粟酒裂殖酵母蛋白Atp4定位和功能的研究

论文摘要

研究粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）中Atp4的定位和参与线粒体功能的机制。借助于基因敲除、荧光显微镜观察、线粒体提取、生化试剂处理和Western blotting等技术开展研究。在甘油培养基上,Δatp4突变菌株表现出生长缺陷,是线粒体呼吸缺陷菌;Fluorescence microscope观察到用GFP标记的Atp4和线粒体是共定位的;采用生化试剂TritonX-100和蛋白酶K处理以及碳酸钠处理Atp4-Flag和yHL6381线粒体,结果表明Atp4定位在线粒体内膜;Western blotting实验结果表明Atp4缺失导致Cob1、Cox1、Cox2和Atp6表达量剧烈下降,Cox3和Cox4蛋白表达量也有略微下降。综上所述,Atp4在线粒体内膜发挥功能,对于维持线粒体编码蛋白的正常表达至关重要,是线粒体呼吸链功能的发挥所必需的。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 仪器和试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 Δatp4菌种构建
•     1.2.2 点板实验
•     1.2.3 Atp4定位预测分析
•     1.2.4荧光显微镜观察Atp4定位
•     1.2.5 线粒体定位实验
•     1.2.6 Western blotting检测线粒体蛋白表达量
• 2 结果
•   2.1 重组质粒的构建及酶切验证
•   2.2 Δatp4菌株的表型研究
•   2.3 Atp4的定位研究
•     2.3.1 荧光显微镜观察
•     2.3.2 TritonX-100和蛋白酶K处理
•     2.3.3 碱性碳酸钠处理
•   2.4 Atp4缺失导致线粒体呼吸链蛋白表达降低
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李琴,张琳琳,黄鹰

关键词: 线粒体,粟酒裂殖酵母,呼吸链

来源: 生物技术通报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 南京师范大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金项目(31770810,31470778)

分类号: Q78

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0111

页码: 59-63

总页数: 5

文件大小: 1565K

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