化工艺,得到高纯棉籽蛋白制备的最佳工艺条件为:酶解温度60℃,酶解pH 4.5,酶解时间120 min,糖化酶用量0.4%,液料比9︰1(mL/g)。验证试验表明,利用该工艺两次纯化棉籽蛋白所得的纯化产品蛋白质含量可达93.10%。采用SDS-PAGE对纯化后的棉籽分离蛋白亚基相对分子质量分布进行分析,结果表明,纯化产品中蛋白质亚基相对分子质量主要为55.1 k Da与47.5 k Da。该研究可为棉籽蛋白在食品工业中的应用提供理论参考。(本文来源于《食品工业》期刊2016年09期）
李星硕,朱玥明,管于平,柏玮,贾士儒[5]（2016）在《产胶原酶菌株的筛选鉴定、发酵优化及胶原酶纯化》一文中研究指出【目的】从肉联厂附近土壤中筛选出新型的胶原酶菌种,并通过提高其产酶量后研究其胶原酶的纯化方法,进一步研究该胶原酶对胶原蛋白的降解效率。【方法】经形态特征、生理生化特征以及16S rRNA基因进化树分析鉴定该菌株,并对该菌株产酶发酵条件进行优化,最终利用强阴离子交换树脂对该菌株所产的胶原酶进行分离纯化。【结果】该菌株鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。对该菌株的产酶发酵条件进行优化,结果表明最适碳源为2.0%葡萄糖、最适氮源为1.5%胰蛋白胨、最适无机盐为0.005%Ca~(2+);初始发酵液pH 7.5、发酵温度37℃,在最适条件下,该菌株发酵液的酶活为(65.81±2.06)U/m L,相比优化前(26.7±1.9)U/m L,酶活提高约1.5倍。对该菌株所产的胶原酶进行分离纯化,得到1个分子量约为100 k Da、纯度大于90%的胶原酶,其比酶活力约为(7615.0±78.7)U/mg。【结论】该研究所发现的胶原酶酶活较高,能够使胶原蛋白在短时间内被有效地降解为具有生物活性的胶原短肽,在食品、医疗、保健品、化妆品等领域具有较广泛的应用前景。(本文来源于《微生物学报》期刊2016年06期）
胡一杰（Alhujaily[6]（2014）在《Physisporinus sp漆酶纯化、性质及对染料的脱色研究》一文中研究指出漆酶是一类含铜的氧化还原酶，它能催化酚类化合物，将酚类化合物进行单电子氧化，形成酚自由基，进而产生非酶催化的自由基反应。由于漆酶特殊的催化性能和广泛的底物范围，在生物技术领域中得到广泛的应用。本实验以Physisporinussp.为出发菌株，研究了在液体培养体系下，不同碳源、氮源和诱导物对其产漆酶的影响，对其胞外漆酶进行了分离纯化和酶学特性的研究，并将纯化的漆酶应用于偶氮类染料的脱色，主要结论如下：本文研究了不同碳源、氮源和诱导物对Physisporinus sp.胞外产漆酶的影响，研究发现最适碳源和最适氮源分别为葡萄糖和胰蛋白胨，藜芦醇为该菌株胞外产漆酶的最佳诱导物。通过盐析、疏水层析和离子交换层析，可以将胞外漆酶进行分离纯化。通过80%饱和度的盐析操作，漆酶比活为116.4U/mg，收率80.8%，纯化倍数为1.5倍；疏水层析后收率为42.1%，纯化倍数为10.1倍，漆酶比活为781.9U/mg；采用阴离子交换层析，最终的收率为20.4%，纯化19.6倍，漆酶比活为1515.1U/mg。SDS-PAGE结果显示叁步分离后的漆酶蛋白达到电泳纯，其表观分子量为62KDa。以ABTS为底物，该漆酶的最适pH值为3.0，最适反应温度为60℃。该漆酶在40℃条件下保持稳定，50℃下保存1h剩余酶活为84%，60℃下保存1h剩余酶活为50%，表现出良好的温度稳定性。该漆酶在pH﹥6.0条件下比较稳定。以ABTS和DMP为底物测定其动力学常数，结果表明，与DMP相比，该漆酶对ABTS显示较好的亲和力，其Km值和Vmax值分别为1.27×10-3和16.87μM/（L﹒min），而以DMP为底物，其Km值和Vmax值分别为2.82×10-3和5.24μM/（L﹒min）。多数的金属离子对漆酶的活性略有提升，而Fe2+、Ni2+、Co2+和Hg2+能显着抑制漆酶的酶活。有机溶剂能够显着抑制漆酶的酶活，其中5%的甲醇抑制效果最弱。纯化后的漆酶应用于偶氮类染料SY,，DR5B，CB38和DB22的脱色，实验显示在没有介体存在下，该漆酶对四种偶氮染料显示出较低的脱色能力，3小时后四种染料的脱色率分别为13%，2%，7%和12%。然而在丁香醛作为介体的条件下，该漆酶对四种偶氮类染料显示出较好的脱色能力。在丁香醛浓度为0.5mM时，10min该漆酶对SY的脱色率为98%；0.1mM的丁香醛存在下，10min该漆酶对DR5B的脱色率则可以达到97%；丁香醛浓度为0.1mM时，10min该漆酶对CB38和DB22的脱色率分别为53%和48%。然而随着染料浓度的增加，该漆酶对四种染料的脱色效果逐渐降低。(本文来源于《华中科技大学》期刊2014-05-01）
黄世臣,赵敏[7]（2014）在《Bipolaris australiensis HD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质》一文中研究指出[目的]为了获得B.bipolaris HD-1胆红素氧化酶纯品,确定酶的同源性及其常规酶学性质。[方法]将B.bipolaris HD-1发酵液依次通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析和凝胶过滤层析确定蛋白的纯度、浓度和酶活力;通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)法获得氨基酸序列,并利用Mascot软件在NCBI蛋白库中的比对,以确定同源蛋白来源;用SDS-PAGE方法测其表观分子量;用等电聚焦方法测定等电点;用Linwerver-Burk双倒数作图法测定米氏常数;并对该酶的酶学性质进行了常规的测定。[结果]获得具有胆红素氧化酶酶活性的电泳纯单体蛋白,酶活为46 000 U/L,比活为1.15 U/mg;MALDI-TOF共获得135个氨基酸,该蛋白与来源于Helminthosporium tritici-vulgaris的漆酶前体蛋白序列同源性达100%;蛋白的表观分子量为68 kDa;pI为4.1;它对ABTS和胆红素的米氏常数分别为Km(ABTS)=1.8×10-5mol/L(pH 3.0)和Km(bilirubin)=2.7×10-5mol/L(pH 7.5);对胆红素的最适催化活性为36℃,酶在-40℃下可保持2年,酶活保持在90%以上,在pH 8~9.5下可保持相当高的催化胆红素活性,能够耐受高浓度的硝酸钠和尿素,低浓度的迭氮化钠对酶活有促进作用而高浓度则抑制,对氯化钠、溶解氧敏感。[结论]该蛋白具有典型的胆红素氧化酶特性,又存在明显的不同。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2014年11期）
王和利,陈迪新,王洪涛[8]（2013）在《核桃青皮多酚氧化酶纯化及酶学性质研究》一文中研究指出采用简化的方法对核桃(Juglans rejia L.)青皮中多酚氧化酶(PPO)进行纯化,并对其酶学性质进行了研究。结果表明,核桃青皮PPO经过丙酮沉淀、金属螯合亲和层析,被纯化了1.42倍,回收率为0.21%。以邻苯二酚为底物,该酶最适pH是6.0,最适温度是20℃;抗坏血酸对核桃青皮PPO的活性有很强的抑制作用,亚硫酸氢钠和柠檬酸也能抑制核桃青皮PPO的活性;当Cu2+浓度在0.01~0.05 mmol/L时,Cu2+对PPO有激活作用,超过这个范围对PPO活性反而有抑制作用。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2013年19期）
张清霞,杨荣华,徐敬友,纪兆林,陈夕军[9]（2013）在《粘帚霉GR-6菌株种类鉴定及其β-1,3-葡聚糖酶纯化与酶学性质》一文中研究指出为明确粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对植物病原真菌的作用机制,建立β-1,3-葡聚糖酶分离纯化体系,根据形态特征和ITS序列分析鉴定GR-6种类,用60%饱和度的丙酮沉淀酶蛋白质,再通过DE-52离子交换层析和Sephadex G-75凝胶柱层析纯化蛋白质。结果表明,GR-6菌株ITS序列与粉红粘帚霉的相似度最高,达到98%,结合形态学特征将该菌株鉴定为粉红粘帚霉。SDS-PAGE显示纯化后得到一种分子量为4.11×104的蛋白质,该蛋白质具有β-1,3-葡聚糖酶活性。经该酶处理后的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)和棉花黄萎病菌(Verticilliun dahliae)菌丝颜色变浅、细胞轮廓变模糊、甚至菌丝细胞逐渐消失,可见,粉红粘帚霉GR-6产生的β-1,3-葡聚糖酶对这两种植物病原真菌菌丝有直接破坏作用。纯化后的β-1,3-葡聚糖酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4,酶液在50℃以下或pH 5时保存0.5 h,酶活性基本保持稳定;该葡聚糖酶对一些金属离子较敏感,其中Zn2+、Sn2+、Ca2+、Fe2+等使酶活性显着降低,而Mn2+和K+对酶活性没有明显的影响。建立的β-1,3-葡聚糖酶纯化体系稳定可靠。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2013年04期）
韩增华,刘佳宁,党阿丽,张丕奇,戴肖东[10]（2012）在《黑木耳漆酶纯化及部分漆酶特性的研究》一文中研究指出黑木耳漆酶研究可为漆酶的进一步分离纯化、基因克隆表达和大规模生产应用奠定基础。对黑木耳"黑29"菌株漆酶粗酶液进行硫酸铵分级沉淀后,通过Native SDS-PAGE电泳检测,存在3种漆酶LacA、LacB、LacC,分子量分别为60,34,19 kD。经硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sephacel柱层析技术分离得一纯化成分LacC,纯化倍数7.60,酶活性回收4.28%。对LacC的pH、温度、金属离子和Km值等部分酶学性质进行研究发现,该酶氧化ABTS的Km值为1.18×10-6mol/L,催化氧化底物ABTS的最适pH为3.8,在pH 3.0~4.6表现出较强的稳定性;最适反应温度为55℃,低于50℃时有较好的热稳定性;金属离子Ag+对漆酶有激活作用,而Fe3+、Mn2+、Co2+则有抑制作用。(本文来源于《菌物研究》期刊2012年04期）
酶纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
采用DEAE离子交换层析-超滤法纯化猪肺血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE),在小试工艺条件的基础上对DEAE离子交换层析进行中试放大。以ACE比活及酶活回收率为指标,考察工艺放大后的纯化效果,并进一步完善纯化工艺条件。结果表明,DEAE离子交换层析柱放大15倍后,最终得到的ACE比活为(1.05±0.04)U/mg,达到电泳级纯,与小试工艺的纯化结果无明显差异,酶活回收率为34.6%±0.3%,高于小试工艺。由此认为,猪肺ACE提取放大纯化工艺是可行的,且可提高纯化效率,该工艺为更大规模的纯化ACE奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酶纯化论文参考文献
[1].马倩倩.白腐菌Pleurotusostreatus漆酶纯化和酶学性质研究[D].辽宁工业大学.2019
[2].廖丹葵,熊珍爱,周利琴,孙丽霞,伍善广.猪肺血管紧张素转化酶纯化工艺中试放大研究[J].食品工业科技.2018
[3].孙欣欣,张兴国,伍校军,汤欢,宋晓梅.叁种酶纯化常用试剂对Bradford法的干扰研究[J].黑龙江畜牧兽医.2017
[4].宁程茜,叶展,王斌,胡传荣,刘零怡.糖化酶纯化棉籽分离蛋白的工艺研究[J].食品工业.2016
[5].李星硕,朱玥明,管于平,柏玮,贾士儒.产胶原酶菌株的筛选鉴定、发酵优化及胶原酶纯化[J].微生物学报.2016
[6].胡一杰（Alhujaily.Physisporinussp漆酶纯化、性质及对染料的脱色研究[D].华中科技大学.2014
[7].黄世臣,赵敏.BipolarisaustraliensisHD-1胆红素氧化酶纯化、鉴定及其酶学性质[J].安徽农业科学.2014
[8].王和利,陈迪新,王洪涛.核桃青皮多酚氧化酶纯化及酶学性质研究[J].湖北农业科学.2013
[9].张清霞,杨荣华,徐敬友,纪兆林,陈夕军.粘帚霉GR-6菌株种类鉴定及其β-1,3-葡聚糖酶纯化与酶学性质[J].江苏农业学报.2013
[10].韩增华,刘佳宁,党阿丽,张丕奇,戴肖东.黑木耳漆酶纯化及部分漆酶特性的研究[J].菌物研究.2012
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